一、中药对心肌细胞凋亡的保护作用（论文文献综述）
柴晶美[1]（2021）在《基于线粒体功能探讨二参颗粒对心肌缺血模型的保护作用及相关机制研究》文中研究表明目的:本课题通过体内、外实验,利用病理学、分子生物学等分析方法,主要从氧化应激、凋亡、线粒体能量代谢、线粒体生物发生等方面证实二参颗粒的作用机制。探讨二参颗粒靶向调节SIRT1-PGC-1α-PPARα信号通路在心肌缺血中的作用机制,为二参颗粒治疗冠心病心肌缺血临床推广应用提供了实验依据。方法:1.参照《中国药典》2020版各药材含量测定方法、《香港药典》各药材液相指纹图谱检测方法,对二参颗粒进行高效液相指纹图谱实验,同时利用标准对照品确认有效成分的特征峰。再利用网络药理学通过TCMSP平台探索二参颗粒有效化学成分,在Genen Card数据库中搜索与冠心病心肌缺血的相关基因,构建化学成分-作用靶点网络图、PPI网络图;借助DAVID进行KEGG和GO富集分析,利用Schrodinger Maestro软件和在线工具进行分子对接验证,预测核心靶点。2.采用氯化钴建立心肌细胞缺氧缺血模型,采用酶联免疫法检测LDH,CK含量,SOD、MDA活性,采用TUNEL法检测心肌细胞凋亡情况,采用流式细胞术检测胞内活性氧含量和凋亡水平,采用蛋白质印迹分析细胞内Cleaved PARP、Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9和Bcl-2/Bax的表达水平。3.采用酶联免疫法检测线粒体呼吸链酶复合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅴ活性,应用Cytation5检测ATP含量,采用流式细胞术检测心肌胞线粒体膜电位（MMP）,采用蛋白质印迹分析细胞内PGC-1α、PPARα、SIRT1的表达水平。采用RT-PCR检测法检测SIRT1、PPARα、PGC-1α基因表达水平。4.通过腹腔注射垂体后叶素形成大鼠心肌缺血模型。检测二参颗粒对心肌缺血大鼠心电图的影响,采用HE染色检测法观察心肌组织病理形态变化,Masson染色检测法观察心肌组织纤维化程度,采用蛋白质印迹分析大鼠心肌组织中SIRT1、PGC-1α、PPARα的表达水平。采用RT-PCR检测法检测大鼠心肌组织中SIRT1、PGC-1α、PPARα基因表达水平。结果:1.采用《药色谱指纹图谱相似度评价系统2012.1版》对10批样品指纹图谱进行计算,相似度达0.997以上,具有良好的重现性,成分稳定。网络药理学结果,共筛选出221个化合物与264个靶点蛋白参与网络构建,基因富集分析显示,涉及960个GO条目,涉及KEGG信号通路共726条,分子对接结果表明,核心靶点与化学成分有较强的结合能力。并推断SIRT1-PGC-1α-PPARα信号通路可能是二参颗粒改善冠心病心肌缺血的核心潜在靶点。2.二参颗粒能有效降低细胞LDH、MDA、CK水平（P<0.05）,升高SOD水平（P<0.01或P<0.001）,明显降低胞内ROS含量（P<0.01或P<0.001）,减少凋亡细胞的表达（P<0.01或P<0.001）,下调凋亡蛋白Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9和Cleaved PARP的表达,增加Bcl-2/Bax的表达（P<0.01或P<0.001）。3.二参颗粒能有效增加线粒ComplexⅠ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅴ活性（P<0.05）,增加ATP含量（P<0.001）,升高线粒体膜电位水平,增加心肌细胞中目的蛋白PGC-1α、PPARα的表达（P<0.01或P<0.001）,增加心肌细胞中目的基因SIRT1、PGC-1α、PPARα的表达（P<0.05、P<0.01或P<0.001）。4.二参颗粒能有效改善心肌缺血大鼠的心电图改变。HE染色结果显示,模型组可见心肌细胞脂肪变性,心肌纤维水肿,着色变浅,淋巴细胞和肥大细胞点状浸润,多处心肌纤维溶解出现增生的结缔组织;与模型组比较,低剂量组可见心肌细胞脂肪变性,淋巴细胞和肥大细胞点状浸润,多处心肌纤维溶解出现增生的结缔组织。中剂量组心肌纤维分解清晰,染色均匀,少量水肿和淋巴细胞。高剂量组组织染色均匀,心肌纤维形态结构分界清晰,间质未见明显异常。Masson染色结果显示,模型组心肌组织局部可见胶原纤维增加,心肌纤维形态结构排列紊乱,胶原纤维增多、增粗,心肌纤维化明显。通过不同剂量二参颗粒干预后,二参颗粒低剂量组肌仍可见胶原纤维增多、增粗,心肌纤维化明显。二参颗粒中、高剂量组大鼠心肌组织中仅见轻度胶原纤维增生,纤维化程度明显减轻。二参颗粒能明显增加目的蛋白SIRT1、PGC-1α、PPARα的表达（P<0.01或P<0.001）,增加目的基因SIRT1、PGC-1α、PPARα的表达（P<0.05或P<0.01）。结论:1.初步明确了二参颗粒可以抑制Co Cl2诱导的心肌细胞ROS水平,从而达到降低氧化应激介导的心肌细胞凋亡的作用。2.二参颗粒通过促进SIRT1-PGC-1α-PPARα信号通路的激活,改善心肌缺血大鼠的组织形态变化以及心肌组织纤维化程度,增加线粒体呼吸链复合物的活性,促进ATP的合成,从而达到改善心脏功能的作用。
夏君彦[2]（2021）在《益气活血中药调节线粒体自噬改善心肌细胞缺氧复氧损伤的机制研究》文中研究说明研究背景及目的:心肌缺血再灌注损伤（myocardial ischemia/reperfusion injury,MIRI）是指恢复缺血心肌组织的血液灌注及氧供后反而加重心肌组织损伤的现象,其与缺血诱导的损伤共同决定最终的心肌梗死面积。有研究显示MIRI可占全部梗死心肌面积的50%。如何有效减轻MIRI,对于减少再灌注治疗术后并发症、提高生存率,具有重要的临床价值。目前研究表明,线粒体自噬对维持心肌细胞内环境稳态具有重要作用,通过调节线粒体自噬水平,可有效减轻MIRI。中医药在改善MIRI中具有较好前景,有临床研究显示,中药能明显改善经皮冠状动脉介入治疗（percutaneous coronary intervention,PCI）术后急性心肌梗死（acute myocardial infarction,AMI）患者的射血分数（ejection fraction,EF）、左室每搏量（stroke volume,SV）等心功能指标,降低术后肌酸激酶（creatine kinase,CK）和肌酸激酶同工酶（creatininekinase-MBisoenzyme,CK-MB）峰值水平,减少心绞痛的发作次数及程度,减少恶性心律失常及主要心血管不良事件发生率。有研究表明,益气活血中药及其复方对再灌注心肌的保护作用优于单用益气药或活血药,且具有多组分多靶点的协同作用。本研究在查阅文献和前期研究基础上,拟通过H9C2心肌细胞缺氧/复氧（hypoxia/reoxygenation,H/R）损伤模型,运用siRNA转染、激光共聚焦技术、腺病毒感染、RT-PCR及Western Blot等方法,从细胞、分子层面,围绕心肌细胞的损伤、线粒体损伤、线粒体自噬、自噬流等方面进行研究,以验证“益气活血中药配伍{三七总皂苷（PNS）+西洋参茎叶总皂苷（PQS）}可能通过HIF-1α/BNIP3通路介导的线粒体自噬发挥抗心肌细胞H/R损伤作用”假说的科学性。研究方法:1.制备H9C2心肌细胞H/R损伤模型:细胞融合度达70%以上后,预热PBS清洗1次,加入低糖无血清培养液,置于三气孵箱中（37℃,5%CO2,1%O2,94%N2,湿度≥95%）缺氧培养4h,更换为完全培养液于37℃5%CO2孵箱中复氧培养2h,4h,6h,CCK-8法检测不同复氧时间对H9C2心肌细胞的增殖影响。2.药物最佳剂量筛选:将PQS与PNS配置成40mg/ml、80mg/ml、160mg/ml的储存液,于H/R前12h将储存液1000倍稀释以1:1比例加入完全培养液中含药培养细胞,造模后用CCK-8法检测不同药物浓度对心肌细胞H/R损伤的增殖影响。3.siRNA脂质体转染以沉默目标基因BNIP3:用RT-PCR法检测转染时间分别为12h,24h,48h时siRNA转染效率,并筛选出最佳siRNA序列。4.分组及给药:分为5组:Control组、H/R组、H/R+PQS+PNS组、H/R+PQS+PNS+siBNIP3 组、H/R+PQS+PNS+siNC 组5.Annexin V-FITC/PI双染检测细胞凋亡率,JC-1染色检测ΔΨm,DCFH-DA染色检测细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）含量,Mitosox Red染色检测线粒体ROS含量,透射电镜下观察自噬水平及线粒体超微结构,以证实益气活血中药配伍（PNS+PQS）减轻心肌细胞H/R损伤的作用,及对线粒体损伤的保护作用。6.以mRFP-GFP-LC3腺病毒感染H9C2心肌细胞,激光共聚焦显微镜下观察细胞内自噬体数目及自噬溶酶体数目,判断益气活血中药配伍（PNS+PQS）对H/R损伤心肌细胞内自噬流的影响。7.Real time-PCR检测各组细胞间HIF-1α和BNIP3 mRNA表达情况。8.Western blot检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ、P62、Beclin1及线粒体自噬相关蛋白HIF-1a、BNIP3 表达情况。研究结果:I.CCK-8:与 Control 组相比,H/R 组 OD 值降低（P<0.01）;与单药 PQS、PNS 两组相比,H/R+PQS+PNS 组 OD 值升高（P<0.05）。2.流式细胞凋亡率:与Control组相比,H/R组H9C2心肌细胞凋亡率明显升高（P<0.05）;与 H/R 组相比,H/R+PNS+PQS 组、H/R+PNS+PQS+siBNIP3 组、H/R+PNS+PQS+siNC组细胞凋亡率得到显着改善（P<0.01）。ΔΨm:H/R组相较于Control 组△Ψm显着下降（P<0.01）;H/R+PNS+PQS 组、H/R+PNS+PQS+siBNIP3 组、H/R+PNS+PQS+siNC组相较于H/R组ΔΨm明显升高（P<0.01）。细胞内ROS含量:与Control组相比,H/R组细胞内ROS产生明显升高（P<0.01）;与H/R组相比,H/R+PNS+PQS 组、H/R+PNS+PQS+siBNIP3 组、H/R+PNS+PQS+siNC 组细胞内 ROS 产生明显减少（P<0.01）。线粒体ROS含量:与Control组相比,H/R组细胞线粒体ROS产生明显升高（P<0.01）;与 H/R 组相比,H/R+PNS+PQS 组、H/R+PNS+PQS+siBNIP3组线粒体ROS产生明显减少（P<0.01）。3.mRFP-GFP-LC3腺病毒感染观察自噬流:与Control组相比,H/R组自噬体数量明显升高（P<0.05）;与 H/R 组相比,H/R+PNS+PQS 组、H/R+PNS+PQS+siBNIP3 组、H/R+PNS+PQS+siNC组心肌细胞内自噬溶酶体数量显着升高（P<0.01）。透射电镜观察细胞自噬水平及线粒体超微结构:与Control组相比,H/R组自噬水平明显升高（P<0.01）;与 H/R 组相比,H/R+PNS+PQS 组自噬水平明显下降（P<0.05）,H/R+PNS+PQS+siBNIP3组、H/R+PNS+PQS+siNC组自噬水平有下降趋势（P>0.05）。与Control组相比,H/R组线粒体外形肿胀、嵴型异常表现,具有双层膜结构的自噬体数量增多（P<0.01）;与H/R组相比,H/R+PNS+PQS 组、H/R+PNS+PQS+siBNIP3 组、H/R+PNS+PQS+siNC 组可见线粒体超微结构改善,线粒体外形肿胀减轻,嵴型较为完整。4.RT-PCR:与Control组相比,H/R组HIF-1α的mRNA表达量明显升高（P<0.01）;与H/R组相比,H/R+PNS+PQS组HIF-1a的mRNA表达量显着下降（P<0.01）;与H/R+PNS+PQS 组相比,H/R+PNS+PQS+siBNIP3组HIF-1α的mRNA 表达量明显升高（P<0.01）。与Control组相比,H/R组BNIP3的mRNA表达量明显升高（P<0.01）;与H/R组相比,H/R+PNS+PQS组BNIP3的mRNA表达量显着下降（P<0.01）;与H/R+PNS+PQS+siBNIP3 组相比,H/R+PNS+PQS 组和 H/R+PNS+PQS+siNC 组 BNIP3 的mRNA 表达量明显升高（P<0.01）。Western blot:LC3-Ⅱ/Ⅰ、P62、Beclin1、HIF-1α、BNIP3蛋白表达水平组间比较差异均无统计学差异（P>0.05）。结论:1.益气活血中药配伍（PNS+PQS）能减轻心肌细胞H/R损伤,其共同作用效果优于单药PNS或PQS。2.益气活血中药配伍（PQS+PNS）能减少H/R损伤心肌细胞凋亡率、维持ΔΨm、减少胞内及线粒体ROS含量、保护线粒体结构。3.益气活血中药配伍（PQS+PNS）可能通过降低过度激活的自噬水平,增加自噬溶酶体的生成、畅通自噬流,发挥抗心肌细胞H/R损伤的作用。4.益气活血中药配伍（PQS+PNS）对H/R损伤心肌的保护作用可能与下调HIF-1a/BNIP3通路介导的线粒体自噬相关。
吴昱杰[3]（2021）在《复方人参补气颗粒对心梗后心衰大鼠的影响及抗内质网应激作用研究》文中指出心力衰竭（Heart Failure）是多种病因造成的心脏结构或功能损伤,最终导致心室泵血功能下降的综合征,目前已成为全球性健康负担,且逐渐显示年轻化趋势。心衰早期,冠状动脉供血急剧性减少或中断,局部心肌缺血性坏死,存活心肌逐渐代偿性肥厚,引起心室重构。若血管堵塞持续时间过长,则心肌转变为不可逆损伤,诱发多种病理功能改变,继而使得心肌细胞中糖类和脂肪等物质代谢紊乱,心脏能量代谢途径改变,最终导致心功能下降,加重心力衰竭。心衰在中医界无明确定义,依据其证候特征和病因病机将其归为“胸痹”、“真心痛”、“心水”等范畴。气虚证被认为是慢性心衰的常见证型。基于中医辩证基础,“益气法”为治疗心血管疾病如心衰、心梗等行之有效的方法。复方人参补气颗粒是本课题组根据临床经验研发的具有专利保护的组方颗粒剂,其由人参为主药、黄芪为辅药所制备,前期临床研究已证实其对慢性心衰所致心气虚证具有显着疗效。基于此,深入研究本组方发挥作用的机理与途径,明确其作用靶标,对于临床用药、复方新药的研制有着良好的参考价值。近年来,众多研究证实过度内质网应激（Endoplasmic reticulum stress,ERS）与心血管疾病的发生发展有着密切联系,被认为是治疗的潜在靶点。衰竭心脏中内质网形态变化也印证了过度ERS与心衰发病密切相关。ERS介导的分子伴侣蛋白Sigma-1受体（Sigma-1R）途径在心脏中的作用受到广泛重视,作用于线粒体相关内质网膜（mitoch ondria-associated endoplasmic reticulum membrane,MAM）上的特异性膜蛋白 Sigma-1 R在心肌ERS和线粒体功能之间有特殊的连接作用,多项研究揭示了 Sigma-1R下游效应与多种心肌病理损伤的关系,包括抗心肌肥大、抗心肌凋亡以及ERS过度所引起的心肌损伤,表现出良好的心脏血流动力学性能和心肌保护作用。本研究将采用在体大鼠心梗后心衰模型和大鼠H9c2心肌细胞系缺氧复氧损伤模型来研究复方人参补气颗粒及其有效成分对心肌细胞的保护作用,并结合脂质组学分析,从ERS角度探讨其对损伤心肌的保护作用及机制。实验的主要研究内容及方法如下:1.采用结扎左冠状动脉前降支方法复制SD大鼠心梗模型,随机分为假手术组,模型组,复方人参补气颗粒低剂量组（1.5 g/kg）,中剂量组（3.0 g/kg）,高剂量组（4.5 g/kg）,治疗性灌胃给药28天,末次给药后超声心动图观察大鼠心功能指标,采用氟代脱氧葡萄糖正电子断层显像（18F-FDG PET/CT）技术测定大鼠心肌葡萄糖摄取体积和摄取平均值,酶联免疫法检测血浆Ang Ⅱ活性。苏木素-伊红（Haematoxylin-Eosin,HE）染色法和马松三色法（Masson）观察大鼠心肌组织病理学改变并测定心肌容积胶原分数,荧光染色观察心肌细胞凋亡情况。采用透射电镜观察心肌形态及线粒体超微结构变化。2.基于复方人参补气颗粒抗心肌损伤作用,进一步观察其对心肌内质网应激水平的影响。采用免疫荧光染色测定心肌CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白（C/EBP homol ogous protein,CHOP）、Sigma-1R蛋白表达水平,采用Western Blot方法测定心肌C HOP、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（Cysteinyl aspartate specific proteinase,Caspase-12）、Sigma-1R、Bc12-Associated X 蛋白（Bc12-Associated X,Bax）、B 淋巴细胞瘤-2 基因（B-cell lymphoma-2,Bcl-2）蛋白表达水平,观察其对ERS及其介导的凋亡通路的调控作用,阐述其可能的作用机制。3.在初步确定复方人参补气颗粒抗心肌损伤作用与改善过度内质网应激相关的基础上,采用液相色谱法-质谱联用（Liquid chromatography-mass spectrometry,LC/MS）技术,通过脂质组学分析给药前后大鼠心肌内源性差异性代谢物的变化,考察药物对心肌脂代谢的影响,从脂代谢水平阐述其对内质网应激和心肌损伤的调控作用。4.根据中药复方特点和文献研究基础,选择人参总多糖和黄芪总多糖代表复方人参补气颗粒有效成分,进行细胞水平实验研究。观察两组分单用和联用对常氧状态下大鼠H9c2心肌细胞活力的影响。建立心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,观察两组分单用和联用对缺氧/复氧损伤的细胞活力影响。采用流式细胞仪测定细胞凋亡率和Ca2+浓度变化。5.在两组分抗缺氧/复氧损伤的基础上,使用内质网应激激动剂衣霉素,进一步测定其对内质网应激水平的影响,采用免疫荧光检测心肌细胞CHOP、Sigma-1R蛋白表达水平,Western Blot 方法检测 CHOP、Caspase-12、Sigma-1R、Bax、Bcl-2 蛋白表达水平,观察人参总多糖和黄芪总多糖对内质网应激及其介导的凋亡通路影响,初步阐述其可能的作用机制。研究结果如下:1.动物实验显示,复方人参补气颗粒给药可提高心衰大鼠超声心动图LVEF、LVF S、SV、CO,显着降低 LVIDs、LVIDd、LVEVs、LVEVd,显着降低血浆 Ang Ⅱ水平。复方人参补气颗粒高剂量（4.5 g/kg）可显着增加存活心肌18F-FDG摄取体积。病理学可见假手术组心肌排列致密规则,复方人参补气颗粒各给药组心肌组织排列较规则,间质轻度肿胀,炎症浸润不明显,整体纤维化程度较低,与模型组比较,各给药组大鼠心肌CVF均显着下降。TUNEL染色显示,与模型组比较,各给药组心肌细胞凋亡率显着下降。透射电镜显示复方人参补气颗粒高剂量（4.5 g/kg）可以改善心肌细胞形态,减轻线粒体变性、肿胀程度,以及嵴结构的断裂。2.免疫荧光和Western Blot显示,复方人参补气颗粒高剂量（4.5 g/kg）可降低内质网应激相关CHOP、Caspase-12、Bax表达,显着上调Sigma-1R、Bcl-2表达,改善内质网应激及其介导的细胞凋亡。3.脂质组学共筛选出64种潜在差异代谢物,主要集中于甘油脂类、甘油磷脂类。复方人参补气颗粒高剂量（4.5 g/kg）可显着下调甘油三酯代谢物、上调磷脂酰胆碱代谢物水平,对胆固醇代谢和磷脂代谢通路有调控作用,提示其可改善由心肌过度ERS引起的脂代谢异常。4.细胞实验显示,与正常组比较,缺氧/复氧条件下,H9c2心肌细胞活性显着下降,细胞凋亡率显着升高,出现严重钙超载。与缺氧/复氧组比较,人参总多糖和黄芪总多糖联用组细胞活力显着上升,心肌细胞凋亡率显着下降,钙超载显着降低。5.与正常组比较,缺氧/复氧条件下,H9c2心肌细胞内质网应激相关CHOP、Cas pase-12、Bax表达显着增加,Sigma-1R、Bcl-2表达显着减少,提示有严重的内质网应激。人参总多糖和黄芪总多糖联用组CHOP、Caspase-12、Bax表达显着减少,Sigma-1 R、Bcl-2表达显着增多,提示内质网应激程度减轻。综上所述,本研究发现:1.复方人参补气颗粒可以改善心梗后心衰大鼠心功能和心室结构变化,抑制过度内质网应激、改善心肌细胞能量代谢障碍、抑制心肌纤维化等可能是其发挥心肌保护作用的重要机制。2.心梗后心衰的受损心肌存在CHOP-Sigma-1R反馈调节,进而引发下游多条促凋亡途径。复方人参补气颗粒可作用于CHOP-Sigma-1R环节,通过调控二者表达水平从而抑制心肌细胞凋亡,改善过度内质网应激,保护缺血心肌。3.复方人参补气颗粒对心肌脂代谢异常有一定调节作用,通过调控内质网应激从而调控脂质代谢可能是其心肌保护的途径。4.复方人参补气颗粒有效成分人参总多糖和黄芪总多糖联用有显着的抗H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤作用,其机制可能与抑制过度内质网应激及其介导细胞凋亡有关。
郭丽君[4]（2021）在《基于网络药理学及代谢组学研究参附强心丸治疗心力衰竭的作用机制》文中进行了进一步梳理心力衰竭是一种复杂的临床综合征,死亡率及再住院率居高不下。西医标准化治疗降低了心力衰竭的全因死亡率和再住院率,但仍有很大一部分患者处于心血管事件高风险中,因此有必要应用更广泛的方法来降低心血管疾病残余风险。中医药“多成分、多靶点”的作用特点和良好的安全性使其成为预防和治疗心力衰竭等复杂疾病的安全有效药物。参附强心丸是治疗心力衰竭的代表性中成药之一,但目前关于其作用机制的研究较为单一,因此有必要深入研究参附强心丸治疗心力衰竭的作用机理。网络药理学可以通过整个网络系统来预测药物成分和疾病靶点,是发现药物与疾病联锁的关键技术;代谢组学是组学研究的终端,可用于研究中药复方引起机体内源性代谢物的变化,这两种研究方法与中医“整体观念”的理念相近。因此本课题拟采用网络药理学和代谢组学相结合的研究方法,多角度研究参附强心丸治疗心力衰竭的作用机制。然而,网络药理学只是预测参附强心丸治疗心力衰竭的潜在机制,代谢组学技术目前尚未成熟,因此后续通过分子生物学技术（动物实验+细胞实验）进行验证,并在细胞层面深入研究其作用机制。第一部分参附强心丸对心肌梗死后心力衰竭大鼠的药效学研究目的:评价参附强心丸对心肌梗死后心力衰竭大鼠的疗效。方法:结扎左冠状动脉前降支2周后构建心肌梗死后心力衰竭大鼠模型,根据左心室射血分数（left ventricular ejection fraction,LVEF）按随机数字表法随机分组,分为模型组、阳性药（培哚普利叔丁胺）组、参附强心丸高、中、低剂量组和假手术组,灌胃4周,利用超声评估参附强心丸对心力衰竭大鼠心功能的影响;采用酶联免疫吸附法检测参附强心丸对大鼠血清中心力衰竭标志物心房利钠肽（atrial natriuretic peptide,ANP）、B 型利钠肽（B-type natriuretic peptide,BNP）的影响;采用 HE 染色（hematoxylin-eosin staining）和Masson染色观察大鼠心肌组织形态变化。结果:与模型组相比,参附强心丸高剂量组和阳性药组治疗4周后可提高LVEF和左心室短轴缩短率（left ventricular fractional shortening,LVFS）（P<0.05）,降低 ANP和BNP水平（P<0.01）。HE染色模型组心肌纤维结构紊乱、肌纤维变粗,呈波浪状改变;参附强心丸高剂量组和阳性药组心肌纤维排列较模型组清晰,心肌细胞束间隙和炎性细胞浸润减少。Masson染色模型组可见明显蓝色胶原纤维分布;参附强心丸高、中、低剂量组和阳性药组大鼠心肌细胞间蓝色胶原纤维较模型组明显减少（P<0.05）。结论:参附强心丸可以改善心肌梗死后心力衰竭大鼠的心功能（提高LVEF和LVFS）,降低心力衰竭生物标志物ANP和BNP的水平,延缓心室重塑。第二部分整合网络药理学及代谢组学预测参附强心丸治疗心力衰竭的作用机制目的:结合网络药理学及非靶向代谢组学探讨参附强心丸调控心力衰竭的关键靶点及代谢通路,并进行靶向代谢组学定量分析,综合预测参附强心丸治疗心力衰竭的潜在作用机制。1基于网络药理学探讨参附强心丸治疗心力衰竭的机制方法:应用BATMAN-TCM数据库,筛查参附强心丸的有效成分及其作用靶点,DisGeNet、OMIM、TTD数据库综合筛选心力衰竭相关靶点。采用STRING在线数据库对二者交集的靶点构建蛋白相互作用网络,筛选关键基因,并在Cytoscape 3.8.0软件中构建“药物-活性成分-靶标-疾病”可视化网络。使用DAVID工具对共同基因进行基因本体论富集分析以及KEGG通路富集分析,探讨潜在靶标的作用机制。结果:从参附强心丸中筛选出215个有效成分,涉及治疗心力衰竭的497个靶点。参附强心丸治疗心力衰竭富集的通路主要是MAPK信号通路、PI3K-Akt信号通路、鞘脂类信号通路、细胞凋亡、AMPK信号通路等。2参附强心丸治疗心力衰竭大鼠的非靶向代谢组学研究方法:选择药效学研究中效果最佳的参附强心丸高剂量组作为参附强心丸组。以大鼠血清为研究对象,基于液质联用分析技术,获得假手术组、模型组和参附强心丸组大鼠血清代谢轮廓,结合主成分分析和偏最小二乘法-判别分析等多元统计分析手段,分析不同组别代谢物的变化及参附强心丸影响的代谢途径。同时将非靶向代谢组学结果与网络药理学结果进行整合,预测参附强心丸治疗心力衰竭的核心靶点。结果:参附强心丸可以通过调节脯氨酸、胞嘧啶核苷、5-甲基胞苷、哌可酸、胞嘧啶和神经鞘氨醇等发挥治疗心力衰竭的作用,这些代谢物与鞘脂代谢、嘧啶代谢、氨酰基tRNA的生物合成、氮素代谢、谷胱甘肽代谢、半胱氨酸和蛋氨酸代谢、精氨酸和脯氨酸代谢等通路密切相关。通过整合网络药理学与代谢组学筛选出参附强心丸治疗心力衰竭的主要靶点为AKT1、MAPK1/3（ERK1/2）、TP53,这些靶点与自噬和凋亡密切相关。3参附强心丸治疗心力衰竭大鼠的氨基酸靶向代谢组学研究方法:整合网络药理学与代谢组学结果,发现重合的代谢通路大部分与氨基酸代谢有关,因此基于已建立的靶向代谢组学平台,利用液相色谱质谱联用技术,对模型组大鼠、假手术组大鼠、参附强心丸组大鼠血清样本进行氨基酸靶向代谢组学研究,筛选参附强心丸治疗心力衰竭调控的氨基酸代谢物。结果:和假手术组相比,心力衰竭大鼠血清中组氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、瓜氨酸、亚牛磺酸、鸟氨酸、色氨酸、犬尿氨酸水平升高。其中参附强心丸可以回调苯丙氨酸、瓜氨酸、色氨酸、犬尿氨酸浓度。结论:网络药理学结合代谢组学研究是探索参附强心丸作用机制的有效工具,参附强心丸可能通过调控心肌细胞自噬和凋亡发挥治疗心力衰竭的作用。第三部分 参附强心丸治疗心力衰竭的分子生物学研究初步预测结果表明参附强心丸可能通过调节自噬和凋亡发挥治疗心力衰竭的作用,细胞自噬和凋亡之间又存在交互对话（crosstalk）,那么参附强心丸是否影响自噬和凋亡的crosstalk?可能通过何种crosstalk形式发挥治疗心力衰竭的作用?其可能的作用通路是什么?因此选用与自噬和凋亡密切相关的经典分子,通过动物实验及细胞实验验证参附强心丸治疗心力衰竭影响心肌细胞的自噬和凋亡,且影响心肌细胞自噬和凋亡的crosstalk,并进一步探索其潜在作用通路。1参附强心丸对心力衰竭大鼠心肌细胞自噬和凋亡的影响目的:明确参附强心丸通过调控心肌细胞自噬和凋亡发挥治疗心力衰竭的作用。方法:结扎左冠状动脉前降支2周后构建心肌梗死后心力衰竭大鼠模型,4周后对各组大鼠心肌组织通过TUNEL法检测细胞凋亡,免疫荧光技术检测Bcl-2和Bax,蛋白免疫印迹法（western blot,WB）检测与凋亡密切相关的蛋白Bcl-2、Bax和Cleaved-caspase3的表达以及与自噬密切相关的蛋白LC3-Ⅱ、Beclin 1和SQSTM1/p62的表达。结果:TUNEL结果表明与模型组相比,阳性药组和参附强心丸高、中、低剂量组大鼠心肌组织TUNEL染色标记的绿色荧光点明显减少,凋亡指数明显下降（P<0.01）。免疫荧光显示与模型组相比,参附强心丸高、中、低剂量组和阳性药组Bax荧光表达明显减弱,Bcl-2荧光表达明显增强。WB结果显示与模型组相比,参附强心丸高、中、低剂量组和阳性药组Cleaved-caspase3表达量明显下降（P<0.01）;参附强心丸高剂量组和阳性药组Bax表达量明显下降（P<0.01）,Bax/B cl-2降低（P<0.05）;参附强心丸高、中剂量组和阳性药组Bcl-2表达量升高（P<0.05）。与模型组相比,阳性药组和参附强心丸高剂量组LC3-Ⅱ表达量升高（P<0.05）;阳性药组和参附强心丸高、中、低剂量组Beclin 1表达量升高（P<0.05）;各组SQSTM1表达量未见明显统计学差异（P>0.05）。结论:参附强心丸可以降低凋亡指数,减少Bax和Cleaved-caspase3的表达,增加Bcl-2的表达抑制心肌梗死后心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡;还可以上调LC3-Ⅱ和Beclin 1的表达促进心肌细胞自噬。2参附强心丸对氧糖剥夺诱导的H9C2大鼠心肌细胞自噬和凋亡crosstalk的研究背景:既往研究表明参附强心丸的作用机制与MAPK（JNK、ERK1/2、p38）信号通路相关,其中MST1是MAPK信号通路的上游,JNK是MAPK信号通路的开关,MST1和JNK均可以在自噬和凋亡中发挥重要作用且MST1/JNK信号通路在心力衰竭中发挥重要作用。目的:研究参附强心丸是否可以调控H9C2大鼠心肌细胞自噬和凋亡的crosstalk,及与MST1/JNK通路是否相关。方法:对H9C2大鼠心肌细胞进行氧糖剥夺（oxygen-glucose deprivation,OGD）构建心肌细胞损伤模型,通过CCK-8法及乳酸脱氢酶法筛选OGD的最佳干预时间及参附强心丸的最佳给药浓度。通过流式细胞仪检测参附强心丸对H9C2大鼠心肌细胞凋亡率的影响,WB检测参附强心丸对H9C2大鼠心肌细胞自噬和凋亡相关蛋白（Caspase-3、Beclin 1）的影响。予以雷帕霉素及3-甲基腺嘌呤处理研究参附强心丸是否调控自噬和凋亡之间的crosstalk,同时WB检测MST1、JNK、p-JNK的表达以研究参附强心丸调节H9C2大鼠心肌细胞自噬和凋亡与MST1/JNK通路是否相关。结果:流式细胞术表明参附强心丸可以降低OGD诱导的心肌细胞的凋亡率（P<0.05）,WB检测表明参附强心丸可以下调Caspase-3的表达量（P<0.05）,上调Beclin 1（P<0.05）的表达量。与单独应用参附强心丸相比,3-MA减弱了参附强心丸促自噬和抗凋亡作用;雷帕霉素并没有进一步增强参附强心丸促自噬和抗凋亡作用。同时参附强心丸可以抑制自噬和凋亡交互作用的关键蛋白MST1的表达（P<0.05）,抑制JNK的磷酸化（P<0.01）。结论:参附强心丸可以通过上调自噬活性抑制OGD诱导的凋亡发挥对心肌细胞的保护作用,其作用通路可能与MST1/JNK相关。
张小莉[5]（2021）在《杠柳毒苷对H9C2心肌细胞的影响及机制研究》文中研究指明目的:以H9C2心肌细胞为研究对象,探究不同干预时间、不同浓度的杠柳毒苷对H9C2心肌细胞活力、增殖、凋亡、血管新生的影响及其机制,从而揭示“有是证,用是药”的科学内涵,并且为后续杠柳毒苷的效应研究提供实验基础。方法:H9C2心肌细胞培养,设立空白对照组、模型组（缺氧）以及不同浓度杠柳毒苷给药组（杠柳毒苷浓度500、250、125、100、50、20μmol/L）,并在不同的时间点（24h、48h、72h）进行CCK-8细胞活性检测、MTT细胞增殖检测、LDH细胞毒性测定、TUNEL,以及Western blot检测Cleaved Caspase-3、VEGF-A、P-Akt、Akt等蛋白表达。结果:1、H9C2心肌细胞培养:光镜下（5x、10x）观察H9C2心肌细胞,细胞贴壁生长,呈梭形,放射状紧密规则排列,胞体饱满,细胞周围透亮有光泽。2、MTT细胞增殖结果:24h时,与空白对照相比,杠柳毒苷（125μmol/L）干预后细胞增殖明显升高,其他剂量组明显下降,差异具有明显统计学意义（P<0.01）;48h时,与空白对照相比,杠柳毒苷各个剂量组干预后细胞增殖均下降,差异具有统计学意义（P<0.05）;72h时,与空白对照相比,杠柳毒苷各个剂量组均明显抑制细胞的增殖（P<0.01）。3、CCK-8细胞活性结果:缺氧后细胞活性明显下降（P<0.01）,随着时间的延长,细胞活性降低越来越明显。与模型组相比,杠柳毒苷干预后,24h时,500和250μmol/L（P<0.05,P<0.01）剂量组细胞活性均下降,其他剂量组均没有统计学意义;48h、72h时,500μmol/L（P<0.05）剂量组细胞活性均下降,125、100、50和20μmol/L（P<0.05,P<0.01）剂量组细胞活性均升高,250μmol/L剂量组,48h时对细胞活性影响没有统计学意义,72h时细胞活性升高（P<0.05）。4、不同浓度的杠柳毒苷对H9C2心肌细胞毒性的影响:杠柳毒苷干预6h、12h和24h后,随着时间的延长,各个剂量组LDH的含量均越来越高（P<0.01）。所有干预时间点,200μmol/L剂量组LDH的释放量均低于100μmol/L剂量组,此外,除24h时500μmol/L剂量组LDH的含量高于200μmol/L剂量组（P<0.05）,其他时间点均没有统计学意义。5、TUNEL心肌细胞凋亡检测结果:各个时间点的模型组凋亡率均升高,随着时间的延长,凋亡率呈增高的趋势。24h时,杠柳毒苷各给药组（500、100和20μmol/L）对细胞的凋亡起不到抑制作用,反而促进细胞凋亡;48h和72h时,100和20μmol/L剂量组抑制细胞凋亡,500μmol/L剂量组促进细胞的凋亡。6、各个时间和浓度杠柳毒苷对H9C2心肌细胞凋亡蛋白Cleaved Caspase-3表达的影响:缺氧后,各个时间点Cleaved Caspase-3的表达均升高（P<0.05）;与模型组相比,杠柳毒苷干预24h后,250、100和50μmol/L剂量组均能明显促进Cleaved Caspase-3的表达（P<0.01）;48h时,100、50和20μmol/L剂量组均抑制Cleaved Caspase-3的表达（P<0.05）;72h时,500、250、100和20μmol/L剂量组均明显降低（P<0.01）,50μmol/L剂量组升高（P<0.05）。500、20μmol/L（24h）和500、250μmol/L（48h）剂量组对Cleaved Caspase-3的表达影响不显着（P>0.05）。7、各个时间和浓度杠柳毒苷对H9C2心肌细胞VEGF-A表达的作用结果:缺氧24h时,VEGF-A的表达升高（P<0.05）,缺氧48h、72h时,VEGF-A的表达均降低（P<0.01）;与模型组相比,杠柳毒苷干预后,各个时间点100和50μmol/L剂量组均升高（P<0.05）;24h时,250μmol/L剂量组升高（P<0.05）,500和20μmol/L剂量组降低（P<0.05）;48h时,250和20μmol/L剂量组降低（P<0.05）,500μmol/L剂量组无明显差异（P>0.05）;72h时,500和250μmol/L剂量组明显升高（P<0.01）,20μmol/L剂量组无明显差异（P>0.05）。8、杠柳毒苷对H9C2心肌细胞影响的机制:缺氧后,各个时间点P-Akt/Akt的表达均升高（P<0.05,P<0.01）;与模型组相比,杠柳毒苷干预后,各个时间点250和50μmol/L剂量组均降低（P<0.01,P<0.05）;24h后,500μmol/L剂量组升高（P<0.05）,100和20μmol/L剂量组均明显降低（P<0.01）;48h后,500和100μmol/L剂量组均降低（P<0.05）,20μmol/L剂量组明显升高（P<0.01）;72h后,500μmol/L剂量组升高（P<0.05）,100和20μmol/L剂量组均无明显差异（P>0.05）。结论:1、杠柳毒苷干预早期,对细胞凋亡无明显改善作用。随着作用时间延长,杠柳毒苷明显改善细胞凋亡,并且250μmol/L和100μmol/L浓度对凋亡的抑制作用最佳。随着浓度的升高,药物的毒性作用更明显,促进细胞凋亡。2、杠柳毒苷（250μmol/L和100μmol/L）干预,24h、72h可能存在促进血管新生作用。3、杠柳毒苷100、50和20μmol/L剂量组（48h）和500、250、100和20μmol/L剂量组（72h）能够使缺氧H9C2心肌细胞Cleaved Caspase-3蛋白表达降低,100和50μmol/L剂量组（24h、48h、72h）和250μmol/L剂量组（24h和72h）VEGF-A蛋白表达升高,可能通过调节Akt通路,调控心肌细胞凋亡。
唐梅[6]（2021）在《基于网络药理学天香丹抗心肌缺血的体外药效试验研究》文中提出目的:应用网络药理学技术,结合基因富集、通路预测分析筛选出天香丹胶囊抗心肌缺血的作用通路。建立细胞氧化损伤模型观察天香丹胶囊含药血浆和17β-雌二醇（E2）对心肌细胞的活力及凋亡、氧化应激、游离钙和通路上基因蛋白表达水平的影响,深入探究天香丹胶囊抗心肌缺血的药效作用机制,为其临床应用提供理论支撑。方法:1.a.运用网络药理学技术进行基因富集和通路预测分析,构建出“化合物-靶点-通路”的网络图;b.制备天香丹胶囊含药血浆并建立原代心肌细胞氧化损伤模型,MTT法检测心肌细胞存活率;c.Hoechst33342染色法观察细胞凋亡形态;d.cleaved caspase-3检测心肌细胞凋亡率;2.a.荧光探针法测定心肌细胞ROS水平;b.检测心肌细胞中T-AOC、SOD、MDA和NO的水平变化;3.Fluo-3/AM荧光探针检测心肌细胞中游离钙水平;4.Western Blot检测心肌细胞中ESR1、GPR30、PI3K、AKT、e NOS、Nrf2和IP3R的蛋白表达水平。结果:1.a.借助网络药理学技术结合多个数据库通路预测结果显示,天香丹胶囊抗心肌缺血的作用机制可能与雌激素信号通路有关。b.天香丹胶囊含药血浆和E2可以保护心肌细胞的活力,与对照组比较,模型组细胞的存活率明显降低（P<0.05）;与模型组比较,天香丹胶囊含药血浆各浓度组和E2组预处理后均可提高氧化损伤的心肌细胞存活率（P<0.05）。c.天香丹胶囊含药血浆和E2能减缓心肌细胞凋亡进程,与对照组比较,模型组细胞出现染色质聚集、细胞核皱缩和形成凋亡小体;与模型组比较,天香丹胶囊含药血浆各浓度组和E2组预处理后心肌细胞的凋亡形态有明显的改善。d.天香丹胶囊含药血浆和E2可以减少细胞凋亡的发生,与对照组比较,模型组的心肌细胞凋亡率明显增加（P<0.05）;与模型组比较,天香丹胶囊含药血浆各浓度组和E2组预处理后心肌细胞的凋亡率显着降低（P<0.05）。2.a.天香丹胶囊含药血浆和E2有利于心肌细胞消耗过量的ROS,与对照组比较,模型组细胞内ROS量明显增多（P<0.05）;与模型组比较,天香丹胶囊含药血浆各浓度组和E2组预处理后心肌细胞的ROS量均明显降低（P<0.05）。b.天香丹胶囊含药血浆和E2可以减轻氧化应激损伤,与对照组比较,模型组心肌细胞内MDA含量明显增加（P<0.05）,而T-AOC、SOD和NO的水平明显降低（P<0.05）;与模型组比较,空白血浆组无统计学差异,天香丹胶囊含药血浆各浓度组和E2组预处理后心肌细胞的MDA含量显着下降（P<0.05）,而T-AOC、SOD和NO的水平明显增加（P<0.05）。3.天香丹胶囊含药血浆和E2可以降低钙超载水平,与对照组比较,模型组心肌细胞内游离钙离子的平均荧光强度明显增加（P<0.05）;与模型组比较,天香丹胶囊含药血浆各浓度组和E2组预处理后心肌细胞内游离钙的平均荧光强度明显降低（P<0.05）。4.天香丹胶囊含药血浆和E2可调节ESR1-PI3K-Akt-e NOS、GPR30-PI3K-Akt-Nrf2信号和钙通道上IP3R蛋白的变化直接影响雌激素通路,与对照组比较,模型组心肌细胞的PI3K、AKT和IP3R的蛋白表达水平明显增加（P<0.05）,ESR1、GPR30、e NOS、Nrf2的蛋白表达水平明显降低（P<0.05）;与模型组比较,天香丹胶囊含药血浆各浓度组和E2组预处理后心肌细胞中PI3K、AKT和IP3R的蛋白表达水平显着降低（P<0.05）,而ESR1、GPR30、e NOS、Nrf2的蛋白表达水平显着增加（P<0.05）。结论:1.天香丹胶囊含药血浆能间接调控雌激素通路,提高细胞抗氧化能力和细胞存活率,还可改善细胞凋亡形态及降低凋亡率;2.天香丹胶囊含药血浆能间接调控雌激素通路,降低氧化应激损伤;3.天香丹胶囊含药血浆能间接调控雌激素通路,减轻钙超载水平和钙通道上IP3R的蛋白表达;4.天香丹胶囊含药血浆可直接调节雌激素通路,激活雌激素受体ESR1和GPR30,抑制PI3K/AKT的表达水平,增加e NOS和Nrf2的蛋白表达。天香丹胶囊通过雌激素通路为主的多途径作用网发挥出抗心肌缺血作用。本研究为探讨天香丹胶囊抗心肌缺血的作用机制和后续临床应用提供新的参考依据和有力支撑。
马如风[7]（2020）在《基于ATF3/MAP2K3/p38 MAPK通路探究活血益气组分中药防治心梗后大鼠心室重构作用机制》文中提出研究目的最新流行病学研究表明,中国地区居民急性心肌梗死（Acute myocardial infarction,AMI）的发病率仍保持上升趋势,且渐趋年轻化。急性心肌梗死后心室重构（Ventricular remodeling,VR）是心肌梗死后心脏出现的一种代偿性、继发性的复杂病理生理过程,涉及多种影响因素。长期持续的心室重构导致心脏结构和功能异常,最终诱发心力衰竭或死亡,严重影响患者的生活质量,是影响心血管病患者死亡率的决定因素之一。因此,抑制或逆转心室重构过程已成为预防和治疗心肌梗死后患者心室重构的关键环节。临床研究表明,急性心肌梗死后心室重构患者基本中医证型为气虚血瘀证,或兼挟其他证型。活血益气中药及其有效组分作为基本方在治疗心室重构方面取得了显着的临床疗效,尤其是有效组分中药,其成分相对明确,药理作用较为清晰,且制剂多样、携带方便,具有广阔的应用前景。国内外研究表明,三七总皂苷（Panaxnotoginsengsaponins,PNS）具有扩张血管、改善微循环、减少心肌耗氧量等药理作用;丹参酮IIA（Tanshinone IIA,Tan IIA）能通过抑制心肌纤维化,减少心肌细胞凋亡和炎症反应,改善心脏神经重构和电生理异常等;人参总皂苷（Total ginsenosides,TGS）显着的耐缺氧作用可增强心肌收缩力,加快脂质代谢和能量转化过程,从而改善AMI后的心功能和血流动力学指标,三者是本院院内制剂活血化瘀方主要组成药物的中药有效成分,单独应用可在不同层面上保护心肌梗死后心血管系统重构,而三者联合使用干预急性心肌梗死后心室重构还未有研究。最新文献研究表明,ATF3/MAP2K3/p38 MAPK信号通路可以通过调节NFκB相关因子的表达影响心肌缺血期的炎症浸润,同时抑制TGF-β1和Collagenl.的表达,降低心肌成纤维细胞功能,保护心肌细胞及其细胞外基质的重构;还能通过减少心肌细胞中Runx1、提高PPARα的表达改善心肌细胞的能量代谢从而防治心肌梗死后心室重构。根据导师的多年临床用药经验和本课题组前期的研究基础,结合网络药理学预测药物-疾病靶点,本研究探索活血益气组分配伍中药PNS、TanⅡA、TGS联合用药,以PNS为君,TanⅡ 和 TGS 分别佐使,通过调节 ATF3、MAP2K3、p38MAPK、TGF-β1、Collagen I、NFκB p65、IκB、Runx1、PPARα 等基因和蛋白的表达,从而激活 ATF3/MAP2K3/p38 MAPK信号通路,发挥防治心肌梗死后心室重构的作用,为将活血益气组分中药开发成防治急性心肌梗死后心室重构的临床新药提供扎实有力的实验依据。研究方法结扎健康的SPF级SD（Sprague Dawley）雄性大鼠心脏冠状动脉左前降支血管,构建心肌梗死动物模型。将造模成功的大鼠随机均分为六组:模型组（MI）、福辛普利组（Fosinopril,FIP,1.2mg/kg·d）、三七总皂苷组（PNS,40mg/kg·d）、丹参酮IIA 组（TanⅡA,70mg/kg·d）、人参总皂苷（TGS,30 mg/kg·d）、组分配伍组（Component compatibility,CC,PNS 40mg/kg-d+Tan IIA 70mg/kg.d+TGS 30mg/kg.d）;假手术组（Sham）大鼠在冠状动脉左前降支相同位置只穿线不结扎,作为阳性对照。各给药组以灌胃方式给予相应药物,MI组大鼠和Sham组大鼠给予去离子水,连续给药4周。4周后检测各组大鼠心脏超声后取材,计算各组大鼠心脏质量指数（Heartweight/bodyweight,HW/BW）;用HE和Mansson染色法观察大鼠心脏的病理学改变和心肌纤维化程度;用ELISA法检测大鼠血清中心室重构标志物CRP、TNF-α、GDF-15和MMP9/TIMP1水平以及大鼠心肌组织中游离脂肪酸（Free fatty acid,FFA）含量;用高效液相色谱法检测大鼠心肌组织中ATP、ADP、AMP水平;用化学比色法检测大鼠心肌组织中Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶含量;用免疫组织化学法、Western blotting法和RT-PCR法检测大鼠心肌组织 ATF3/MAP2K3/p38 MAPK 信号通路中 ATF3、MAP2K3、p38 MAPK、NFκB p65、TGF-β1、Collagen I、Runx1、PPARα等相关蛋白和基因的表达水平。研究结果1活血益气组分配伍中药对心肌梗死大鼠心脏功能和结构的影响1.1超声心动图检测大鼠心脏,结果显示,与假手术组大鼠相比,模型组大鼠心脏左室收缩末期内径（LVIDs）、左室舒张末期内径（LVIDd）明显升高,左室射血分数（LVEF）和左室缩短分数（LVFS）显着降低（P<0.01）;给药4周后,与模型组相比,各给药组大鼠的LVIDs和LVIDd降低,LVEF和LVFS升高（P<0.01或0.05）;其中组分配伍中药组心脏超声各指标的改善程度明显优于单味组分中药组（P<0.05）;1.2光镜下观察HE染色,结果表明,与假手术组大鼠相比,模型组大鼠心肌纤维排列紊乱、间隙增宽,且心肌纤维染色不均;心肌组织较松散,心肌细胞体积增大;有一定程度的炎性细胞浸润和结缔组织增生,伴见心肌纤维的溶解、断裂、坏死等,结合心脏超声结果表明大鼠心肌梗死后心室重构动物模型建立成功;给药4周后,与模型组相比,各给药组大鼠心肌的病理结构都有不同程度的改善,各给药组大鼠心肌组织染色大致均匀,肌纤维较完整,分布较整齐,炎性浸润略减轻,细胞形态和结构得到改善,其中组分配伍中药组改善更明显;1.3光镜下观察Masson染色,结果表明,与假手术组大鼠相比,模型组大鼠心肌组织中出现较明显胶原纤维和结缔组织增生,伴见心肌胶原和纤维瘢痕增多;给药4周后,与模型组相比,各给药组大鼠心肌纤维和细胞外基质重构均有不同程度的改善,伴见少量心肌纤维增生,胶原沉积有不同程度的减少（P<0.01或0.05）,其中组分配伍组较其他单味组分组改善更为显着（P<0.05）;1.4心脏质量指数分析结果显示,与假手术组大鼠相比,模型组大鼠的心脏质量指数明显升高（P<0.01）;给药4周后,与模型组相比,各给药组大鼠的心脏质量指数降低（P<0.01或0.05）;且组分配伍组大鼠心脏质量指数下降更为明显（P<0.05）;1.5 ELISA法检测给药4周后大鼠血清心室重构标志物水平,结果显示,与假手术组大鼠相比,模型组大鼠血清中CRP、TNF-α GDF-15和MMP9/TIMP1水平明显升高（P<0.01）;给药4周后,与模型组相比,各给药组大鼠血清中CRP、TNF-α、GDF-15和MMP9/TIMP1水平降低（P<0.01或0.05）;与各单味组分给药组相比,组分配伍组各血清标志物水平改善较为显着（P<0.05）。2活血益气组分配伍中药对心肌梗死后大鼠心脏ATF3/MAP2K3/p38 MAPK信号通路的影响2.1结扎大鼠心脏冠状动脉左前降支4周后,免疫组织化学、Western blotting和RT-PCR检测结果表明,与假手术组大鼠相比,模型组大鼠心肌组织中Collagen I和TGF-β1的表达水平升高（P<0.05）;给药4周后,与模型组大鼠相比,活血益气组分配伍中药组大鼠心肌组织中Collagen I和TGF-β1的表达下降,一定程度上改善心肌梗死后细胞外基质重构和心肌纤维化程度（P<0.05）;2.2结扎大鼠心脏冠状动脉左前降支4周后,免疫组织化学、Western blotting和RT-PCR检测结果表明,与假手术组大鼠相比,模型组大鼠心肌组织中ATF3的表达水平降低,MAP2K3、p38 MAPK的表达水平升高（P<0.05）;活血益气组分配伍中药给药4周后结果显示,与模型组大鼠相比,心肌梗死大鼠心肌组织中的ATF3蛋白和基因的表达升高、MAP2K3、p38 MAPK的表达水平降低（P<0.05）;2.3结扎大鼠心脏冠状动脉左前降支4周后,免疫组织化学、Western blotting和RT-PCR检测结果表明,与假手术组大鼠相比,模型组大鼠心肌组织中NFκB p65的表达水平升高（P<0.05）;活血益气组分配伍中药给药4周后结果显示,与模型组大鼠相比,心肌梗死后心室重构大鼠心肌组织中的p-NFκB p65/NFκB p65和p-IκBα表达水平降低（P<0.01 或0.05）;3活血益气组分配伍中药对心肌梗死后大鼠心脏能量代谢的影响3.1高效液相色谱法检测给药4周后大鼠心肌组织中ATP、ADP、AMP水平,结果显示,与假手术组大鼠相比,模型组大鼠心肌组织中ATP、ADP水平明显降低,AMP水平明显升高（P<0.01或0.05）;活血益气组分配伍中药给药4周后,与模型组大鼠相比,心肌梗死后心室重构大鼠心肌组织中ATP、ADP水平升高,AMP水平降低（P<0.01或0.05）,改善了心肌梗死后大鼠心肌组织的能量生成;3.2化学比色法检测给药4周后大鼠心肌组织中Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶含量,结果显示,与假手术组大鼠相比,模型组大鼠心肌组织中Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶含量明显降低（P<0.01）;活血益气组分配伍中药治疗4周后,与模型组大鼠相比,心肌梗死后心室重构大鼠心肌组织中Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶水平明显升高（P<0.01）,提高了心肌梗死后大鼠心肌组织中能量代谢酶水平;3.3 ELISA法检测给药4周后大鼠心肌组织中游离脂肪酸水平,结果显示,与假手术组大鼠相比,模型组大鼠心肌组织中游离脂肪酸水平明显升高（P<0.05）;活血益气组分配伍中药治疗4周后,与模型组相比,心肌梗死后心室重构大鼠心肌组织中游离脂肪酸水平出现降低（P<0.05）,促进了心肌梗死后大鼠心肌组织的能量应用;3.4结扎大鼠心脏冠状动脉左前降支4周后,免疫组织化学、Western blotting和RT-PCR检测结果表明,与假手术组大鼠相比,模型组大鼠心肌组织中Runx1的表达水平明显升高,PPARα的表达水平明显降低（P<0.01）;活血益气组分配伍中药治疗4周后,与模型组大鼠相比,心肌梗死后心室重构大鼠心肌组织中Runx1的表达水平降低、PPARα的表达水平升高（P<0.01或0.05）。结论1活血益气组分配伍中药能改善心肌梗死后大鼠的心脏结构和功能,降低心肌梗死大鼠血清炎症水平,且活血益气组分配伍中药较单味组分中药呈现明显的协同增效作用;2活血益气组分配伍中药通过抑制心肌梗死大鼠心肌组织中Collagen I和TGF-β1基因和蛋白的表达水平,抑制了成纤维细胞的功能,改善心肌梗死后心肌组织纤维化和心肌细胞外基质重构程度;3活血益气组分配伍中药通过激活心肌梗死大鼠心肌组织中ATF3/MAP2K3/p38 MAPK炎症信号通路,进而降低了 NFκB/IκB炎症信号的过度激活,同时通过调节心肌组织中ATF3/MAP2K3/p38 MAPK信号通路下游能量代谢效应因子Runx1和PPARα的表达,改善了心肌组织中能量代谢紊乱,可能是预防和治疗心肌梗死后心室重构的重要分子机制之一。
刘岩松[8]（2020）在《基于SIRT1信号通路探讨舒心生脉丹对MI/RI模型大鼠的保护作用和机制》文中指出目的:院内制剂舒心生脉丹,是三十多年临床经验总结得出的经验方,在治疗冠心病为代表的心血管疾病方面疗效确切。为进一步探讨其作用机制,本课题通过病理学、分子生物学等分析方法,探索其对心肌细胞的保护机制,探讨其与细胞凋亡相关性,运用实验数据评价舒心生脉丹的疗效,为舒心生脉丹新药研发提供数据支持,为中医治疗心血管疾病的临床药物应用以及疾病治疗提供有价值的理论依据。方法:1.将70只健康SPF级SD雌性大鼠随机分成7组:空白组、假手术组、阳性对照组（复方丹参滴丸）、模型组、舒心生脉丹低剂量组、舒心生脉丹中剂量组、舒心生脉丹高剂量组。2.中药预处理:适应性饲养5天后,分组给药。给药剂量:根据动物与人之间药物等效剂量换算系数表计算,舒心生脉丹中剂量组为健康成年人1日用量,舒心生脉丹高剂量组与舒心生脉丹低剂量组分别为2倍剂量与0.5倍剂量,对照组复方丹参滴丸按照健康成年人1日用量给药。预给药7天,每日给药1次,空白组、假手术组、模型组给予蒸馏水。7天后禁食进行造模,空白组不做处理,假手术组只进行穿线,不予结扎。其余各组行左冠状动脉前降支结扎30min,再灌注120min,制备心肌缺血再灌注损伤大鼠模型。造模成功取心脏组织。3.监测并记录缺血/再灌注过程中心电图、血流动力学的改变,分析舒心生脉丹对MI/RI模型大鼠心功能的影响。4.通过HE染色和透射电镜观察MI/RI大鼠心肌组织及超微结构,分析舒心生脉丹对MI/RI模型大鼠心肌组织及超微结构的干预效果。5.分别采用qRT-PCR法、Western blot法、IHC法检测中药舒心生脉丹对SIRT1信号通路相关因子SIRT1、p53、ac-p53、Bax、Bcl-2、Capase-3、Capase-9的mRNA及蛋白的表达量影响。分析舒心生脉丹对MI/RI大鼠心肌组织SIRT1/p53信号通路上相关因子的调控。结果:1.心电图:各组大鼠在造模成功后心电图均有明显ST段改变,肢体导联出现ST段抬高,并有出现T波倒置改变;再灌注30min后各组大鼠心电图提示ST段不同程度回落改变,提示MI/RI大鼠造模成功。2.血流动力学:与模型组相比,舒心生脉丹各剂量治疗组及阳性对照组大鼠血流动力学指标均有不同程度的改善,舒心生脉丹组改善更为明显。3.HE染色:MI/RI模型组大鼠心肌组织结构欠完整,形态排列紊乱,细胞间质水肿明显,细胞核出现固缩。与模型组相比,中药舒心生脉丹各治疗组结构相对完整,形态排列较规则,层次较清晰,细胞间质水肿程度较模型组减轻,细胞核固缩减少。其中舒心生脉丹高剂量组改善最明显。4.电镜观察:模型组肌纤维排列不整齐,线粒体肿胀,排列呈不规则形态,部分线粒体嵴不完整,出现空泡。中药舒心生脉丹各剂量治疗组及阳性药组线粒体可见轻度肿胀变形,多数结构完整,肌纤维排列大致整齐,程度较模型组减轻。5.qRT-PCR法检测MI/RI大鼠心肌组织中SIRT1、Bcl-2、Bax、Caspase-9的基因表达量:与模型组相比,舒心生脉丹能上调SIRT1、Bcl-2的基因表达量,差异具有统计学意义（P<0.05）,降低Bax、Caspase-9基因表达量,差异具有统计学意义（P<0.05）。Western blot法检测MI/RI大鼠心肌组织中SIRT1、Caspase-9、p53、ac-p53的蛋白表达量:与模型组相比,舒心生脉丹能够上调MI/RI模型大鼠心肌细胞中SIRT1的蛋白表达量,差异具有统计学意义（P<0.05）,下调Caspase-9、p53、ac-p53的蛋白表达量,差异具有统计学意义（P<0.05）。IHC检测提示舒心生脉丹能够上调SIRT1的蛋白表达,降低p53、Caspase-3、Caspase-9的蛋白表达。结论:1.舒心生脉丹对能改善大鼠MI/RI后的心功能和心肌超微结构,对心肌细胞具有保护作用。2.舒心生脉丹能调控MI/RI模型大鼠心肌细胞中SIRT1、p53、ac-p53、Bax、Bcl-2、Capase-3、Capase-9的mRNA及蛋白的表达量,减少细胞凋亡的发生,其保护作用与细胞凋亡机制相关。
杨小琪[9]（2020）在《定心藤活性成分抗心肌缺血再灌注损伤的作用及机制研究》文中提出目的:通过建立大鼠Langendorff离体心肌缺血再灌注动物模型,研究定心藤活性成分TL（3α-5α-tetrahydrodeoxycordifoline lactam）抗心肌缺血再灌注损伤的药效学研究和相关机制,探讨定心藤活性成分TL对缺血再灌注损伤大鼠心肌的保护作用是否通过线粒体KATP通道和抗氧化途径介导表达而实现的。方法:1.定心藤活性成分抗心肌缺血再灌注损伤药效研究SD大鼠30只随机分为5组:sham组、I/R组、定心藤活性成分TL高、中、低剂量组（给药剂量分别为14.4、4.8、1.44mg/kg）,每组6只。实验前先给大鼠一周的适应时间,然后给与sham组和I/R组生理盐水腹腔注射,定心藤活性成分TL组给予高中低剂量腹腔注射一周,然后用langendorff离体心脏模型进行心脏灌流,连接生理信号记录分析系统记录各数据,对大鼠离体心脏给与平衡20min,停灌20min,复灌180min处理,观察平衡期、复灌期各组大鼠+dp/dtmax（左心室内最大上升速率）、-dp/dtmax（左心室内最大下降速率）、LVDP（左室发展压）、LVEDP（左室舒张末期压）、冠状动脉血流量的血流动力学指标的变化。在复灌120min时收集心脏流出液,并使用LDH试剂盒测定流出液LDH的浓度。复灌180min后通过TTC对各分组大鼠心脏进行染色并测定梗死面积。2.定心藤活性成分抗心肌缺血再灌注损伤作用机制研究SD大鼠60只随机分为5组:sham组、I/R组、定心藤中剂量组（给药剂量4.8mg/kg）I/R+TL组、定心藤中剂量组+5-HD组（5-羟基癸酸,一种线粒体KATP通道阻滞剂）I/R+TL+5-HD组、I/R+5-HD组,每组12只。实验前先给大鼠一周的适应时间,然后给与sham组、I/R组和I/R+5-HD组生理盐水腹腔注射,定心藤中剂量组和定心藤中剂量组+5-HD组给予定心藤活性成分TL腹腔注射一周,然后用langendorff离体心脏模型进行心脏灌流,连接生理信号记录分析系统记录各数据,对大鼠离体心脏给与平衡20 min,停灌20 min,复灌180 min处理,对于I/R+TL+5-HD组和TL+5-HD组在停灌前10 min给予10分钟的5-HD预处理。Western Blot方法检测心脏组织中Bax、Bcl-2、HO-1、细胞色素C（cytochrome C,CYTC）、Caspase-3、MN-SOD、Catalase蛋白的表达水平。采用MTS法利用试剂盒测定心脏组织Caspase 3和Caspase 9的酶活性。结果:1.定心藤活性成分抗心肌缺血再灌注损伤药效研究Langendorff离体心脏缺血再灌注损伤实验中,血流动力学结果显示,定心藤活性成分TL的高中剂量组可提高缺血再灌注末期的+dp/dt、-dp/dt、LVDP、LVEDP和冠脉血流量水平,但在定心藤中剂量组时效果更好。复灌后120 min流出物通过LDH试剂盒检测,结果显示定心藤中剂量组可减少LDH的水平;TTC染色结果显示定心藤中剂量组可以明显减少大鼠的心肌梗死面积。2.定心藤活性成分抗心肌缺血再灌注损伤作用机制研究由于定心藤活性成分TL抗心肌缺血再灌注损伤药效学显示定心藤中剂量组的药效最为显着,因此选择中剂量组进行后续实验机制研究。流动力学结果显示,5-HD预处理10分钟阻止定心藤活性成分TL改善缺血再灌注末期的+dp/dt、-dp/dt、LVDP、LVEDP和冠脉血流量水平;复灌后120 min流出物通过LDH试剂盒检测,结果显示定心藤活性成分TL组缺血后LDH水平明显低于I/R组。用5-HD预处理10分钟阻止定心藤活性成分TL改善缺血再灌注末期LDH活性;单独的5-HD未显示和I/R组心脏功能的任何变化。定心藤活性成分TL显着减少了再灌注损伤引起的梗塞面积,5-HD完全阻断了这种效应。Western Blot结果显示I/R导致MN-SOD、Catalase、HO-1蛋白水平降低,Bax、Cytochrome C和Caspase-3蛋白水平的增加,以及Bcl-2水平的降低,其被定心藤活性成分TL处理逆转,5-HD减弱了定心藤活性成分TL的作用,5-HD本身对这些蛋白水平无显着影响。结论:定心藤活性成分TL对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有保护作用,且该作用是与线粒体KATP通道和抗氧化途径介导表达有关。
杨潇[10]（2020）在《蒙药当贡-3对大鼠缺氧-复氧心肌细胞活性影响的研究》文中研究指明目的探讨蒙药当贡-3（DG-3）对大鼠缺氧/复氧（Hypoxia/Reoxygenation,H/R）心肌细胞活性影响的研究。方法将DG-3复方药物进行提取得药物总提物,体外培养H9c2心肌细胞,给予细胞DG-3药物干预,以复方丹参滴丸（FF）为阳性对照组,选用Co Cl2溶液为缺氧剂,噻唑蓝（MTT）检测细胞存活率,验证药物的毒性作用及筛选药物浓度,优化H/R条件,在体外模拟心肌缺血-再灌注损伤（Myocardial Ischemia-Reperfusion Injury,MIRI）模型。将心肌细胞随机分为6组:空白对照组（control）、缺氧/复氧损伤组（H/R）、DG-3低、中、高剂量组（H/R+低、中、高相应浓度剂量的DG-3）、FF剂量组（H/R+相应浓度剂量的FF）,通过MTT法检测细胞存活率,试剂盒检测细胞匀浆液中过氧化氢酶（Catalase,CAT）的水平、细胞上清液中乳酸脱氢酶（Lactate Dehydrogenase,LDH）以及肌酸激酶（Creatine Kinase,CK）的释放量,实时-荧光定量PCR技术（Real-time Quantitative,Rt-q PCR）检测Bax、Bcl-2、caspase-3 m RNA的水平。结果1.MTT结果得出,DG-3药物浓度在0.05-0.4mg/m L范围内,细胞存活率无明显改变,组间无统计学意义（P>0.05）,DG-3药物浓度在0.8-6.4mg/m L内,细胞存活率降低（P<0.05）,筛选DG-3低、中、高药物浓度分别为0.1、0.2、0.4mg/m L。2.依据心肌细胞的存活率,确定H/R模型的最佳条件为Co Cl2的浓度为1000mmol/L,缺氧时间21 h,复氧时间2 h。3.与control对比,H/R细胞存活率下降（P<0.05）,细胞匀浆中的CAT水平降低（P<0.05）,细胞上清液中LDH及CK的释放量升高（P<0.05）,Bax、caspase-3的m RNA水平升高（P<0.05）,Bcl-2的m RNA水平降低（P<0.05）。与H/R对比,DG-3中、高剂量组能够升高细胞存活率（P<0.05）、降低细胞上清液中LDH及CK释放量（P<0.05）、升高细胞匀浆中CAT的活性（P<0.05）,低、中、高剂量组能够降低Bax、caspase-3的m RNA表达水平（P<0.05）、升高Bcl-2的m RNA表达水平（P<0.05）,并且作用可以呈现出浓度依赖性。结论DG-3总提取物能够抑制由Co Cl2诱导的H/R而出现的心肌细胞凋亡,其保护机制可能与DG-3能够降低Bax、caspase-3的m RNA水平,升高Bcl-2的m RNA水平有关。
二、中药对心肌细胞凋亡的保护作用（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、中药对心肌细胞凋亡的保护作用（论文提纲范文）
（1）基于线粒体功能探讨二参颗粒对心肌缺血模型的保护作用及相关机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 引言 |
| 文献综述 |
| 综述一 线粒体功能障碍在心血管疾病中的作用及研究进展 |
| 综述二 中医药治疗心血管疾病研究进展 |
| 实验研究 |
| 第一章 二参颗粒高效液相指纹图谱研究及网络药理学靶点预测 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第二章 二参颗粒对CoCl_2诱导的H9C2 心肌细胞模型氧化应激和凋亡的影响 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第三章 二参颗粒对CoCl_2诱导的H9C2 心肌细胞模型线粒体功能和SIRT1-PGC-1α-PPARα信号通路的影响 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第四章 二参颗粒对心肌缺血大鼠模型线粒体功能和SIRT1-PGC-1α-PPARα信号通路的影响 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 结论 |
| 本文创新点 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 个人简介 |
（2）益气活血中药调节线粒体自噬改善心肌细胞缺氧复氧损伤的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 文献综述 |
| 综述一 心肌缺血再灌注损伤研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 线粒体自噬在心肌缺血再灌注损伤中作用及中医药防治研究进展 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 实验一 益气活血中药对H9C2心肌细胞缺氧/复氧损伤的作用研究 |
| 材料 |
| 方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 实验二 益气活血中药通过HIF-1a/BNIP3线粒体自噬通路干预心肌细胞缺氧/复氧损伤 |
| 材料 |
| 方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 不足与展望 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（3）复方人参补气颗粒对心梗后心衰大鼠的影响及抗内质网应激作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英文缩略词 |
| 文献综述 |
| 综述一 益气活血中药改善慢性心衰心气虚证作用机制研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 内质网应激与心血管疾病 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 1 复方人参补气颗粒对心梗后心衰大鼠药效学作用和机制研究 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 动物 |
| 1.1.2 试验药物 |
| 1.1.3 试剂 |
| 1.1.4 仪器 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 SD大鼠心梗模型制备 |
| 1.2.2 实验分组及给药方法 |
| 1.2.3 一般状态观察 |
| 1.2.4 超声心动图检测 |
| 1.2.5 18F-FDG正电子发射断层心肌代谢显像 |
| 1.2.6 大鼠心肌病理组织检测 |
| 1.2.7 大鼠心肌容积胶原分数测定 |
| 1.2.8 大鼠心肌TUNEL荧光染色 |
| 1.2.9 大鼠心肌免疫荧光化学染色 |
| 1.2.10 透射电镜检测 |
| 1.2.11 血浆AngⅡ检测 |
| 1.2.12 大鼠心肌组织蛋白提取 |
| 1.2.13 BCA法蛋白定量 |
| 1.2.14 Western Blot上样蛋白制备 |
| 1.2.15 Western blot检测大鼠心肌蛋白表达 |
| 1.2.16 统计学方法 |
| 1.3 结果 |
| 1.3.1 一般状态观察 |
| 1.3.2 复方人参补气颗粒对心梗后心衰大鼠心脏功能和心室结构的影响 |
| 1.3.3 复方人参补气颗粒对心梗后心衰大鼠心肌葡萄糖代谢的影响 |
| 1.3.4 复方人参补气颗粒对大鼠心肌病理组织形态的影响 |
| 1.3.5 复方人参补气颗粒对大鼠心肌细胞凋亡的影响 |
| 1.3.6 复方人参补气颗粒对大鼠左室心肌线粒体超微结构的影响 |
| 1.3.7 复方人参补气颗粒对心梗后心衰大鼠血管紧张素Ⅱ水平的影响 |
| 1.3.8 免疫荧光观察复方人参补气颗粒对大鼠心肌CHOP、Sigma-1R表达的影响 |
| 1.3.9 Western Blot观察复方人参补气颗粒对大鼠缺血心肌CHOP、Caspase-12、Sigma-1R、Bax、Bcl-2表达的影响 |
| 1.4 小结 |
| 参考文献 |
| 2 基于LC/MS的大鼠心肌组织脂代谢组学分析 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 动物 |
| 2.1.2 试剂 |
| 2.1.3 药物 |
| 2.1.4 仪器 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 药物配制及实验分组 |
| 2.2.2 样本前处理 |
| 2.2.3 UHPLC-MS分析 |
| 2.2.4 生物信息学分析 |
| 2.2.5 技术路线图 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 心肌脂质图谱质量控制及定性定量结果 |
| 2.3.2 心肌脂代谢组学初步分析 |
| 2.3.3 差异标志物筛选 |
| 2.3.4 相关性分析 |
| 2.3.5 差异性代谢物通路富集分析 |
| 2.4 小结 |
| 参考文献 |
| 3 复方人参补气颗粒有效成分抗H9c2心肌细胞缺氧复氧损伤作用研究 |
| 3.1 复方人参补气颗粒有效成分对H9c2心肌细胞的毒性作用考察 |
| 3.1.1 材料 |
| 3.1.2 方法 |
| 3.1.3 结果 |
| 3.1.4 小结 |
| 3.2 复方人参补气颗粒有效成分对缺氧/复氧条件下H9c2心肌细活力考察 |
| 3.2.1 材料 |
| 3.2.2 方法 |
| 3.2.3 结果 |
| 3.2.4 小结 |
| 3.3 基于ERS途径的复方人参补气颗粒有效成分抗H/R诱导的心肌细胞损伤机制研究 |
| 3.3.1 材料 |
| 3.3.2 方法 |
| 3.3.3 结果 |
| 3.3.4 小结 |
| 参考文献 |
| 讨论 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（4）基于网络药理学及代谢组学研究参附强心丸治疗心力衰竭的作用机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 文献综述 |
| 综述一 凋亡和自噬及其交互作用在心力衰竭发病机制中的研究进展 |
| 1 细胞凋亡 |
| 2 细胞自噬 |
| 3 自噬与凋亡的crosstalk |
| 4 目前存在的挑战与展望 |
| 参考文献 |
| 综述二 基于文献分析参附强心丸的研究进展 |
| 1 参附强心丸文献分析 |
| 2 参附强心丸的药物分析 |
| 3 参附强心丸的基础研究 |
| 4 参附强心丸的临床研究 |
| 5 总结与展望 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一章 参附强心丸对心肌梗死后心力衰竭大鼠的药效学研究 |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第二章 整合网络药理学及代谢组学预测参附强心丸治疗心力衰竭的作用机制 |
| 引言 |
| 第一节 基于网络药理学探讨参附强心丸治疗心力衰竭的机制 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第二节 参附强心丸治疗心力衰竭大鼠的非靶向代谢组学研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第三节 参附强心丸治疗心力衰竭大鼠的氨基酸靶向代谢组学研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第三章 参附强心丸治疗心力衰竭的分子生物学研究 |
| 第一节 参附强心丸对心力衰竭大鼠心肌细胞自噬和凋亡的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第二节 参附强心丸对氧糖剥夺诱导的H9C2大鼠心肌细胞自噬和凋亡CROSSTALK的研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 个人简历 |
（5）杠柳毒苷对H9C2心肌细胞的影响及机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 实验一 不同浓度杠柳毒苷对H9C2 细胞活力及毒性的影响 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验细胞 |
| 1.2 实验药物 |
| 1.3 主要试剂 |
| 1.4 主要仪器与设备 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 H9C2 心肌细胞培养 |
| 2.2 药物制备 |
| 2.3 MTT细胞增殖检测 |
| 2.4 CCK-8 细胞活性检测 |
| 2.5 LDH释放试验 |
| 2.6 统计分析 |
| 3 实验结果 |
| 4 小结 |
| 实验二 杠柳毒苷对H9C2 细胞凋亡的影响 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验细胞 |
| 1.2 实验药物 |
| 1.3 主要试剂 |
| 1.4 主要仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 TUNEL法检测心肌细胞凋亡 |
| 2.2 Western Blot法检测Cleaved Caspase-3、VEGF-A表达 |
| 2.3 统计分析 |
| 3 实验结果 |
| 4 小结 |
| 实验三 杠柳毒苷通过调控Akt途径影响缺氧诱导的H9C2 细胞凋亡 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验细胞 |
| 1.2 实验药物 |
| 1.3 主要试剂 |
| 1.4 主要仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 Western Blot法检测P-Akt、Akt表达 |
| 2.2 统计分析 |
| 3 实验结果 |
| 4 小结 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 问题与展望 |
| 参考文献 |
| 综述一 心肌细胞的凋亡及其机制研究进展 |
| 1 心肌细胞凋亡的调控因素 |
| 1.1 Bcl-2 家族 |
| 1.2 caspase家族 |
| 1.3 细胞色素C |
| 1.4 TNF-α |
| 1.5 p53 |
| 1.6 其他 |
| 2 心肌细胞凋亡的三大途径 |
| 2.1 线粒体凋亡通路 |
| 2.2 死亡受体凋亡通路 |
| 2.3 内质网应激凋亡通路 |
| 3 心肌细胞内信号传导通路 |
| 3.1 PI3K/Akt |
| 3.2 MAPK |
| 3.3 AMPK |
| 3.4 NF-κB |
| 3.5 其他 |
| 参考文献 |
| 综述二 杠柳毒苷的药理作用研究进展 |
| 1 抗炎活性 |
| 2 抗肿瘤活性 |
| 3 强心作用 |
| 4 免疫调节作用 |
| 5 药物代谢动力学 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（6）基于网络药理学天香丹抗心肌缺血的体外药效试验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 研究内容与方法 |
| 第一部分 网络药理学技术预测分析天香丹胶囊抗心肌缺血作用机制 |
| 1.实验材料 |
| 2.实验方法和内容 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第二部分 天香丹胶囊含药血浆和E2 对氧化损伤心肌细胞的影响 |
| 1. 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 药物 |
| 1.3 实验主要用试剂 |
| 1.4 实验用主要仪器及耗材 |
| 2.实验方法 |
| 2.1 天香丹胶囊含药血浆的制备 |
| 2.2 原代心肌细胞的分离培养 |
| 2.3 免疫荧光纯度鉴定 |
| 2.4 倒置显微镜下观察心肌细胞形态 |
| 2.5 原代乳鼠心肌细胞氧化损伤模型的建立 |
| 2.6 MTT法测定细胞存活率 |
| 2.7 Hoechst33342染色观察氧化损伤心肌细胞凋亡形态变化 |
| 2.8 cleaved caspase-3免疫荧光测定细胞凋亡率 |
| 2.9 DCFH-DA检测心肌细胞内氧自由基水平 |
| 2.10 FRAP法测定心肌细胞中总抗氧化能力(T-AOC) |
| 2.11 WST-8法测定心肌细胞中超氧化物歧化酶(SOD) |
| 2.12 心肌细胞中MDA测定 |
| 2.13 心肌细胞中NO测定 |
| 2.14 Fluo-3/AM荧光探针检测心肌细胞内游离Ca~(2+) |
| 2.15 统计学方法 |
| 结果 |
| 1. 原代心肌细胞免疫荧光纯度鉴定的结果 |
| 2. 倒置显微镜下观察心肌细胞形态结果 |
| 3. 氧化损伤模型的建立 |
| 4. 天香丹胶囊含药血浆和E2对原代心肌细胞存活率的影响 |
| 5. 天香丹胶囊含药血浆和E2预处理可改善H_2O_2诱导的原代心肌细胞凋亡形态变化 |
| 6. 天香丹胶囊含药血浆和E2预处理可降低H_2O_2诱导的原代心肌细胞凋亡率 |
| 7. 天香丹胶囊含药血浆和E2预处理可减少H_2O_2诱导的原代心肌细胞氧自由基的生成 |
| 8. 天香丹胶囊含药血浆和E2对氧化损伤后心肌细胞的 T-AOC、SOD、MDA和NO活性的影响 |
| 9. 天香丹胶囊含药血浆和E2预处理可以减少氧化损伤后心肌细胞的钙超载 |
| 讨论 |
| 第三部分 天香丹胶囊含药血浆和E2 对雌激素信号通路上相关蛋白的影响 |
| 1.实验仪器与材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 药物 |
| 1.3 实验主要用试剂 |
| 1.4 实验用主要仪器及耗材 |
| 2.实验方法 |
| 2.1 原代心肌细胞的分离培养 |
| 2.2 心肌细胞氧化损伤模型的建立 |
| 2.3 实验分组 |
| 2.4 Western Blot 检测心肌细胞中ESR1、GPR30、PI3K、AKT、eNOS、Nrf2和IP3R的蛋白表达 |
| 2.5 统计学方法 |
| 结果 |
| 1.1 天香丹含药血浆对氧化损伤心肌细胞中ESR1蛋白表达水平的影响 |
| 1.2 天香丹含药血浆对氧化损伤心肌细胞中GPR30蛋白表达水平的影响 |
| 1.3 天香丹含药血浆对氧化损伤心肌细胞中PI3K蛋白表达水平的影响 |
| 1.4 天香丹含药血浆对氧化损伤心肌细胞中AKT蛋白表达水平的影响 |
| 1.5 天香丹含药血浆对氧化损伤心肌细胞中eNOS蛋白表达水平的影响 |
| 1.6 天香丹含药血浆对氧化损伤心肌细胞中Nrf2蛋白表达水平的影响 |
| 1.7 天香丹含药血浆对氧化损伤心肌细胞中 IP3R 蛋白表达水平的影响 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 综述 雌激素保护缺血性心脏病作用机制的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士期间学位期间发表的学术论文 |
| 新疆医科大学硕士研究生学位论文导师评阅表 |
（7）基于ATF3/MAP2K3/p38 MAPK通路探究活血益气组分中药防治心梗后大鼠心室重构作用机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 急性心肌梗死后心室重构的中医病因病机分析 |
| 参考文献 |
| 综述二 心室重构与炎症相关的研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述三 活血益气组分中药防治心室重构的研究进展 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第二部分 实验研究 |
| 第一章 活血益气组分配伍中药对心肌梗死后大鼠心脏功能和结构影响的实验研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第二章 活血益气组分配伍中药对心肌梗死后大鼠心脏ATF3/MAP2K3/p38 MAPK信号通路影响的实验研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第三章 活血益气组分配伍中药对心肌梗死后大鼠心脏能量代谢影响的实验研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在校期间主要研究成果 |
| 个人简历 |
（8）基于SIRT1信号通路探讨舒心生脉丹对MI/RI模型大鼠的保护作用和机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 引言 |
| 文献综述 |
| 综述一中西医对心肌缺血再灌注损伤的认识及研究进展 |
| 1 西医对心肌缺血再灌注损伤的研究进展 |
| 1.1 心肌缺血再灌注损伤的概念及常见损伤 |
| 1.2 心肌缺血再灌注损伤的发病机制 |
| 1.3 西医对心肌缺血再灌注损伤的治疗 |
| 2 中医对心肌缺血再灌注损伤的研究进展 |
| 2.1 病名源流 |
| 2.2 病因病机 |
| 2.3 辨证分型 |
| 2.4 中医药治疗研究进展 |
| 综述二SIRT1 信号通路在心血管疾病中的研究进展 |
| 实验研究 |
| 第一章 MI/RI大鼠模型的建立及心功能指标测定 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验用药 |
| 1.3 实验主要试剂、器械、仪器与耗材 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 分组与给药 |
| 2.2 MI/RI大鼠模型建立 |
| 2.3 指标检测 |
| 2.4 统计学处理 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 MI/RI大鼠心电图改变 |
| 3.2 MI/RI大鼠血流动力学改变 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第二章 舒心生脉丹对MI/RI模型大鼠心肌组织形态学的影响 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 主要实验试剂 |
| 1.2 主要实验仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 石蜡病理切片的制备 |
| 2.2 HE染色法 |
| 2.3 透射电镜检测 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 HE染色实验结果 |
| 3.2 透射电镜实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第三章 舒心生脉丹对MI/RI模型大鼠心肌组织SIRT1 信号通路的影响 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验用药 |
| 1.3 实验试剂 |
| 1.4 实验仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 q RT-PCR检测法 |
| 2.2 Western blot检测法 |
| 2.3 IHC检测法 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 q RT-PCR实验结果 |
| 3.2 Western blot实验结果 |
| 3.3 IHC 化结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 讨论 |
| 1 舒心生脉丹的创立和意义 |
| 2 MI/RI模型建立的关键问题 |
| 3 实验指标分析 |
| 3.1 舒心生脉丹对心电图影响 |
| 3.2 舒心生脉丹对血流动力学的影响 |
| 3.3 舒心生脉丹对心肌组织形态学影响 |
| 3.4 对SIRT1 信号通路的影响 |
| 4.实验总结 |
| 结论 |
| 本文创新点 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 个人简介 |
（9）定心藤活性成分抗心肌缺血再灌注损伤的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 中英文对照表 |
| 引言 |
| 一、定心藤活性成分TL抗心肌缺血再灌注损伤药效研究 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验仪器 |
| 1.3 实验耗材 |
| 1.4 药品与试剂 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 主要溶液的配制 |
| 2.2 定心藤活性成分TL的配制 |
| 2.3 大鼠Langendorff离体心脏再灌注模型建立 |
| 2.4 大鼠离体心脏的制备 |
| 2.5 大鼠离体心脏灌注 |
| 2.6 实验分组与给药 |
| 2.7 观察指标 |
| 2.7.1 心脏血流动力学检测 |
| 2.7.2 心脏流出物乳酸脱氢酶(LDH)活性检测 |
| 2.7.3 心肌梗塞面积测定 |
| 2.8 统计处理 |
| 3 结果 |
| 3.1 定心藤活性成分TL对心肌缺血再灌注损伤血流动力学影响 |
| 3.2 定心藤活性成分TL对心肌缺血再灌注损伤LDH影响 |
| 3.3 定心藤活性成分TL对心肌缺血再灌注损伤心脏梗死面积影响 |
| 4 小结 |
| 二、定心藤活性成分TL抗心肌缺血再灌注损伤作用机制研究 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验仪器 |
| 1.3 药品与试剂 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 主要溶液的配制 |
| 2.2 大鼠离体心脏灌注 |
| 2.3 实验分组与给药 |
| 2.4 观察指标 |
| 2.4.1 心脏血流动力学检测 |
| 2.4.2 心脏流出物乳酸脱氢酶(LDH)活性检测 |
| 2.4.3 心肌梗塞面积测定 |
| 2.4.4 Caspase 3活性检测试剂盒检测酶活性 |
| 2.4.5 Caspase 9活性检测试剂盒检测酶活性 |
| 2.4.6 Western blot检测 |
| 2.5 统计处理 |
| 3 结果 |
| 3.1 定心藤活性成分TL基于5-HD对心肌缺血再灌注损伤的血流动力学影响 |
| 3.2 定心藤活性成分TL基于5-HD对心肌缺血再灌注损伤LDH的影响 |
| 3.3 定心藤活性成分TL基于5-HD对心肌缺血再灌注损伤的心脏梗死面积影响 |
| 3.4 定心藤活性成分TL基于5-HD对心肌缺血再灌注损伤的抗氧化指标的影响 |
| 3.5 定心藤活性成分TL基于5-HD对抗心肌缺血再灌注损伤凋亡的影响 |
| 4 小结 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 定心藤活性成分抗心肌缺血再灌注损伤的作用和机制研究 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
（10）蒙药当贡-3对大鼠缺氧-复氧心肌细胞活性影响的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 创新点及不足 |
| 参考文献 |
| 文献综述 中医药治疗心肌缺血-再灌注损伤的实验研究进展 |
| 参考文献 |
| 缩略语表 |
| 攻读学位期间发表文章情况 |
| 个人简历 |
| 致谢 |
四、中药对心肌细胞凋亡的保护作用（论文参考文献）
- [1]基于线粒体功能探讨二参颗粒对心肌缺血模型的保护作用及相关机制研究[D]. 柴晶美. 长春中医药大学, 2021(01)
- [2]益气活血中药调节线粒体自噬改善心肌细胞缺氧复氧损伤的机制研究[D]. 夏君彦. 北京中医药大学, 2021(08)
- [3]复方人参补气颗粒对心梗后心衰大鼠的影响及抗内质网应激作用研究[D]. 吴昱杰. 北京中医药大学, 2021(08)
- [4]基于网络药理学及代谢组学研究参附强心丸治疗心力衰竭的作用机制[D]. 郭丽君. 北京中医药大学, 2021(01)
- [5]杠柳毒苷对H9C2心肌细胞的影响及机制研究[D]. 张小莉. 天津中医药大学, 2021(01)
- [6]基于网络药理学天香丹抗心肌缺血的体外药效试验研究[D]. 唐梅. 新疆医科大学, 2021(09)
- [7]基于ATF3/MAP2K3/p38 MAPK通路探究活血益气组分中药防治心梗后大鼠心室重构作用机制[D]. 马如风. 北京中医药大学, 2020(04)
- [8]基于SIRT1信号通路探讨舒心生脉丹对MI/RI模型大鼠的保护作用和机制[D]. 刘岩松. 长春中医药大学, 2020(08)
- [9]定心藤活性成分抗心肌缺血再灌注损伤的作用及机制研究[D]. 杨小琪. 江西中医药大学, 2020(05)
- [10]蒙药当贡-3对大鼠缺氧-复氧心肌细胞活性影响的研究[D]. 杨潇. 内蒙古医科大学, 2020(03)