一、基因或干细胞移植治疗缺血性冠心病:新世纪的挑战（论文文献综述）
王雪姣[1]（2020）在《葛根素诱导骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞的研究》文中研究指明背景:心血管疾病（cardiovascular disease,CVD）作为世界上危害人类尤其是中老年人生命健康的主要疾患之一,因其极高的发病率以及近年来的年轻化趋势,而备受广大医者和学者的关注。急性心肌梗死（acute myocardial infarction,AMI）作为心血管疾病中重要一员,其科学实验及临床治疗的研究更是成为热点和难点。已经发育成熟的心肌细胞作为终末分化细胞,当发生心肌梗死时,心肌细胞不同程度受损甚至坏死,功能丧失。临床对于AMI的治疗方法主要包括药物治疗、介入治疗等,都是针对心肌梗死早期用于挽救受损但是还未凋亡的心肌细胞及其功能,但对于已经坏死或凋亡的心肌细胞却是回天乏术。心肌细胞坏死或凋亡,功能性心肌细胞由无功能的成纤维细胞取代进而形成瘢痕组织,心室重构,心脏功能下降,最终导致心力衰竭,导致患者生活质量下降,严重的威胁患者生命。由于心肌细胞损伤的不可逆性,解决心肌细胞的缺失成为心肌梗死治疗的根本问题。随着科学技术的进步,细胞生物工程学的发展使干细胞替代疗法成为治疗心肌梗死的一种新的具有前景的治疗方法。干细胞具有自我复制和多向分化的能力,使干细胞移植治疗心肌梗死成为研究热点。多项基础实验和临床试验已经表明干细胞移植能够修复受损的心肌细胞,促进血管新生,减少梗死面积,促进心脏功能的恢复。自2003年美国FDA率先批准对心肌梗死等疾病采用自体骨髓干细胞移植进行治疗,此后全球范围内开始了干细胞治疗的相关研究,骨髓间充质干细胞是其中应用最为广泛和成熟的。骨髓间充质干细胞（bone marrowmesenchymal stem cells,BMSCs）与胚胎干细胞等其他干细胞相比以下优点:具有容易获取,容易分离,体外培养及扩增具有稳定性,没有免疫排斥问题,不涉及医学伦理道德问题,具有多向分化潜能,运用恰当的诱导剂在适当条件下可以分化为骨细胞、软骨细胞、神经细胞、脂肪细胞、内皮细胞、干细胞、平滑肌细胞、心肌样细胞,上述优点使其成为了干细胞移植治疗心肌梗死等心血管疾病的重要种子细胞。BMSCs可以通过与心肌细胞共培养,基因修饰及药物诱导等方法分化为心肌细胞,但其分化率及安全性有待进一步提高。葛根素是葛根的重要成分,它可以影响骨髓间充质干细胞的分化。葛根素及其多种制剂已经通过各种药剂形式广泛应用于临床各种心血管疾病的治疗。葛根素作为中药有效成分,与西药相比,毒副作用更小,使用更安全,临床推广价值显着。目前已有研究发现,葛根素不仅能保护受损心肌细胞、保护心血管,还能在体外诱导胚胎干细胞分化为心肌样细胞,提高心室细胞分化效率。目的:本实验应用葛根素体外诱导骨髓间充质干细胞定向分化为心肌样细胞,从形态学和分子生物学层面探讨葛根素对骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞的诱导能力,通过其诱导分化最适浓度的筛选提高分化率,为心肌梗死等心血管疾病的干细胞移植治疗提供理论基础。方法与结果:为了探讨葛根素诱导BMSCs分化为心肌样细胞的可行性,运用全骨髓贴壁法分离培养SD大鼠的四肢骨的BMSCs。对第2代BMSCs分别运用0（对照组）、50、100、200μmol/L葛根素进行体外定向诱导。观察培养细胞的形态,结果可见,BMSCs由0小时的悬浮状态到24小时时均匀贴壁;3天后可见细胞圆钝突起;7天后细胞呈现长梭形等不规则状态。葛根素诱导7天后,细胞增殖加快,细胞形态更加修长;诱导28天后,细胞呈现方向性的紧密排列状态。BMSCs的形态经过不同浓度葛根素诱导无差异。运用流式细胞技术对第3代BMSCs进行表面抗原鉴定,结果显示,CD29、CD45、CD90的阳性率表达分别为95.1%、7.4%和93.4%。表明细胞为纯化的BMSCs。运用免疫细胞化学检测法检测间隙连接蛋白43（Cx43）、心肌肌钙蛋白I（c Tn I）、心肌肌钙蛋白T（c Tn T）在诱导4周后各组的表达。结果显示,各诱导组均可见Cx43、c Tn I及c Tn T的阳性表达,空白对照组表达呈阴性,其中100μmol/L诱导组较其他组的阳性表达最高,差异具有统计学意义（P<0.05）。运用激光共聚焦荧光技术检测间隙连接蛋白43（Cx43）、心肌肌钙蛋白I（c Tn I）、心肌肌钙蛋白T（c Tn T）,对比诱导4周后对照组与100μmol/L诱导组的表达,提示100μmol/L诱导组呈阳性表达,对照组呈阴性表达,差异显着。运用Western blotting检测法检测间隙连接蛋白43（Cx43）、心肌肌钙蛋白I（c Tn I）、心肌肌钙蛋白T（c Tn T）在各组诱导4周的BMSCs的表达。结果显示,各组均在蛋白水平表达Cx43、c Tn I及c Tn T,其中100μmol/L诱导组的表达最高,对照组最低,差异有统计学意义（P<0.05）。实时荧光定量PCR（RT-q PCR）技术检测心肌早期转录因子GATA-4和心肌细胞增强因子2c（MEF2c）在各诱导组诱导分化1周、2周、4周细胞的表达,检测T-box5和amphiphysin-2（Bin1）在空白对照组与100μmol/L诱导组诱导分化1周、2周、4周细胞的表达。结果显示,经葛根素诱导后,各个基因的表达与对照组相比整体呈现上升趋势。虽然各个基因的最高表达量呈现在不同时间段,但都出现在100μmol/L诱导组。各诱导组相比,GATA-4的最高表达量出现在100μmol/L诱导组诱导4周时,MEF2c的最高表达量出现在100μmol/L诱导组诱导2周时。100μmol/L诱导组与空白对照组相比,T-box5的最高表达量出现在100μmol/L诱导组诱导1周时,Bin1的最高表达量出现在100μmol/L诱导组诱导4周时。相较于其他诱导组,100μmol/L组表达最高（P<0.05）。结论:1.采用全骨髓贴壁法分离培养的SD大鼠四肢骨髓细胞可以纯化为骨髓间充质干细胞。2.不同浓度葛根素可以在体外诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化。3.100μmol/L为葛根素体外诱导骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞的最佳浓度。
李康[2]（2019）在《黄芪甲苷对氧化应激诱导的脐带间充质干细胞凋亡作用的影响》文中研究指明目的:心肌梗死（Myocardial infarction,MI）患者因冠脉血流中断导致心肌细胞坏死丢失和瘢痕形成,传统疗法如药物、介入和外科手术可有效缓解病症、减轻病痛和降低患者死亡率,但是不能从根本上补充和再生心肌组织,最终导致心力衰竭乃至死亡的发生,严重影响人类的心身健康。近年来,干细胞因其高度增殖和多向分化的潜力为心肌梗死的治疗带来了曙光,由脐带间充质干细胞（Umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSCs）易分离扩增、极低的免疫原性和致瘤性,成为治疗心肌梗死理想的种子细胞之一。然而,干细胞植入梗死心肌组织后面临氧化应激和缺血缺氧微环境,导致植入干细胞因大量死亡而不能充分发挥治疗效果,因此,如何有效提高干细胞在缺血微环境下的存活能力,成为解决干细胞疗效低下的的重要问题之一。研究表明,黄芪甲苷（Astragaloside IV,AS-IV）在心血管疾病中具有显着的抗氧化应激、抗凋亡、抗纤维化和促血管新生等作用,因此,本研究着眼干细胞植入心肌梗死部位后低存活率的问题,研究AS-IV能否抑制氧化应激诱导的脐带间充质干细胞的凋亡,为AS-IV抗凋亡机制的深入研究以及促进干细胞治疗心肌梗死的临床转化应用奠定新的基础。结果:1.UC-MSCs的分离、鉴定和活性检测（1）UC-MSCs的分离培养和鉴定通过荧光显微镜观察UC-MSCs的形态学特征,发现UC-MSCs呈纤维样、旋涡状生长,利用流式细胞仪对Passage 3（P3）代UC-MSCs的表面标记物进行鉴定（CD44+、CD73+、CD90+、CD34-、CD45-、HLA-DR-）,最终获得阳性率达>95%以上的UC-MSCs。（2）UC-MSCs的活性检测利用7-AAD流式细胞学检测方法对经传代培养和扩增后的Passage 2（P2）或Passage 3（P3）代细胞进行活性分析,显示活细胞比例>98%。2.AS-IV及其溶媒介质对脐带间充质干细胞的正常生长没有影响用DMSO配制AS-IV溶液,DMSO在细胞培液中的最大浓度≤0.1%。分别采用CCK 8和AnnexinⅤ/PI双染法流式细胞术检测不同浓度AS-IV（0、10、25、50、100μM）及0.1%DMSO对正常培养条件下的UC-MSCs的毒副作用,发现AS-IV及0.1%DMSO处理UC-MSCs 24 h后,细胞存活率均达95%以上,各组之间细胞存活率没有显着差异,表明AS-IV不会对UC-MSCs的增殖活性产生不良影响,不会诱导UC-MSCs的凋亡。3.氧化应激诱导UC-MSCs体外凋亡模型的建立通过Western blotting检测凋亡蛋白cleaved-caspase3的表达变化,利用AnnexinⅤ/PI检测凋亡与活细胞百分比。利用不同浓度梯度的H2O2（50、100、200μM）处理UC-MSCs 6h,AnnexinⅤ/PI检测结果显示200μM的H2O2能够显着诱导UC-MSCs的早期凋亡、晚期凋亡和晚期坏死细胞的产生（P<0.05）,使活细胞百分比显着下降至约85%。进一步利用200μM H2O2分别处理UC-MSCs不同时间（0、1、3和6h）,Western blotting结果显示,cleaved-caspase3的表达在6 h时明显升高（P<0.05）。因此,我们选择用200μM的H2O2处理UC-MSCs 6h作为下一步抗凋亡信号机制研究的基础。4.AS-IV抑制氧化应激诱导的UC-MSCs凋亡利用不同浓度的AS-IV（0、10、25、50、100μM）预处理UC-MSCs24h后,在AS-IV始终存在的前提下,用200μM H2O2处理UC-MSCs 6h,AnnexinⅤ/PI检测结果显示,50μMAS-IV可显着抑制H2O2诱导的早期（AnnexinⅤ+/PI-）和晚期凋亡（AnnexinⅤ+/PI+）（P<0.05）,无法逆转氧化应激诱导的坏死细胞的比例。通过qRT-PCR检测caspase 3mRNA水平的表达变化,结果显示,50μMAS-IV可以显着抑制H2O2诱导的caspase3表达水平的升高（P<0.05）。这些结果证实AS-IV可显着抑制氧化应激诱导的UC-MSCs凋亡。结论:本研究以建立氧化应激模型为前提,发现黄芪甲苷可显着抑制过氧化氢诱导的UC-MSCs凋亡,为心肌梗死的治疗提供了新的策略。
成文堃[3]（2017）在《基于miR-126调控VEGF信号通路的活血益气方促血管新生分子机制的拆方研究》文中认为治疗性血管新生,又称心脏的“自我搭桥”,是在原有的毛细血管基础上形成新血管网络结构的过程,对冠心病缺血心肌的血运重建和血液灌流具有重要意义。血管内皮细胞（EC）是缺血性心脏病中血管新生的主要靶细胞,血管新生信号分子启动EC发生增殖,并与细胞外基质（ECM）解离后,穿过血管壁发生迁移,继而逐渐由血管芽发展为三维血管网络体系,因此在缺氧早期促进EC的增殖、迁移及维持其正常功能对新血管的形成十分必要。血管内皮生长因子（VEGF）是目前发现的最重要的血管生长因子之一,其诱导特异性受体KDR及其下游信号通路激活可涉及调控内皮祖细胞分化,内皮增殖和存活、迁移、发芽,增加EC通透性等多个过程。作为基因调控的分子开关,miR-126是血管内皮特异性微小RNA（miRNA）之一,已被证实是参与心血管疾病及血管新生的重要调控因子,VEGF是miR-126介导血管新生最主要的靶基因。活血益气方是基于活血益气法构建的临床经验方,可显着改善心肌梗死后心肌缺血,促进梗死边缘区心肌组织的血管新生。本研究预期在明确miR-126对血管新生及VEGF/KDR信号通路调控作用的基础上,探讨活血益气方调控miR-126靶向VEGF信号通路介导缺氧人脐静脉内皮细胞（HUVEC）增殖、迁移从而促进血管新生的分子机制,并通过对其拆方活血方及益气方的研究进一步揭示活血益气方促进血管新生的科学内涵和配伍规律。目的:以HUVEC作为实验模型,探讨miR-126对血管EC增殖及迁移的影响,明确miR-126在血管新生中的调控作用,揭示血管新生转录后水平的上游基因调控机制;阐明miR-126对VEGF/KDR信号通路的“分子开关”作用,揭示miR-126介导血管新生的下游分子机制。在此基础上,探讨活血益气方及其拆方对缺氧HUVEC增殖、凋亡及迁移的调控作用,并进一步揭示miR-126靶向VEGF信号通路在活血益气方促进血管新生过程中的关键作用,进而从miRNA基因调控角度揭示活血益气方促血管新生的作用机制和配伍规律。方法:（1）将HUVEC置于三气培养箱（1%02,5%CO2,94%N2,37℃）中建立缺氧损伤模型,分为缺氧组、活血益气方组、活血方组及益气方组,另设正常对照组置于细胞培养箱（5%CO2,37℃）中常规培养24h后,同步化24h。活血益气方组、活血方组及益气方组给予含10%相应药物血清培养基培养,模型组及正常对照组给予含10%正常对照血清培养基培养,干预24h。采用CCK-8法检测细胞增殖,Transwell小室检测细胞迁移,Annexin V-FITC/PI双染结合流式细胞仪检测细胞凋亡,WST-1法测定细胞内超氧化物歧化酶（SOD）活力,微板法测定丙二醛（MDA）含量及细胞培养上清乳酸脱氢酶（LDH）含量。实时荧光定量PCR法检测细胞miR-126、VEGF、KDR及下游信号通路关键分子 PKC、Ras、Raf-1、MEK、ERK、FAK、p38、MAPKAPK、HSP27 mRNA的表达水平。（2）将 miR-126 mimics（200nM）/miR-126 inhibitor（400nM）转染至 HUVEC 中 48h 建立miR-126过表达/表达受抑HUVEC模型,另设相应的mimics/inhibitor negative control转染组,采用CCK-8法检测各组细胞增殖,Transwell小室检测细胞迁移,实时荧光定量PCR法检测细胞VEGF、KDR、PKC、p38 mRNA表达水平。（3）建立miR-126过表达/表达受抑HUVEC模型,给予活血益气方药物血清干预细胞24h,采用CCK-8法检测细胞增殖,Transwell小室检测细胞迁移,实时荧光定量PCR法检测细胞VEGF、KDR、PKC、p38 mRNA表达水平的变化。结果:（1）与正常对照组比较,缺氧组HUVEC增殖显着减少;与缺氧组比较,活血益气方组、活血方组及益气方组HUVEC增殖均显着增加,差异有统计学意义（P<0.01）;活血益气方组HUVEC增殖高于活血方组、益气方组,但未见统计学差异（P>0.05）。（2）与正常对照组比较,缺氧组细胞PKC、Ras、Raf-1 mRNA表达水平均显着下调,差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）;MEK、ERK mRNA表达水平下调,但未见统计学差异（P>0.05）。与缺氧组比较,活血益气方组、益气方组细胞PKC、Ras、Raf-1 mRNA表达水平显着上调（P<0.05或P<0.01）,活血方组细胞Raf-lmRNA表达水平显着上调（P<0.01）,差异有统计学意义;活血益气方组、活血方组、益气方组细胞MEK mRNA表达水平上调,活血益气方组ERK mRNA表达水平上调,但差异均无统计学意义（P>0.05）。活血益气方组PKC、Ras mRNA表达水平显着高于活血方组和益气方组,差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）;活血益气方组MEK、ERK mRNA表达水平高于活血方组和益气方组,但未见统计学差异（P>0.05）。（3）与正常对照组比较,缺氧组HUVEC晚期凋亡率及总凋亡率均显着增加,差异有统计学意义（P<0.01）;缺氧组早期凋亡率增加,但未见统计学差异（P>0.05）。与缺氧组比较,活血方组、益气方组HUVEC早期凋亡率显着减少,差异有统计学意义（P<0.05）;活血益气方组早期凋亡率减少,但未见统计学差异（P>0.05）;活血益气方组、活血方组HUVEC晚期凋亡率及总凋亡率显着减少,差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）;益气方组晚期凋亡率及总凋亡率减少,但未见统计学差异（P>0.05）。活血益气方组HUVEC晚期凋亡率低于益气方组,但未见统计学差异（P>0.05）。（4）与正常对照组比较,缺氧组SOD活力显着下降,MDA、LDH含量显着增加（P<0.01或P<0.05）。与缺氧组比较,活血益气方组SOD活力显着提高（P<0.01）;活血益气方组、益气方组MDA含量显着降低（P<0.01）;活血益气方组、活血方组、益气方组LDH含量均显着降低（P<0.01或P<0.05）。活血益气方组SOD活力显着高于活血方组、益气方组（P<0.01）;活血益气方组MDA显着低于活血方组、益气方组（P<0.01）;活血益气方组LDH含量较活血方组低,差异有统计学意义（P<0.05）,较益气方组低,但未见统计学差异（P>0.05）。（5）与正常对照组比较,缺氧组HUVEC迁移数显着减少（P<0.01）。与缺氧组比较,活血益气方组、活血方组及益气方组HUVEC迁移数均显着增加（P<0.01）。活血益气方组HUVEC迁移数显着高于活血方组,差异有统计学意义（P<0.01）,也高于益气方组,但未见统计学差异（P>0.05）。（6）与正常对照组比较,缺氧组细胞FAK、p38、MAPKAPK、HSP27mRNA表达水平均显着下调（P<0.01）。与缺氧组比较,活血益气方组、活血方组、益气方组细胞FAK、p38 mRNA表达水平显着上调（P<0.05或P<0.01）;活血益气方组、益气方组细胞MAPKAPK mRNA表达水平显着上调,差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）,活血方组细胞MAPKAPK mRNA表达水平上调,但未见统计学差异（P>0.05）。活血益气方组HSP27 mRNA表达水平显着上调,差异有统计学意义（P<0.05）,活血方组、益气方组HSP27 mRNA表达水平上调,但未见统计学差异（P>0.05）。（7）与正常对照组比较,缺氧组细胞VEGF mRNA表达水平显着上调（P<0.05）,KDR mRNA表达水平显着下调（P<0.01）。与缺氧组比较,活血益气方组细胞VEGF mRNA表达水平显着上调,差异有统计学意义（P<0.01）,活血方组、益气方组细胞VEGF mRNA表达水平增加,但未见统计学差异（P>0.05）;活血益气方组、活血方组、益气方组细胞KDR mRNA表达水平上调,但均未见统计学差异（P>0.05）。活血益气方组VEGF mRNA表达水平显着高于活血方组和益气方组（P<0.05）。（8）与正常对照组比较,缺氧组和药物组细胞miR-126均显着下调（P<0.05或P<0.01）。与缺氧组比较,活血益气方组、活血方组细胞miR-126下调,差异有统计学意义（P<0.05）;益气方组细胞miR-126有下降趋势,但未见统计学差异（P>0.05）。（9）与 mimics 阴性对照组（mimics NC 组）比较,转染 miR-126 mimics（miR-126 过表达组）细胞增殖、迁移显着下降（P<0.01）。与inhibitor阴性对照组（inhibitor NC组）比较,转染miR-126 inhibitor组（miR-126表达受抑组）细胞增殖、迁移显着上升（P<0.01或P<0.05）。（10）与mimics NC组比较,miR-126 mimics组miR-126 mRNA表达水平显着上调,VEGF、KDR、PKC mRNA 表达水平均显着下调（P<0.05 或 P<0.01）。与 inhibitor NC 组比较,miR-126 inhibitor 组 miR-126 mRNA 表达水平显着下调,VEGF、KDR、PKC、p38 mRNA表达水平显着上调（P<0.05或P<0.01）。（11）与mimics NC+正常对照血清组比较,转染miR-126 mimics+正常对照血清组细胞增殖、迁移显着下降（P<0.01）。与miR-126 mimics+正常对照血清组比较,miR-126 mimics+活血益气方血清组细胞增殖、迁移显着增加（P<0.01）。（12）与inhibitor NC+正常对照血清组比较,转染miR-126 inhibitor+正常对照血清组 VEGF、KDR、PKC、p38 mRNA表达均显着上调（P<0.05 或P<0.01）,与 miR-126 inhibitor+正常对照血清组比较,miR-126 inhibitor+活血益气方血清组VEGF、KDR、PKC、p38 mRNA表达水平显着增加（P<0.05或P<0.01）。结论:（1）活血益气方及其拆方可促进缺氧后HUVEC增殖与迁移,减少HUVEC的凋亡,作用机制可能与其下调内皮细胞miR-126 mRNA表达,上调VEGF、KDR以及其下游PKC-Ras-Raf-1、FAK、p38-MAPKAPK-HSP27信号通路,并减轻细胞氧化损伤,提高抗氧化能力有关,这可能是活血益气方促进治疗性血管新生的作用机制之一。综合分析,活血益气方促增殖和迁移作用优于活血方和益气方,活血方和益气方具有协同配伍的作用。（2）miR-126可显着抑制HUVEC增殖、迁移,对血管新生具有负性调控作用,作用机制可能与miR-126对VEGF、KDR及下游相关信号通路关键分子的抑制作用有关。（3）活血益气方可改善miR-126对HUVEC增殖和迁移的抑制作用,作用机制可能与其减少miR-126对VEGF、KDR、PKC及p38的负性调控有关,提示活血益气方促血管新生的细胞机制与其调控miR-126靶向VEGF信号通路进而促进内皮细胞增殖和迁移有关。
石宇杰,易军,陈韵岱[4]（2016）在《干细胞治疗缺血性心肌病的研究进展》文中研究说明急性心肌梗死已成为当前世界致残、致死的主要疾病之一。随着冠心病介入技术的发展以及早期再灌注策略的实施,对于急性心肌梗死的抢救治疗已取得了长足的进步,极大的降低了急性心肌梗死患者的死亡率,改善了预后。然而,急性心肌梗死导致的大量心肌细胞坏死以及随之而来心功能衰竭,依然是困扰心血管医师的主要难题。干细胞作为一类具有多种分化潜能的"万能细胞",被人们寄予了厚望。近年来,关于干细胞治疗缺血性心肌病、
张宁坤[5]（2016）在《脐带华通胶源间充质干细胞向心肌细胞分化潜能的研究》文中研究指明目的:通过脐带华通胶源间充质干细胞在体外诱导和体内移植观察其向心肌细胞分化的特性,选择心肌重建新的优良种子细胞,并在体内外分子、细胞、整体水平上,确证华通胶源间充质干细胞向心肌分化潜能,为华通胶源间充质干细胞修复重建心肌临床研究奠定理论基础。方法:提取脐带华通胶,将华通胶剪成细小的组织块,使用贴壁法分离间充质干细胞,组织块贴壁培养12-14天细胞融合为原代细胞,当细胞贴壁生长达到80-90%融合时传代培养。取第二代生长良好的细胞进行流式检测表面标记CD44、CD73、CD90、CD105、HLA-ABC、CD34、CD45、HLA-DR。使用四甲基偶氮唑盐（MTT）法进行细胞增殖特性检测,取生长良好的第2代WJMSCs进行成骨、成脂肪、成软骨分化鉴定。心肌特异分化基因表达特征检测,应用QT-PCR定量检测WJMSCs心肌早期特异转录因子Isl-1、flk-1、Nkx2.5表达水平;在5-氮胞苷诱导下向心肌细胞分化和心肌细胞特异标志α-actin、Tn T、GATA-4、connexin-43检测。制作大鼠心肌梗死模型,在模型建立14天后在体内进行WJMSCs移植,移植量为0.5ml计2×106细胞,心梗大鼠移植WJMSCs一个月,行超声心动图检测,观察心功能的变化;免疫荧光共聚焦、m RNA水平、蛋白水平进行心肌细胞特异标志α-actin、Tn T、GATA-4、connexin-43检测。结果:脐带华通胶经组织块贴壁法培养,6天WJMSCs从组织块中爬出,呈梭型贴壁生长,12-14天WJMSCs在组织块周围生长并接近融合,经传代后24h,细胞进入对数生长期,6天后,细胞进入平台生长期,增殖减慢,8天后细胞进入衰亡期,取2代生长良好的WJMSCs进行流式细胞仪检测表面标志,WJMSCs表达CD44、CD73、CD90、CD105、HLA-ABC,不表达CD34、CD45、及HLA-DR,符合间充质干细胞的特性。WJMSCs在成骨、成脂肪、成软骨诱导培养基中培养2周后,细胞碱性磷酸酶、茜素红、油红“O”、亚甲蓝染色呈阳性反应,表明WJMSCs可向成骨、成脂肪、成软骨细胞分化。QT-PCR定量检测WJMSCs表达心肌早期特异转录因子flk-1、Isl-1、Nkx2.5;WJMSCs在5-氮胞苷诱导下可以向心肌样细胞分化,表达心肌细胞特异标志α-actin,Tn T,GATA-4,connexin-43。大鼠经开胸结扎前降支,结扎后出现大面积心肌表面变苍白、且伴有室壁运动紊乱或减弱,心电图检查可见两个或两个以上相邻导联Q波形成且>1/4R波,宽度>0.04 s,左室射血分数≤45%,大鼠心肌梗死模型制作成功;细胞移植后进行超声心动图检查,移植组LVEF治疗后（61.62±8.74%）较治疗前（43.02±3.67%）及对照组治疗后（43.43±4.2%）相比均显着增高（P<0.01）;LAVW移植组LAVW治疗后（1.84±0.36 mm）较治疗前（1.28±0.45 mm）及对照组治疗后（1.21±0.31 mm）相比显着增高（P<0.5）;免疫荧光共聚焦、m RNA水平、蛋白水平进行心肌细胞特异标志α-actin、Tn T、GATA-4、connexin-43检测,WJMSCs移植组明显高于对照组。结论:研究表明WJMSCs在体外培养具有多向分化的潜能,具有心肌细胞早期转录因子,经5-氮胞苷诱导可向心肌细胞分化,表达心肌细胞所特有的细胞表面标志,证实WJMSCs在体外可以向心肌细胞分化;WJMSCs在体外移植到心肌梗死大鼠体内后,可明显改善大鼠心功能,病理检查心肌特异标志物明显高于对照组,在实验大鼠心梗模型上证实了WJMSCs在体内可以向心肌细胞分化。
宁田海,佟金[6]（2015）在《《中国循环杂志》2015年第30卷关键词索引》文中研究表明说明:1本索引按关键词汉语拼音字母顺序排序。2在第1个汉字相同的情况下,按第2个汉字拼音字母顺序排序,以后依次类推。在第1个汉字音同字不同的情况下,按笔划多少排列。3在关键词相同的情况下按发表先后顺序排列。4以英文为首的词,按第1个英文字母顺序先后排列居文中关键词之前。5在第1个英文字母相同的情况下,按第2个英文字母顺序先后排列,依次类推。6文题、作者后括号内数字为期号,最后为起页。
王学文[7]（2012）在《慢病毒介导S100A1基因转染人脐带华通胶间充质干细胞的实验研究》文中指出第一部分改良冠脉结扎法提高大鼠心梗模型存活率方法探讨[目的]探讨提高冠脉结扎法大鼠心梗模型制作存活率方法。[方法]大鼠麻醉后,经口腔插管连通动物呼吸机,开胸挂线暴露视野,利多卡因心肌表面浸润麻醉减慢心率后结扎其冠状动脉。于术后4周麻醉处死大鼠,取出心脏,观察心脏外形及梗死瘢痕,并进行HE染色后于显微镜下观察其病理变化。[结果]此法制作心梗模型的成功率为100%,术后动物存活率为96.7%左右。术后4周取出心脏,大体形态见左心室扩大重塑,结扎后引起缺血区心室壁变薄凹陷,颜色较周围心肌浅；病理切片提示心腔内膜纤维化。[结论]本实验在原有冠脉结扎制作心梗模型的基础上,通过精细化、改良及简化步骤,提高了心梗模型的存活率,使模型更为稳定,降低了大鼠血管结扎后的死亡率。为心肌梗死的基础研究提供了可靠模型,减少了动物模型不稳定给实验带来的偏倚。第二部分慢病毒介导S100A1基因转染人脐带华通胶间充质干细胞的实验研究【目的]探讨慢病毒（Lentiviral）不同转染复数、不同时间点转染人脐带华通胶间充质干细胞（Umbilical cord wharton’s jelly-derived Mesenchymal StemCells,UW-MSCs）的效率及其对细胞生长的影响；观察转染后UW-MSCs体内心肌移植的安全性。[方法]用含有增强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein, EGFP）报告基因的重组慢病毒S100A1（Lenti-S100A1-EGFP）,以感染复数（multiplicity of infection, MOⅠ）分别为0、5、10、50转染体外培养的人脐带华通胶间充质干细胞,2d、7d、10d时在荧光显微镜下观察EGFP的表达,检测子代细胞的活力、增殖倍数、分化情况,以评估慢病毒对UW-MSCs存活、增殖、分化能力的影响;利用流式细胞仪检测（?）Lenti-S100A1-EGFP对UW-MSCs的转染效率及荧光指数（fluorescence index number, FI）。10d时Real-time PCR和Western blot检测S100A1mRNA转录水平及蛋白含量；将转染后的UW-MSCs移植入心肌梗死模型的梗死心肌内,观察大鼠生命体征是否发生恶性变化;4周后解剖行病理切片检查,在荧光显微镜下观察是否有绿色荧光蛋白表达。[结论]慢病毒转染UW-MSCs36小时后即可观察到UW-MSCs发出绿色荧光,荧光强弱不一,随着时间的延长,荧光的强度逐渐增强,7天后达到稳定的状态,在2d、7d、10d时不同MOI Lenti-S100A1-EGFP转染UW-MSCs的活力、增殖倍数、分化能力无明显变化（P>0.05）;在同一感染复数时,7d比2d、10d比7d的增殖倍数显着增强（P<0.05）；10d时,PCR检测结果表明：相同MOI值时实验组CT指数与对照组相比MOI=5、10、50时具有统计学意义（MOI=5时P=0.015：MOI=10时P=0.005：MOI=50时P=0.02）：Western blot检测结果表明实验组吸光值显着高于对照组（P=O.003）。流式细胞仪检测enti-S100A1-EGFP转染UW-MSCs的转染率和荧光指数随着MOI增加（0、5、10、50）和培养时间（2d、7d、10d）的延长而有不同程度的增加（P<0.05）。体内移植后4周,大鼠未出现生命体征恶化改变及死亡；病理切片荧光显微镜下观察发现,移植UW-MSCs的心肌表面可见绿色荧光蛋白表达。[讨论]本研究表明：Lenti-S100A1-EGFP能有效的转染UW-MSCs,随感染复数的增加可短期内（约10天）随转染时间的延长,转染率和荧光指数明显增加,在转染过程中Lenti-S100A1-EGFP对细胞的活力、生长无影响,对于改造UW-MSCs, Lentiviral是一种安全、有效的基因转移载体。本研究还初步探讨了Lenti-S100A1-EGFP介导的UW-MSCs在动物体内移植的安全性以及荧光在体内表达的持久性,结果表明慢病毒转染的UW-MSCs体内移植后未出现死亡大鼠,荧光可以在体内持续表达4周,但由于本实验观察时间较短,未能给出荧光在体内持续表达的时间阈值,在以后的试验中可进一步研究。
郑景辉[8]（2010）在《心血瘀阻证心肌微环境变化及对骨髓间充质干细胞移植的影响》文中研究表明目的：研究心血瘀阻证心肌微环境对骨髓间充质干细胞（bone mesenchymal stem cells BMSCs）向心肌样分化的作用及养心通脉有效部位方（active principle region of Yangxin Tongmai Formula apr-YTF）对其影响。方法：（1）理论探讨：通过对“微环境（microenvironment）"概念,发展历史,及当前学术趋势的检索,从理论上探讨微环境的概念、学术发展趋势、心血瘀阻证心肌微环境的变化特点及其对BMSCs移植的影响,并为从改善微环境的角度寻求中医药干预BMSCs向心肌分化提供理论依据。（2）实验研究：①建立大鼠急性心梗心血瘀阻证模型,随机分为A、B两部分,A部分取大鼠心肌组织,用ELISA方法观测其基质金属蛋白酶2（matrix metalloproteinase-2 MMP-2）、基质金属蛋白酶9 （matrix metalloproteinase-9 MMP-9）的表达；用Western-Blots方法检测细胞分化相关信号转导通路PI3K、p38中相关蛋白的变化。B部分动物模型在梗死心肌部位移植BMSCs观测其上述指标；同时用免疫组化双染的方法观测梗死心肌组织中结蛋白Desmin、肌球蛋白重链MHC的表达,用RT-PCR的方法检测心肌转录因子GATA-4 mRNA的表达,然后分析心肌分化指标和MMP-2、MMP-9,信号转导通路PI3K、p38相关蛋白表达的相关性。②建立大鼠急性心梗心血瘀阻证模型,在梗死心肌部位移植BMSCs;并用apr-YTF进行干预。用ELISA方法观测心肌组织中MMP-2、MMP-9的表达；用Western-Blots方法检测心肌组织中细胞分化相关信号转导通路PI3K、p38中相关蛋白的变化。同时用免疫组化双染的方法观测其心肌结蛋白Desmin、肌球蛋白重链MHC的表达,用RT-PCR的方法检测心肌转录因子GATA-4 mRNA的表达,然后分析上述心肌分化指标和MMP-2、MMP-9、信号转导通路PI3K、p38中相关蛋白的相关性。③体外模拟急性心梗心血瘀阻证微环境,在此微环境下培养BMSCs并用apr-YTF进行干预。用ELISA方法观测其培养液中MMP-2、MMP-9的表达；用Western-Blots方法检测细胞分化相关信号转导通路PI3K、p38中相关蛋白的变化。同时用免疫细胞化学方法观测其心肌结蛋白Desmin、肌球蛋白重链MHC的表达,用RT-PCR的方法检测心肌转录因子GATA-4 mRNA的表达,然后分析上述心肌分化指标和MMP-2、MMP-9,信号转导通路PI3K、p38中相关蛋白的相关性。结果：（1）接受BMSCs移植后可见心血瘀阻证心肌梗死边缘区有Desmin-Brdu、MHC-Brdu两种蛋白的同时表达,而在假手术组和健康对照组未见双染细胞表达。GATA-4 mRNA心血瘀阻证组高于假手术组（P＜0.05）,而健康对照组的心肌中未检出表达。（2）未作BMSCs移植各部分MMP-2心血瘀阻证表达高于健康对照和假手术组（P＜0.05）,接受BMSCs移植后大鼠心肌组织各组间未见统计学差异（P＞0.05）；相同组别内部比较心血瘀阻证组移植BMSCs部分表达低于未作BMSCs移植部分（P＜0.05）。未作BMSCs移植各部分MMP-9三组间均有差异,其中心血瘀阻证组最高,其次为假手术组、健康对照组（P＜0.05）,接受BMSCs移植后心血瘀阻证组和假手术组低于健康对照组（P＜0.05）,相同组别内部比较心血瘀阻证组移植BMSCs部分表达低于未作BMSCs移植部分（P＜0.05）。未作BMSCs移植各组大鼠心肌组织p-Akt统计学未见明显差异（P＞0.05）,接受BMSCs移植心血瘀阻证表达高于健康对照和假手术组（P＜0.05）,相同组别内部比较心血瘀阻证组和健康对照组中移植BMSCs部分表达高于未作BMSCs移植部分（P＜0.05）。未作BMSCs移植各组p-p38数据统计学未见明显差异（P>0.05）,接受BMSCs移植后各组大鼠心肌组织,各组之间未见差别（P＞0.05）,相同组别内部比较心血瘀阻证组中移植BMSCs部分表达高于未作BMSCs移植部分（P＜0.05）。各组标本GATA-4 mRNA与MMP-9、p-p38含量表达呈正相关,而与MMP-2、p-Akt未见显相关性。（3）apr-YTF干预BMSCs移植心血瘀阻证心肌后经心肌结蛋白Desmin-Brdu抗体染色后,其中（rhG-CSF）+BMSCs组和（apr-YTF）+BMSCs组阳性细胞计数均高于NS+BMSCs组（P＜0.05）,前两者之间无差别（P＞0.05）。MHC-Brdu抗体染色后,（rhG-CSF）+BMSCs组和（apr-YTF）+BMSCs组阳性细胞计数与高于NS+BMSCs组（P＜0.05）,前两者之间无差别（P＞0.05）。GATA-4 mRNA IOD值半定量分析NS+BMSCs组、（rhG-CSF）+BMSCs组和（apr-YTF）+BMSCs组均高于NS+DMEM组,（apr-YTF）+BMSCs组高于NS+BMSCs组（P＜0.05）。（4） apr-YTF干预BMSCs移植心血瘀阻证心肌酶联免疫吸附法检测显示MMP-2 （apr-YTF）+BMSCs组表达低于NS+DMEM组和NS+BMSCs组（P＜0.05和P＜0.01）。MMP-9各组间未见差异（P＞0.05）。经对Western-Blots法检测p-Akt （apr-YTF）+BMSCs组表达高于NS+DMEM组、NS+BMSCs组和（rhG-CSF）+BMSCs组（P＜0.05）。p-p38 （apr-YTF）+BMSCs组表达高于NS+DMEM （P＜0.05）,其余各组间未见统计学差异（P＜0.05）。（5）体外模拟心血瘀阻证微环境对BMSCs诱导后,在正常对照组和DMEM组中未发现Desmin及MHC阳性细胞；心血瘀阻证组、apr-YTF组和心血瘀阻证+（apr-YTF）组Desmin及MHC免疫组化染色均可见弱阳性免疫复合物。Desmin的表达的IOD值在在心血瘀阻证组和心血瘀阻证+（apr-YTF）组均高于apr-YTF组（P＜0.05）。MHC的表达的OD值在在心血瘀阻证组和心血瘀阻证+（apr-YTF）组均高于apr-YTF组（P＜0.05）,但是前两者之间无统计学差异。心血瘀阻证组和心血瘀阻证+（apr-YTF）组GATA-4 mRNA相对光密度值与正常对照组比较差异具有统计学意义（P＜0.05和P＜0.01）。（6）体外模拟心血瘀阻证微环境细胞培养上清液MMP-2的质量浓度以心血瘀阻证+（apr-YTF）组含量最高,与正常对照组、DMEM组和apr-YTF组比较有统计学差异（P＜0.05）。MMP-9的质量浓度心血瘀阻证组和心血瘀阻证+（apr-YTF）组两个组高于DMEM组和apr-YTF组（P＜0.05）。BMSCs诱导28d后,信号转导通路中p-Akt以心血瘀阻证+（apr-YTF）组含量最高,与DMEM组、心血瘀阻证组和apr-YTF组比较周统计学差异（P＜0.05）。而p-p38各组间含量表达未见统计学差异（P＜0.05）结论：（1）心梗心血瘀阻证心肌微环境可以促进BMSCs向心肌样细胞分化；apr-YTF可以起到促进作用。（2）心梗心血瘀阻证心肌微环境中MMP-2、MMP-9表达增高,促使BMSCs迁移分化。BMSCs移植后心血瘀阻证心肌微环境中MMP-2、MMP-9含量表达降低,从而减轻组织降解,瘢痕形成,控制心梗后向心衰的发展。apr-YTF可以降低心梗心血瘀阻证心肌组织中MMP-2、MMP-9表达。（3）心梗心血瘀阻证心肌微环境中PI3K信号转导通路激活。BMSCs移植后心肌微环境中心肌样细胞分化及与PI3K及p38信号转导通路激活有关。apr-YTF能促使移植的BMSCs向心肌样细胞分化,其分化机制与PI3K及p38信号转导通路激活有关。（4）体外模拟的心血瘀阻证微环境可以诱导BMSCs向心肌样细胞分化。apr-YTF在体外可以诱导BMSCs向心肌样细胞分化。（5）体外模拟的心血瘀阻证微环境MMP-2、MMP-9可以促使BMSCs向心肌样细胞分化。在体外模拟的心血瘀阻证微环境中BMSCs向心肌样细胞分化及apr-YTF的干预作用与PI3K信号转导通路激活有关。
安冬青[9]（2007）在《天香丹治疗冠心病及对心肌线粒体ATPase、MVC、MVD影响的实验研究》文中指出背景与意义:国内外对冠心病的临床与实验研究已经非常深入,作为对不同地区冠心病临床表现及差异性研究,新疆中医、中西医结合专家积累了丰富的经验,创立了适用于当地特点的治法和方药。本文在导师周铭心教授的指导下,继承前辈的经验和学术建树,将新疆地区专家的传统经验集中、上升为临床与实验研究,使之更加科学化。目的:通过对通补开泄法之代表方天香丹的临床与实验研究,积极探索天香丹治疗冠心病的机理,从实践及理论上证实天香丹治疗冠心病的有效作用及作用机制。通过临床研究,观察冠心病患者的辨证分型及主要症状出现的频次及规律;观察天香丹对冠心病心绞痛患者症状、心电图改善情况及对侧枝循环、血管新生的影响;用无创超声应变率方法评价天香丹对冠心病患者心肌缺血及心肌功能的疗效。通过动物试验,观察天香丹对犬冠脉血流动力学的改善作用;以及对大鼠心肌梗塞模型MVC、MVD及心肌线粒体ATPase的活性影响,观察心肌超微结构的变化,从细胞学角度阐述天香丹治疗冠心病的机理。在此基础上,对通补开泄法进行系统分析,论证通补开泄法的理论渊源、思想基础、立论依据、创新发展。本文分三部分进行研究,其研究结果对治疗冠心病具有重要意义。方法与结果:第一部分天香丹治疗冠心病的临床研究:1)证型症状分布研究。方法:选取2003年12月～2006年12月就诊的冠心病的患者2215例作为调查对象。调查冠心病的辩证分型及主要症状表现。结果:2215例患者中,辨证分型以秽浊痰阻居多,气虚血瘀次之,症状以胸闷、胸痛、口中气秽、舌暗、苔腻、大便不爽出现频次最高;2)天香丹对冠心病症状及血管新生相关因子的研究。方法:选取620例稳定性冠心病患者,分为两组,治疗组321例、对照组299例。观察治疗前后临床症状:心绞痛发作的频率,持续时间及心电图变化,血清血管生长因子、一氧化氮以及一氧化氮合酶的含量变化;将入选的经冠脉造影确诊的157例患者分为实证组及虚证组,进行治疗前后症状疗效及超声应变率及应变率显像检查。结果:治疗组及对照组患者均能改善中医综合证候,对胸痛、胸闷、心悸、气短、乏力、脘腹胀满症状有改善,与治疗前比较,差异有统计学意义（P＜0.01）:治疗组与对照组相比,胸闷、眩晕、脘腹胀满、口中气秽以及舌质、舌苔变化明显,其差异有统计学意义（P＜0.05）。心绞痛发作频率及持续时间及心电图明显得到改善。两组均能改善血清VEGF、NO以及NOS含量;虚证组与实证组冠心病患者治疗后症状均有改善,两组比较差异无统计学意义,不同时相心肌应变率均高于治疗前,差异有统计学意义（P＜0.01）,结果显示:天香丹能改善冠心病心肌缺血;改善冠心病患者的血管内皮生长因子、一氧化氮、一氧化氮合酶,优于对照组,提示,天香丹改善冠心病的作用可能与促进血管新生有关。天香丹对于冠心病虚证与实证均有疗效,从临床实验证实前辈所提出的冠心病秽浊痰阻气虚血瘀为归宿证的学术主张。第二部分天香丹的实验研究:1)天香丹对麻醉犬血流动力学的影响。方法:将30只犬分为5组,观察动脉血压、心率、左心室内压、冠脉血流量的变化。结果:给药后180min内,给药组冠脉血流量均不同程度的高于空白组,对照组和天香丹大、中、小剂量组与空白组比较,差异有统计学意义。天香丹高剂量组优于对照组,但差异无统计学意义,收缩压、舒张压及平均血压变化不大。给药后180min内,天香丹能不同程度升高麻醉犬LVSP和LVEDP;升高+dp/dtmax和降低-dp/dtmax;延长t-dp/dtmax。各治疗组与空白组比较,差异有统计学意义,天香丹大剂量组较对照组比较差异有统计学意义。说明天香丹可能通过改变左心室收缩压LVSP和左心室终末舒张压LVEDP来增加冠脉流量;2)天香丹对大鼠心肌细胞线粒体ATPase及MVC、MVD的影响。方法:将Wistar大鼠,48只,分为6组。按文献造模。6周后处死。观察MVC、MVD、心肌重量及心肌超微结构的变化测定血管内皮生长因子及一氧化氮、测定心肌线粒体Na+-K+ATPase、Ca2+-Mg2+ATPase活性。结果:治疗组、天香丹大、中、小剂量组MVC较假手术组、模型组明显增多（P＜0.05）;其中大中剂量组MVC和MVD增多最显着,与其余各组均有统计学差异（P＜0.05）。小剂量组、中剂量组比治疗组MVC较少,但三者无统计学意义（P＜0.05）。治疗组MVD较模型组明显增多（P＜0.05）:小剂量组MVD在治疗组与模型组之间,三组差异无统计学意义（P＜0.05）,治疗组NO升高VEGF含量升高,天香丹大剂量组与对照组比较,差异有统计学意义（P＜0.01）;电镜观察:天香丹小剂量组:肌丝有断裂,但肌节结构清晰,线粒体轻度肿胀,脊结构整齐,心肌核基质轻度空化,闰盘结构正常,天香丹大、中剂量组肌丝排列整齐,肌节长度均一,线粒体轻度扩张,嵴结构整齐、清晰、核仁清晰可见,闰盘结构正常。模型组大鼠心肌细胞Na+-K+-ATP酶,Ca2+-Mg2+-ATP酶活性均显着低于正常组,而天香丹则具有显着提高和恢复ATP酶活性的作用,而且其作用明显优于对照组,并具有一定的量效关系。本实验显示,天香丹能有效改善麻醉犬的冠脉流量,改善左心室内压力,维持心输出量和稳定血压;促进大鼠缺血心肌微血管数、微血管面密度增加,升高血管生长因子及一氧化氮及一氧化氮合酶含量,促进血管新生;改善缺血心肌能量代谢,提高线粒体ATP酶活性,保护线粒体,从而保护心肌细胞超微结构,抗心肌缺血。第三部分天香丹治疗胸痹的理论依据:阐述天香丹是通补开泄法的代表方。通补开泄法的建立是以仲景胸痹阳微阴弦病机理论为启示,以新疆地域气候生活习惯所致胸痹特点为前提,以“五脏六腑皆令人胸痹心痛,非独心也”的脏腑相关理论为立论依据,以历代医家治疗胸痹心痛的思想为源泉,以通法、补法、开泄法的认识为基础,为治疗新疆胸痹的有效法则。结论1)通过对2215例冠心病患者辨证分型及症状出现频次的调查,结果显示:新疆冠心病辨证以秽浊痰阻、气虚血瘀为主要证型;其主要临床表现为脚闷胸痛、口中气秽、心悸、脘腹胀满、乏力、舌暗、苔腻等。2)临床实验显示,天香丹之主要作用为改善冠心病临床症状及心电图;改善侧枝循环,改善血管新生相关活性物质、促进血管新生的作用;从超声心肌应变率及应变率显像观察,天香丹改善冠心病患者心肌缺血状态,对于虚证及实证患者均有治疗作用。从临床实验证实先辈所提出的冠心病秽浊痰阻气虚血瘀为归宿证的学术主张。天香丹治疗冠心病,五脏并举,脏腑相因,虚实并治,整体调节。3)动物实验证实,天香丹改善麻醉犬的冠脉流量,改善左心室内压力,维持心输出量和稳定血压;增加大鼠心梗心肌新生血管数及阳性染色面积比,升高血管生长因子及一氧化氮及一氧化氮合酶含量,促进血管新生;改善缺血心肌能量代谢提高ATPase活性,保护线粒体,保护心肌细胞超微结构,从而抗心肌缺血。4)天香丹是治疗冠心病的有效法则通补开泄法的代表方,其产生是根据胸痹本虚标实的病机和五脏相关理论及新疆胸痹发病的地域特点而提出的。通补开泄法补心肺脾肾精元之气,调心肝之血,化痰饮、去秽浊、散瘀血以通阳宣痹。与本文调查所显示的新疆冠心病以秽浊痰阻、气虚血瘀为主,使用天香丹治疗冠心病改善主要临床症状和各项指标相吻合。5)通补开泄法及其天香丹的研究,可以作为新疆乃至西北地区治疗冠心病及其相关疾病防治的研究,具有重要的现实意义
陈绍良,刘志忠[10]（2006）在《细胞移植治疗缺血性心脏病的临床现状》文中研究说明新世纪伊始,细胞移植为终末期心力衰竭的治疗带来曙光。迄今．全世界接受细胞移植治疗的病例超过3000例,研究已证明干细胞或前体细胞移植治疗的可行性、安全性和有效性。无论是动物实验还是临床研究一致认为干细胞或前体细胞移植能够增加局部心肌血流灌注、改善室壁重构和提高心功能,但其能否转分化为心肌细胞仍存有巨大争议。目前,干细胞移植治疗缺血性心脏病的Ⅰ期临床研究广泛开展．研究报道层出不穷．本文就临床应用的现状作述评。旨在使我们对这一领域存在的争议保持清醒的认识。
二、基因或干细胞移植治疗缺血性冠心病:新世纪的挑战（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、基因或干细胞移植治疗缺血性冠心病:新世纪的挑战（论文提纲范文）
（1）葛根素诱导骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩写 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 附表 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 间充质干细胞适用于心血管疾病治疗的特性及其发挥作用的机制研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（2）黄芪甲苷对氧化应激诱导的脐带间充质干细胞凋亡作用的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩写 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 间充质干细胞移植治疗缺血性心肌病的研究进展及应用策略 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（3）基于miR-126调控VEGF信号通路的活血益气方促血管新生分子机制的拆方研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 miR-126调控缺血性心脏病血管新生的研究进展 |
| 1 miR-126的表达 |
| 2 miR-126的调控 |
| 3 miR-126与缺血性心脏病 |
| 4 miR-126与血管新生 |
| 5 miR-126对血管新生靶基因的调控机制 |
| 6 总结与展望 |
| 参考文献 |
| 综述二 microRNAs: 活血益气法调控血管新生的中心环节 |
| 1 活血益气法促进心肌梗死后血管新生的理论与分子基础 |
| 2 miRNA是基于“气血理论”的治疗性血管新生的中心环节 |
| 3 miRNAs——活血益气法治疗冠心病的新靶点 |
| 4 总结与展望 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第二部分 实验研究 |
| 实验一 活血益气方及其拆方对缺氧HUVEC增殖的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验二 活血益气方及其拆方对缺氧HUVEC凋亡及氧化应激的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验三 活血益气方及其拆方对缺氧HUVEC迁移的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验四 活血益气方及其拆方对缺氧HUVEC miR-126及VEGF的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验五 miR-126对HUVEC增殖、迁移及VEGF信号通路的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验六 活血益气方对miR-126调控VEGF信号通路介导血管新生的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 个人简历 |
（4）干细胞治疗缺血性心肌病的研究进展（论文提纲范文）
| 1 心外源性干细胞 |
| 1.1 骨骼肌成肌细胞(SKM) |
| 1.2 骨髓单核细胞(BMMNC) |
| 1.3 间充质干细胞(MSCs) |
| 1.4 内皮祖细胞(EPCs) |
| 1.5 胚胎样干细胞(ESCs) |
| 2 内源心脏干细胞 |
| 2.1 c-kit+心脏干细胞(c-kit+CSCs) |
| 2.2 心肌球来源心脏干细胞(CDCs) |
| 2.3 Sca-1+心脏干细胞(Sca-1+CSCs) |
| 3 干细胞移植方式 |
| 4 展望 |
（5）脐带华通胶源间充质干细胞向心肌细胞分化潜能的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词 |
| 第1章 前言 |
| 1.1 干细胞研究概述和干细胞培养技术 |
| 1.1.1 胚胎干细胞（ESCs）： |
| 1.1.2 骨髓间充质干细胞(BMMSCs)： |
| 1.1.3 脐血及脐带华通胶间充质干细胞： |
| 1.1.4 i PS细胞： |
| 1.2 用于心血管疾病治疗的干细胞研究 |
| 1.2.1 骨髓单个核细胞（BMMCs）： |
| 1.2.2 骨骼肌干细胞： |
| 1.2.3 骨髓间充质干细胞（BMMSCs）： |
| 1.2.4 胚胎干细胞(ESCs)： |
| 1.2.5 同种异体间充质干细胞： |
| 1.2.6 羊水干细胞： |
| 1.2.7 脐带华通胶源间充质干细胞（WJMSCs）： |
| 1.3 缺血性心肌病的治疗现状 |
| 1.4 缺血性心肌病的细胞学治疗现状与趋势 |
| 第2章 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 脐带来源 |
| 2.1.2 大鼠来源 |
| 2.1.3 主要试剂 |
| 2.1.4 主要仪器及设备 |
| 2.1.5 配置试剂 |
| 2.2 研究方法 |
| 2.2.1 体外细胞的培养鉴定分化 |
| 2.2.2 体内WJMSCs向心肌细胞分化的研究 |
| 2.3 统计学处理 |
| 第3章 结果 |
| 3.1 WJMSCs生长特点 |
| 3.2 WJMSCs表面标记物的检测 |
| 3.3 WJMSCs成骨、成脂肪、成软骨的诱导分化 |
| 3.4 心肌早期特异转录因子ISl-1、flk-1、Nkx2.5 表达 |
| 3.5 免疫荧光检测心肌特异标记物 |
| 3.6 大鼠心肌梗死模型的制备和细胞移植 |
| 3.7 WJMSCs移植对大鼠心功能影响 |
| 3.8 WJMSCs移植后免疫荧光共聚焦检测大鼠心肌细胞特异标志 |
| 3.9 WJMSCs移植后mRNA水平检测心肌特异性标志物 |
| 3.10 WJMSCs移植后蛋白水平检测心肌特异性标志物 |
| 第4章 结论 |
| 第5章 讨论 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在读硕士期间取得的科研成果 |
| 致谢 |
（6）《中国循环杂志》2015年第30卷关键词索引（论文提纲范文）
| A |
| 阿霉素 |
| 阿司匹林 |
| 阿托伐他汀 |
| Angio Light系统 |
| Apelin-APJ系统 |
| B |
| 白蛋白 |
| 白藜三醇 |
| 白细胞介素8 |
| 半乳糖凝集素3 |
| 比伐芦定 |
| 吡哆胺 |
| 臂踝脉搏波传导速度 |
| 标志和徽章 |
| 并发症 |
| 病理学,临床 |
| 病例报告 |
| 病例对照研究 |
| C |
| C反应蛋白质 |
| 侧支循环 |
| 超声检查,介入性 |
| 超声心动描记术 |
| 超声心动描记术,多普勒 |
| 超声心动描记术,压力 |
| 晨峰血压 |
| 成纤维细胞 |
| 程序性细胞死亡因子4 |
| 抽吸 |
| 除颤器,植入型 |
| 触发,活动 |
| 磁共振成像 |
| 雌激素 |
| 刺激 |
| 促红细胞生成素 |
| 促甲状腺素 |
| 催乳素 |
| 存活率 |
| D |
| 大动脉炎 |
| 代谢综合征 |
| 丹参酮 |
| 胆红素 |
| 蛋白激酶类 |
| 蛋白质二硫键异构酶 |
| 导管插入术 |
| 导管消融术 |
| 导管心室隔离成形术 |
| 登革热 |
| 低钠血症 |
| 低温 |
| 抵抗素 |
| 碘 |
| 电刺激 |
| 电极,植入 |
| 电生理学 |
| 动脉导管未闭 |
| 动脉僵硬度 |
| 动脉炎 |
| 动脉粥样硬化 |
| 动作电位 |
| 对比剂肾病 |
| 对比研究 |
| 多导睡眠监测仪,便携式 |
| 多柔比星 |
| 多态性,单核苷酸 |
| 多中心研究 |
| E |
| 二级预防 |
| 二甲双胍 |
| 二尖瓣狭窄 |
| F |
| 泛素蛋白连接酶类 |
| 方法 |
| 芳香烃受体核转位子 |
| 放射性核素显像 |
| 非对称性二甲基精氨酸 |
| 非离子型含碘对比剂 |
| 肺栓塞 |
| 肺炎 |
| 缝隙连接蛋白类 |
| 氟伐他汀 |
| 妇女 |
| 腹膜透析 |
| G |
| 钙化 |
| 肝素 |
| 感染 |
| 干扰素诱导剂 |
| 干细胞 |
| 高甘油三酯血症 |
| 高血压 |
| 高血压,肺性 |
| 高血压,妊娠性 |
| 高血压,足细胞 |
| 高血压性视网膜病变 |
| Gensini积分 |
| 骨桥蛋白 |
| GRACE评分 |
| 冠状动脉 |
| 冠状动脉斑块 |
| 冠状动脉闭塞 |
| 冠状动脉疾病 |
| 冠状动脉旁路移植术 |
| 冠状动脉旁路移植术,非体外循环 |
| 冠状动脉旁路移植术,体外循环 |
| 冠状血管 |
| 冠状血管痉挛 |
| 冠状血管造影术 |
| 灌注成像 |
| 光密度测定法 |
| 过敏反应 |
| H |
| 核纤层蛋白A型 |
| Hep G2细胞 |
| 红细胞 |
| 红细胞生成素 |
| 呼吸障碍 |
| 华法林 |
| 环匹阿尼酸 |
| 患病率 |
| 磺达肝癸钠 |
| J |
| 肌,平滑,血管 |
| 肌钙蛋白 |
| 肌联蛋白 |
| 肌细胞,心脏 |
| 基因 |
| 基因表达调控 |
| 基质金属蛋白酶3 |
| 激光 |
| 急性冠状动脉综合征 |
| 急诊 |
| 疾病特征 |
| 脊髓损伤 |
| 甲状旁腺功能亢进,原发性 |
| 甲状腺 |
| 甲状腺激素类 |
| 间隔封堵器 |
| 减阻剂 |
| 健康行为 |
| 降钙素 |
| 降血脂药 |
| 交感神经 |
| 交感神经切除术,化学 |
| 结缔组织生长因子 |
| 结果评价(卫生保健) |
| 颈动脉损伤 |
| 颈动脉狭窄 |
| 静脉血栓形成 |
| 局部血流 |
| 巨噬细胞 |
| K |
| 抗凝药 |
| 抗心律失常肽10 |
| 抗原,肿瘤相关,碳水化合物 |
| 可降解 |
| L |
| 老年人 |
| 雷米普利 |
| 雷帕霉素 |
| 类风湿性 |
| 冷 |
| 离子通道 |
| 利伐沙班 |
| 利拉鲁肽 |
| 利钠肽,脑 |
| 利钠肽,重组 |
| 利肽素 |
| 连接蛋白43 |
| 连接蛋白类 |
| 流行病学 |
| 硫化氢 |
| 螺杆菌,幽门 |
| 氯吡格雷 |
| 氯化钙 |
| M |
| 门控血池显像 |
| 免疫学 |
| N |
| 那屈肝素 |
| 脑啡肽酶 |
| 脑血管意外 |
| 内皮,血管 |
| 内皮缩血管肽1 |
| 内皮细胞 |
| 内向整流钾通道 |
| NF-k B |
| 尼古丁 |
| 尼加拉瀑布样T波 |
| 年度报告 |
| 年龄因素 |
| 尿微量白蛋白/肌酐 |
| 脓毒症 |
| P |
| 培哚普利 |
| 评论 |
| p38丝裂原活化蛋白激酶类 |
| 葡萄糖代谢障碍 |
| 葡萄糖耐量试验 |
| 普罗帕酮 |
| Q |
| 气候 |
| 气囊扩张术 |
| 憩室 |
| 前列地尔 |
| 前列腺素E2 |
| 前瞻性研究 |
| 青少年 |
| QT延长综合征 |
| 曲美他嗪 |
| 缺血 |
| 缺氧 |
| 缺氧诱导因子1 |
| R |
| 桡动脉 |
| 人参皂甙类 |
| RNA干扰 |
| S |
| 3D打印 |
| 肾动脉狭窄 |
| 肾疾病 |
| 肾素 |
| 肾素—血管紧张素系统 |
| 肾小球滤过率 |
| 肾脏 |
| 肾脏功能衰竭,慢性 |
| 生活质量 |
| 生物多样性 |
| 生长分化因子15 |
| 室间隔缺损 |
| 嗜铬细胞瘤 |
| 受体,血管紧张素 |
| 输血,预后 |
| 栓塞和血栓形成 |
| 睡眠呼吸暂停,阻塞性 |
| 睡眠呼吸暂停综合征 |
| 顺应性 |
| 死亡率 |
| 随访研究 |
| T |
| 糖尿病 |
| 糖尿病,2型 |
| 糖尿病血管病变 |
| 体层摄影术,X线计算机 |
| 体层摄影术,螺旋计算机 |
| 体外循环 |
| 体重 |
| 替米沙坦 |
| 天冬氨酸氨基转移酶类 |
| T淋巴细胞 |
| 同型半胱氨酸 |
| Turner综合征 |
| T细胞 |
| W |
| 外科手术,微创性 |
| 危险管理 |
| 危险性评估 |
| 危险因素 |
| 微RNAs |
| 微循环 |
| 围手术期并发症 |
| 维生素E |
| 维生素K |
| 尾加压素 |
| 胃肠出血 |
| 5-羟葵酸 |
| X |
| 西洛他唑 |
| 吸烟戒断 |
| 细胞保护 |
| 细胞凋亡 |
| 细胞结构 |
| 细胞生理过程 |
| 细胞外基质蛋白质类 |
| 细胞增殖 |
| 纤维蛋白原 |
| 氙气 |
| 腺苷三磷酸 |
| 腺嘌呤核苷酸类 |
| 相关血管 |
| 缬沙坦 |
| 心导管插入术 |
| 心电描记术 |
| 心动过速,室上性 |
| 心动过速,室性 |
| 心动过速,折返性 |
| 心房颤动 |
| 心房颤动,持续性 |
| 心房重构 |
| 心肺复苏术 |
| 心肌 |
| 心肌病 |
| 心肌病,肥大性,家族性 |
| 心肌病,肥厚性 |
| 心肌病,酒精性 |
| 心肌病,扩张型 |
| 心肌病,限制性 |
| 心肌肥厚 |
| 心肌梗死 |
| 心肌疾病 |
| 心肌缺血 |
| 心肌细胞 |
| 心肌纤维化 |
| 心肌消融术 |
| 心肌血管重建术 |
| 心肌炎 |
| 心肌营养素1 |
| 心肌再灌注损伤 |
| 心理学 |
| 心力衰竭 |
| 心律失常 |
| 心律失常,室性 |
| 心率变异性 |
| 心内膜炎 |
| 心肾综合征 |
| 心室电风暴 |
| 心室功能障碍,左 |
| 心室功能障碍、右 |
| 心室室壁瘤 |
| 心室重构 |
| 心血管畸形 |
| 心血管疾病 |
| 心血管事件 |
| 心血管造影术 |
| 休克,心原性 |
| 心脏瓣膜成形术 |
| 心脏瓣膜疾病 |
| 心脏瓣膜假体植入 |
| 心脏传导阻滞 |
| 心脏功能试验 |
| 心脏破裂,梗死后 |
| 心脏起搏器,人工 |
| 心脏缺损,先天性 |
| 心脏室壁瘤 |
| 心脏外科手术 |
| 心脏移植 |
| 心脏再同步化 |
| 信号传导 |
| 性别特性 |
| 性别因素 |
| 胸腺肽α1 |
| 血沉 |
| 血管 |
| 血管成形术,经腔,经皮冠状动脉 |
| 血管活性肽 |
| 血管疾病 |
| 血管内膜 |
| 血管舒张 |
| 血管再狭窄 |
| 血流储备分数,心肌 |
| 血流动力学 |
| 血栓 |
| 血栓栓塞 |
| 血栓形成 |
| 血小板计数/淋巴细胞比值 |
| 血小板减少 |
| 血小板聚集抑制剂 |
| 血小板增多 |
| 血压 |
| 血压变异性 |
| 血脂异常 |
| Y |
| 压力 |
| 烟草 |
| 盐酸小檗碱 |
| 氧化性应激 |
| 药物毒性 |
| 药物疗法 |
| 药物洗脱球囊 |
| 夜间 |
| 伊伐布雷定 |
| 胰岛素抗药性 |
| 遗传变异 |
| 遗传学 |
| 乙酰半胱氨酸 |
| 婴儿 |
| 婴儿,新生 |
| 应激 |
| 有机磷化合物 |
| 右美托咪定 |
| 右心室 |
| 预测 |
| 预后 |
| 预激综合征 |
| 鸢尾素 |
| 晕厥,血管迷走性 |
| 炎症 |
| Z |
| 载脂蛋白类 |
| 再灌注损伤 |
| 再同步化治疗 |
| 藏红花苦素 |
| 造血细胞生长因子 |
| 扎考比利 |
| 诊断 |
| 诊断,鉴别 |
| 震波治疗 |
| 正电子发射断层显像术 |
| 正压呼吸 |
| 支架 |
| 支架内再狭窄 |
| 脂蛋白类,HDL |
| 脂肪酸合成酶复合物 |
| 脂联素 |
| 治疗结果 |
| 肿瘤坏死因子类 |
| 昼夜节律 |
| 主动脉 |
| 主动脉,胸 |
| 主动脉瓣狭窄 |
| 主动脉弓 |
| 主动脉瘤 |
| 主动脉瘤,胸 |
| 主动脉内气囊泵 |
| 主动脉狭窄,瓣膜上 |
| 转化生长因子α |
| 转化生长因子β1 |
| 装置取出 |
| 子痫 |
| 自主神经系统 |
| 综述 |
| 总结性报告 |
| 组蛋白酰基转移酶 |
| 左卡尼汀 |
| 左室舒张末期压力 |
| 左西孟旦 |
| 左心耳封堵术 |
| 左心室重构 |
（7）慢病毒介导S100A1基因转染人脐带华通胶间充质干细胞的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 改良冠脉结扎法提高大鼠心梗模型存活率方法探讨 |
| 1 材料与法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 图片 |
| 第二部分 慢病毒介导S100A1基因转染人脐带华通胶间充质干细胞的实验究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 英文缩略词表 |
| 攻读学位期间成果及参与课题 |
| 致谢 |
| 统计学证明 |
（8）心血瘀阻证心肌微环境变化及对骨髓间充质干细胞移植的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第Ⅰ部分 心血瘀阻证微环境的研究背景 |
| 1 微环境的概念、特点及其学术趋势 |
| 2 中医学对微环境的认识 |
| 3 微环境的界定与模式 |
| 4 心血瘀阻证微环境研究的现状分析 |
| 5 心肌微环境对干细胞的动员和分化作用 |
| 6 改善心肌微环境对干细胞向心肌细胞分化的影响 |
| 7 BMSCs向心肌样细胞分化的机制研究 |
| 8 中医药在BMSCs向心肌样细胞分化研究概况 |
| 第Ⅱ部分 心血瘀阻证微环境对BMSCs移植的影响及其MMP-2、MMP-9、PI3K和p38信号转导通路变化的实验研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验流程 |
| 1.2 动物 |
| 1.3 试剂 |
| 1.4 主要试剂配制 |
| 1.4.1 细胞培养用液 |
| 1.4.2 RT-PCR主要试剂配制 |
| 1.4.3 western-blots主要试剂配制 |
| 1.5 主要仪器 |
| 1.6 大鼠心血瘀阻证模型制备 |
| 1.6.1 大鼠急性心肌梗死(AMI)模型制备 |
| 1.6.2 大鼠血液流变学检测 |
| 1.7 大鼠BMSCs的分离、培养和鉴定 |
| 1.7.1 BMSCs的分离与培养 |
| 1.7.2 BMSCs的传代及纯化 |
| 1.7.3 BMSCs的鉴定 |
| 1.7.4 BMSCs细胞计数 |
| 1.7.5 大鼠BMSCs标记及细胞悬液配制 |
| 1.8 动物分组 |
| 1.9 检测指标与方法 |
| 1.9.1 MMP-2、MMP-9酶联免疫吸附法检测 |
| 1.9.2 p-Akt及p-p38信号转导蛋白Western-blots检测 |
| 1.9.3 心肌Desmin-Brdu、MHC-Brdu双染的表达 |
| 1.9.4 心脏转录因子GATA-4 mRNA的表达 |
| 1.10 统计学处理 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 大鼠一般情况 |
| 2.2 心肌梗死心血瘀阻证模型的建立 |
| 2.2.1 急性心肌梗死模型心电图改变 |
| 2.2.2 血液流变学指标结果 |
| 2.2.3 病理组织学结果 |
| 2.3 BMSCs的培养纯化情况 |
| 2.4 BMSCs表面抗原的鉴定 |
| 2.5 BMSCs移植心血瘀阻证心肌后Desmin-Brdu的表达 |
| 2.6 BMSCs移植心血瘀阻证心肌后MHC-Brdu的表达 |
| 2.7 BMSCs移植心血瘀阻证心肌后心脏早发育基因GATA-4 mRNA的表达 |
| 2.7.1 RNA的鉴定 |
| 2.7.2 BMSCs移植心血瘀阻证心肌后对GATA-4 mRNA表达的影响 |
| 2.8 各组心肌组织MMP-2的表达 |
| 2.9 各组心肌组织MMP-9的表达 |
| 2.10 各组心肌组织中p-Akt及p-p38信号转导蛋白的表达 |
| 2.10.1 PI3K信号转导通路中p-Akt蛋白的表达 |
| 2.10.2 p38信号转导通路中p-p38蛋白的表达 |
| 2.11 BMSCs移植后各组GATA-4 mRNA含量与MMP-2、MMP-9、p-Akt、p-p38关联性分析 |
| 3 讨论 |
| 3.1 BMSCs移植于心血瘀阻证心肌向心肌内的迁移及分化 |
| 3.1.1 BMSCs的分离及纯化 |
| 3.1.2 心梗心血瘀阻证模型的选择及标准化 |
| 3.1.3 Brdu标记移植的BMSCs在宿主心肌中的定位 |
| 3.1.4 BMSCs移植于心血瘀阻证心肌Desmin-Brdu、MHC-Brdu双染的表达 |
| 3.1.5 BMSCs移植于心血瘀阻证心肌心脏转录因子GATA-4 mRNA的表达 |
| 3.2 心梗心血瘀阻证心肌微环境对BMSCs向心肌样细胞分化的机制 |
| 3.2.1 心梗心血瘀阻证心肌微环境MMP-2、MMP-9的变化 |
| 3.2.2 心梗心血瘀阻证心肌微环境PI3K及p38信号转导通路的变化 |
| 4 结论 |
| 第Ⅲ部分 养心通脉有效部位方对BMSCs移植于心梗心血瘀阻证心肌存活及其微环境变化机制的实验研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 操作流程 |
| 1.2 动物 |
| 1.3 主要试剂 |
| 1.4 主要试剂配制 |
| 1.5 主要仪器 |
| 1.6 大鼠BMSCs的分离、培养和鉴定 |
| 1.7 大鼠BMSCs标记及细胞悬液配制 |
| 1.8 大鼠心血瘀阻证模型制备 |
| 1.9 实验动物分组 |
| 1.10 检测指标与方法 |
| 1.10.1 心肌Desmin-Brdu、MHC-Brdu蛋白免疫组织化学双染 |
| 1.10.2 心脏转录因子GATA-4 mRNA RT-PCR检测 |
| 1.10.3 MMP-2、MMP-9酶联免疫吸附法检测 |
| 1.10.4 p-Akt及p-p38信号转导蛋白Western-Blots检测 |
| 1.11 统计学处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 大鼠一般情况资料 |
| 2.2 apr-YTF对BMSCs移植后Desmin-Brdu、MHC-Brdu表达的影响 |
| 2.2.1 apr-YTF对BMSCs移植后Desmin-Brdu表达的影响 |
| 2.2.2 apr-YTF对BMSCs移植后MHC-Brdu表达的影响 |
| 2.3 apr-YTF对BMSCs移植后GATA-4 mRNA表达的影响 |
| 2.4 apr-YTF对BMSCs移植后MMP-2、MMP-9表达影响 |
| 2.5 apr-YTF对BMSCs移植后p-Akt和p-p38表达的影响 |
| 2.5.1 apr-YTF对BMSCs移植后p-Akt表达的影响 |
| 2.5.2 apr-YTF对BMSCs移植后p-p38表达的影响 |
| 2.6 GATA-4 mRNA含量与MMP-2、MMP-9、p-Akt、p-p38关联性分析 |
| 3 讨论 |
| 3.1 apr-YTF的研究现状 |
| 3.2 apr-YTF对BMSCs存活和向心肌方向转化的影响 |
| 3.3 apr-YTF干预BMSCs向心肌样分化的微环境机制 |
| 4 结论 |
| 第Ⅳ部分 体外模拟心血瘀阻证微环境对BMSCs向心肌样细胞分化及养心通脉有效部位方干预作用的实验研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验流程 |
| 1.2 动物 |
| 1.3 主要试剂 |
| 1.4 主要试剂配制 |
| 1.5 主要仪器 |
| 1.6 BMSCs的分离与培养 |
| 1.7 BMSCs的传代及纯化 |
| 1.8 BMSCs的鉴定 |
| 1.9 BMSCs细胞计数 |
| 1.10 体外模拟心血瘀阻证微环境的制备 |
| 1.10.1 心血瘀阻证大鼠模型血清及心肌组织液制备 |
| 1.10.2 MTT法测定血清组织混合液对BMSCs生长抑制率 |
| 1.11 MTT法测定apr-YTF对BMSCs生长抑制率 |
| 1.11.1 试验药物apr-YTF的制备 |
| 1.11.2 apr-YTF对BMSCs无毒剂量 |
| 1.11.3 apr-YTF对BMSCs增殖的影响 |
| 1.12 心血瘀阻证微环境及apr-YTF对BMSCs的诱导分化 |
| 1.13 检测指标 |
| 1.13.1 Desmin、MHC免疫细胞化学鉴定 |
| 1.13.1.1 制作细胞爬片 |
| 1.13.1.2 免疫细胞化学染色 |
| 1.13.1.3 结果判定方法 |
| 1.13.2 心肌转录因子GATA-4 mRNA RT-PCR鉴定 |
| 1.13.2.1 细胞总RNA的提取 |
| 1.13.2.2 mRNA的反转录 |
| 1.13.2.3 反转录产物扩增 |
| 1.13.2.4 PCR产物电泳鉴定 |
| 1.13.3 p-Akt及p-p38信号转导蛋白Western-Blots检测 |
| 1.14 统计学处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 BMSCs分离、培养及鉴定 |
| 2.2 大鼠血清组织混合液对BMSCs的细胞毒性 |
| 2.3 apr-YTF对BMSCs的抑制率及对增殖的影响 |
| 2.4 诱导后BMSCs形态变化 |
| 2.5 诱导后BMSCs Desmin及MHC表达的免疫组化结果 |
| 2.6 诱导后的BMSCs心肌转录因子GATA-4 mRNA RT-PCR检测结果 |
| 2.7 诱导后BMSCs培养液中MMP-2、MMP-9的表达 |
| 2.8 诱导后的BMSCs p-Akt和p-p38蛋白Western-blots检测结果 |
| 2.9 心肌样分化标志物与MMP-2、MMP-9、p-Akt、p-p38关联性分析 |
| 3 讨论 |
| 3.1 体外心血瘀阻证微环境的模拟 |
| 3.2 体外模拟心血瘀阻证微环境不同浓度血清组织液对BMSCs的最大有效浓度 |
| 3.3 不同梯度浓度的apr-YTF对BMSCs的最大无毒浓度及其增殖作用 |
| 3.4 体外模拟心血瘀阻证微环境对BMSCs向心肌样的分化的影响 |
| 3.4.1 体外模拟心血瘀阻证微环境心肌结蛋白Desmin及肌球蛋白MHC的变化 |
| 3.4.2 体外模拟心血瘀阻证微环境心脏肌转录因子GATA-4 mRNA的变化 |
| 3.5 体外模拟心血瘀阻证微环境变化机制的研究 |
| 3.5.1 体外模拟心血瘀阻证微环境中MMP-2、MMP-9的表达 |
| 3.5.2 体外模拟心血瘀阻证微环境PI3K及p38信号转导通路的变化 |
| 4 结论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录1 文献综述 |
| 附录2 攻读博士学位期间发表论文和参与科研项目目录 |
（9）天香丹治疗冠心病及对心肌线粒体ATPase、MVC、MVD影响的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一部分 天香丹治疗冠心病的临床研究 |
| (一)2215例冠心病患者辩证分型及症状分布研究 |
| 1.内容与方法 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.2 诊断标准 |
| 2.结果 |
| (二)天香丹对冠心病稳定性心绞痛患者血管新生的影响 |
| 1.内容与方法 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.2 诊断标准 |
| 1.3 纳入标准 |
| 1.4 排除标准 |
| 1.5 剔除、脱落和中止试验的标准 |
| 1.6 临床疗效评定标准 |
| 1.7 试验设计 |
| 1.8 治疗方法 |
| 1.9 观察指标 |
| 1.10 统计方法 |
| 2.研究结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 第二部分 天香丹的实验研究 |
| (一)天香丹对麻醉犬血流动力学的影响 |
| 1.内容与方法 |
| 1.1 药品 |
| 1.2 实验仪器和试剂 |
| 1.3 实验动物 |
| 1.4 剂量设计与分组 |
| 1.5 实验方法 |
| 1.6 测定参数 |
| 1.7 数据统计处理方法 |
| 2.结果 |
| (二)天香丹对大鼠心肌细胞线粒体ATPase及MVC、MVD的影响 |
| 1.内容与方法 |
| 1.1 药物及试剂 |
| 1.2 实验动物 |
| 1.3 主要仪器 |
| 1.4 实验方法 |
| 1.5 观察指标 |
| 2.结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 第三部分 天香丹治疗胸痹的理论依据 |
| 1.天香丹的组方分析 |
| 2.天香丹处方中药物的现代研究 |
| 3.天香丹是通补开泄法的代表方 |
| 4.冠心病秽浊痰阻气虚血瘀证的表现及成因 |
| 5.冠心病阳微阴弦病机理论对通补开泄法的启示 |
| 6."五脏六腑皆令人胸痹心痛非独心也"是通补开泄法的立论依据 |
| 7.历代医家治疗胸痹心痛的思想是通补开泄法的源泉 |
| 8.历代医家通法、补法、开泄法的认识是通补开泄法的基础 |
| 小结 |
| 全文总结 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述一:胸痹心痛的中医诊治研究进展 |
| 综述二:应变率评价不同程度缺血心肌及心肌功能的研究进展 |
| 综述三:治疗性血管新生在冠心病中的研究进展 |
| 个人简介 |
| 在读期间发表论文及讲座情况 |
| 导师评阅表 |
四、基因或干细胞移植治疗缺血性冠心病:新世纪的挑战（论文参考文献）
- [1]葛根素诱导骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞的研究[D]. 王雪姣. 河北北方学院, 2020(06)
- [2]黄芪甲苷对氧化应激诱导的脐带间充质干细胞凋亡作用的影响[D]. 李康. 河北医科大学, 2019(01)
- [3]基于miR-126调控VEGF信号通路的活血益气方促血管新生分子机制的拆方研究[D]. 成文堃. 北京中医药大学, 2017(05)
- [4]干细胞治疗缺血性心肌病的研究进展[J]. 石宇杰,易军,陈韵岱. 中国循证心血管医学杂志, 2016(11)
- [5]脐带华通胶源间充质干细胞向心肌细胞分化潜能的研究[D]. 张宁坤. 吉林大学, 2016(09)
- [6]《中国循环杂志》2015年第30卷关键词索引[J]. 宁田海,佟金. 中国循环杂志, 2015(12)
- [7]慢病毒介导S100A1基因转染人脐带华通胶间充质干细胞的实验研究[D]. 王学文. 南方医科大学, 2012(04)
- [8]心血瘀阻证心肌微环境变化及对骨髓间充质干细胞移植的影响[D]. 郑景辉. 湖南中医药大学, 2010(07)
- [9]天香丹治疗冠心病及对心肌线粒体ATPase、MVC、MVD影响的实验研究[D]. 安冬青. 新疆医科大学, 2007(09)
- [10]细胞移植治疗缺血性心脏病的临床现状[J]. 陈绍良,刘志忠. 内科理论与实践, 2006(02)