一、抗精子抗体介导的免疫性不育动物模型的建立(论文文献综述)
晏斌[1](2020)在《灵归方对奥硝唑诱导的弱精子症模型大鼠附睾功能影响的实验研究》文中认为背景:2010年世界卫生组织(World Health Organization,WHO)估计全世界大约有4850万对夫妇(8~12%)患有不孕不育,其患病率因国家和地区而异,男性因素所致生育问题的分布在20%~70%之间,精子数量少、形态异常、运动能力差是与男性因素相关的常见原因。随着世界范围内男性不育症的不断增多,它已成为一个越来越引起临床重视的健康问题。目前西医治疗男性不育症主要方式为药物治疗、手术及辅助生殖技术,但是存在疗效不确定、造成侵入性损害、价格高,或伴随不良反应和其他高风险的问题,使得男性不育症患者寻求其他治疗策略。随着中医药研究的发展,中医药成为男性不育症治疗中重要的方法之一,提供了安全、有效的治疗选择。灵归方为中国中医科学院西苑医院男科经验处方,由仙灵脾、当归、熟地黄、山药等13味药组成,具有补肾、活血的功效,前期临床研究发现灵归方有提高弱精子症患者精子活动率的作用,但其具体作用机制不明,故设计本研究以阐明灵归方改善精子活动率的可能机制。实验分为两部分,第一部分为探索使用奥硝唑(Ornidazole,ORN)制备弱精子症动物模型,观察不同剂量(200,400,800 mg/(kg·d))的ORN对于雄性SD大鼠精子浓度、活动率的影响;第二部分为保护性实验,设置对照组、模型组、灵归方组、左卡尼汀组,综合评价灵归方对弱精子症模型大鼠精液质量、附睾左旋肉碱(L-carnitine,LC)含量、附睾肉碱转运蛋白(Carnitine/organiccation transporter2,OCTN2)的蛋白及mRNA表达水平的影响,并检测灵归方干预后大鼠血清性激素水平,附睾SOD、GSH-Px活性以及MDA含量,光学显微镜观察睾丸、附睾组织病理学变化。第一部分:ORN诱导弱精子症模型大鼠的研究目的:观察不同剂量的ORN灌胃对雄性SD大鼠精液质量的影响,以制备弱精子症模型大鼠。方法:将40只雄性SD大鼠进行编号,使用电子秤称重并详细记录。按照随机数字表法将其分为对照组、模型1组、模型2组、模型3组各10只,具体给药方法为:模型 1 组:200mg/(kg·d)ORN;模型 2 组:400mg/(kg·d)ORN;模型 3组:800mg/(kg·d)ORN;对照组:1ml/100g0.5%CMC-Na(由于 ORN 水溶性差,故采用CMC-Na溶解后灌胃)。按照1ml/100g体重进行给药,连续灌胃20天,观察大鼠一般情况变化,在末次给药24小时后用5%水合氯酸溶液(0.7ml/100g)进行腹部注射麻醉,水合氯酸溶液使用剂量为按照0.4ml/100g体质量进行计算,大鼠麻醉后,称体重,取睾丸及附睾分别称重,计算睾丸、附睾脏器系数,并取大鼠左侧附睾尾进行精子浓度和活动率(PR+NP级精子百分率)分析。结果:1.在实验进行过程中,由于灌胃操作导致模型3组1只大鼠死亡。对照组一般状态良好,饮食正常,体毛浓密,且有光泽,大小便正常,活动量大,较活跃,存在笼内打斗现象;与对照组比较,模型1组上述各项征象无显着下降,饮食无明显减少,饮水量相当,体毛正常,光泽度稍差,活动量未见减少,存在笼内打斗现象,精神可;模型2组较对照组上述征象有下降,饮食量减少,体毛较稀疏,体毛光泽度不及模型1组,活动量以及打斗现象无明显减少,精神尚可;模型3组较对照组上述指标有显着下降,饮食量减少,体毛稀疏,体毛光泽度明显降低且不及模型2组,活动量少,打斗现象减少,精神差。2.与对照组比较,模型1组大鼠体重,睾丸、附睾重量,以及睾丸、附睾脏器系数变化差异均无统计学意义(P>0.05);模型2组体重,睾丸、附睾重量以及睾丸、附睾脏器系数有下降趋势,但无统计学差异(P>0.05);模型3组体重,睾丸、附睾重量以及睾丸、附睾脏器系数均下降,有统计学差异(P<0.05)。3.与对照组比较,模型1组与模型2组精子浓度改变无统计学差异(P>0.05),模型3组精子浓度下降(P<0.01);与对照组比较,模型1组(PR+NP)级精子浓度及精子活动率无统计学改变(P>0.05),模型2组、模型3组(PR+NP)级精子浓度及精子活动率均下降(P<0.01)。结论:1.200 mg/(kg·d)ORN灌胃20天对于大鼠体重,睾丸、附睾重量及脏器系数,精子浓度、(PR+NP)级精子浓度及活动率均无影响。2.400 mg/(kg·d)ORN灌胃20天,对大鼠精子浓度无影响,但可导致(PR+NP)级精子浓度及精子活动率下降,可用于制备弱精子症模型大鼠。3.800 mg/(kg·d)ORN灌胃20天可导致大鼠精子浓度、(PR+NP)级精子浓度及活动率均明显下降,可用于制备少弱精子症模型大鼠。第二部分:灵归方对ORN诱导的弱精子症模型大鼠附睾功能影响的实验研究实验一:灵归方对ORN诱导的弱精子症模型大鼠附睾LC相关通路的影响目的:观察灵归方对ORN诱导弱精子症模型大鼠精液质量、附睾LC含量,附睾OCTN2蛋白及mRNA表达水平的影响,揭示ORN诱导弱精子症模型大鼠附睾能量代谢障碍以及灵归方改善弱精子症大鼠附睾功能的相关机制。方法:将40只雄性SD大鼠进行编号,使用普通电子秤称重并详细记录。按照随机数字表法将其分为对照组、模型组、左卡尼汀组、灵归方组,每组各10只,具体给药方法为:对照组:1ml/100g 0.5%CMC-Na;模型组:400mg/(kg·d)ORN;左卡尼汀组:LC 100mg/(kg·d)+400mg/(kg·d)ORN;灵归方组:灵归方浓缩液,按 17.5g 生药/kg+400mg/(kg·d)ORN,连续灌胃 20 天,ORN 均为上午 8:00-9:00灌胃,干预药物为下午5:30-6:30灌胃。末次给药24 h后,5%的水合氯醛腹腔麻醉,剪开阴囊,取出实验大鼠右侧附睾,用于进行精子浓度及活动率检测;左侧附睾在(pH 7.2~7.4)0.01mol/LPBS缓冲液配制的4%多聚甲醛固定液中进行固定,用于附睾LC含量、OCTN2蛋白与mRNA表达的检测。其中高效液相色谱法测定附睾中LC含量,免疫印迹法(Western Blotting,WB)检测大鼠附睾OCTN2蛋白表达,逆转录聚合酶链反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)检测大鼠附睾OCTN2 mRNA表达。结果:1.与对照组比较,各组精子浓度改变无统计学差异(P>0.05);模型组(PR+NP)级精子浓度及精子活动率下降(P<0.05)。与模型组比较,灵归方组与左卡尼汀组(PR+NP)级精子浓度及精子活动率升高,有统计学差异(P<0.05);灵归方组与左卡尼汀组比较,(PR+NP)级精子浓度及精子活动率差异无统计学意义(P>0.05)。2.与对照组比较,模型组附睾LC含量下降(P<0.05);与模型组比较,灵归方组与左卡尼汀组附睾LC含量升高(P<0.05);且左卡尼汀组附睾LC含量高于灵归方组(P<0.05)。3.与对照组比较,模型组OCTN2蛋白表达下降(P<0.05);与模型组比较,灵归方组、左卡尼汀组OCTN2蛋白表达升高(P<0.05);灵归方组与左卡尼汀组比较,OCTN2蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。4.与对照组比较,模型组OCTN2 mRNA表达下调(P<0.05);与模型组比较,灵归方组、左卡尼汀组OCTN2 mRNA表达上调(P<0.05);灵归方组与左卡尼汀组比较,OCTN2 mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:1.400mg/(kg·d)ORN连续灌胃20天可导致大鼠精子活动率下降,可能与抑制附睾OCTN2蛋白及mRNA表达,引起血浆向附睾LC转运减少,导致附睾LC含量下降有关。2.灵归方能够提高ORN诱导弱精子症模型大鼠(PR+NP)级精子浓度及精子活动率,可能与增加大鼠附睾LC含量有关。3.灵归方可以上调ORN所致弱精子症模型大鼠附睾中OCTN2蛋白及mRNA的表达,从而增加LC从血浆向附睾转运。实验二:灵归方对弱精子症模型大鼠血清性激素及附睾氧化应激反应的影响目的:观察灵归方对ORN所致弱精子症模型大鼠血清性激素水平,附睾SOD、GSH-Px、MDA的影响,进一步揭示ORN造成弱精子症模型大鼠的可能机制以及灵归方的保护作用。方法:分组及灌胃方式同实验一。股动脉取血,酶联免疫吸附试验法测定大鼠血清中FSH、LH、T含量,取右侧附睾组织制备成5%的组织匀浆,将匀浆3000rpm离心10min,取上清进行SOD、GSH-Px活性以及MDA含量的检测。左侧睾丸、附睾部分置于4%多聚甲醛固定,随后用于观察睾丸、附睾结构组织病理学变化。结果:1.与对照组比较,各组FSH、LH及T水平改变均无统计学差异(P>0.05)。2.与对照组比较,模型组附睾GSH-Px、SOD活性下降,MDA含量升高(P<0.05);与模型组比较,左卡尼汀组及灵归方组GSH-Px、SOD活性升高,MDA含量下降,均有统计学差异(P<0.01);灵归方组与左卡尼汀组相比GSH-Px、SOD活性以及MDA含量比较无统计学差异(P>0.05)。3.在显微镜下可见各组大鼠睾丸中各生精小管结构正常,管腔明显,整齐排列,大量精子及精子细胞充满生精小管管腔,形态正常;各级生精细胞结构完整,层次清晰,各级生精细胞分裂活跃,各细胞形态未见明显异常,各组之间的形态学差异并不明显;各组附睾组织形态学改变并不明显,管腔中可见大量的精子,模型组附睾管腔中可见少量脱落细胞成分。结论:1.400mg/(kg·d)ORN连续灌胃20天对雄性SD大鼠血清性激素水平,睾丸、附睾组织形态并无显着影响,但是会引起附睾GSH-Px、SOD活性下降,MDA含量升高,可能是导致大鼠精子活动率下降的原因之一。2.灵归方可以增加附睾SOD、GSH-Px活性,降低MDA含量,减少ORN所致弱精子症模型大鼠附睾氧化损伤,维持正常的精子成熟环境。
杨凯[2](2020)在《曾庆琪教授辨治男性不育症的学术思想及润精汤治疗少弱精子症的临床和实验研究》文中认为目的本文首先对曾庆琪教授治疗男性不育症的学术思想和临证经验进行分析总结;在前期理论的基础上采用单盲、随机、阳性对照药物的临床研究方法初步探讨润精汤对特发性少弱精子症患者的临床有效性和安全性;然后在运用奥硝唑诱导建立的少弱精子症SD雄性大鼠模型的基础上,通过观察润精汤对少弱精子症模型大鼠精液质量、性激素水平、大鼠睾丸组织病理形态变化、睾丸组织细胞凋亡、睾丸波形蛋白表达和ERK信号通路表达的变化,初步探讨润精汤治疗少弱精子症的作用靶点和作用机制,为润精汤治疗特发性少弱精子症的临床应用提供科学依据。方法1.经验总结:对曾庆琪教授治疗男性不育症的学术思想和临证经验进行分析总结,从病因病机、辨病论治、诊断治法、方药配伍、优生助孕和预防调护等方面进行了详细论述。2.临床研究:采用单盲、随机、阳性对照药物的临床研究方法,将符合诊断标准和纳入标准的72例特发性少弱精子症患者随机分为试验组(润精汤)和对照组(还少胶囊),每组36例,分别治疗3个月,记录两组患者治疗前后的精液质量(精液量、精子浓度、精子总数、精子前向运动百分率、精子总活动力)、性激素水平、中医症状评分、安全性指标和不良反应情况,评价润精汤的临床有效性和安全性。3.实验研究:将32只SD雄性大鼠采用单纯随机抽样方法分成四组,每组8只,分别为空白组、模型组、低剂量组和高剂量组。空白组予以生理盐水灌胃;模型组予以奥硝唑ORN(400mg/kg·d)灌胃;低剂量组予以润精汤(14g/kg)+奥硝唑ORN(400mg/kg·d)灌胃;高剂量组予以润精汤(56g/kg)+奥硝唑ORN(400mg/kg·d)灌胃,疗程四周。实验结束后,检测大鼠血清性激素指标(FSH、LH和T)、大鼠精液质量(精子浓度、精子前向运动百分率、精子总活动力和精子畸形率),采用Western Blot和免疫组织化学法测定大鼠睾丸波形蛋白表达和睾丸ERK信号通路表达,采用TUNEL法检测大鼠睾丸组织细胞凋亡情况。结果1.临床研究:①试验组(润精汤)和对照组(还少胶囊)均能提高精液质量(精液量、精子浓度、精子总数、精子前向运动百分率、精子总活动力)、调节性激素水平和改善中医临床症状,从而提高患者配偶妊娠率和临床有效率,且试验组(润精汤)改善更为明显。②润精汤未见明显毒副作用及不良反应。2.实验研究:①精液质量:模型组大鼠精子浓度、精子总活动力、精子前向运动百分率低于空白组(P<0.05),精子畸形率高于空白组(P<0.05);低剂量组、高剂量组的精子总活动力高于模型组(P<0.05),精子畸形率低于模型组(P<0.05);低剂量组的浓度和精子前向运动百分率轻度高于模型组(P>0.05);高剂量组的浓度和精子前向运动百分率高于模型组(P<0.05)。②性激素:各组黄体生成素(LH)无明显变化(P>0.05);模型组卵泡刺激素(FSH)高于空白组(P<0.05),低剂量组和高剂量组低于模型组(P<0.05);模型组睾酮(T)低于空白组(P<0.05),低剂量组和高剂量组高于模型组(P<0.05)。③睾丸组织病理形态变化:空白组大鼠睾丸组织中各曲细精管生精上皮形态规则、排列整齐和结构完整,生精小管管腔内可见各级分裂活跃、形态规则、排列整齐和结构完整的生精细胞和大量形态正常且成熟的精子。模型组大鼠睾丸组织中各曲细精管生精上皮形态紊乱、排列不整齐和结构松散,生精小管管腔内各级生精细胞排列紊乱,且大量减少,甚至脱落,精子和生精细胞数量明显减少,且形态明显异常,生精上皮部分变性可见大量空泡。低剂量组大鼠睾丸组织中各曲细精管生精上皮形态的规则性、排列的整齐性和结构的完整性较模型组有所改善,生精小管管腔内正常生精细胞数和形态正常且成熟的精子数较模型组也有所增加,脱落生精细胞数量有所减少。高剂量组大鼠睾丸组织病理形态结构较低剂量组进一步有所改善,接近于空白组。④睾丸组织细胞凋亡的变化:模型组生精小管管腔内可见大量生殖细胞凋亡,大鼠睾丸组织凋亡阳性细胞率明显高于空白组(P<0.01)。低剂量组和高剂量组生精小管管腔内可少量生殖细胞凋亡,低剂量组大鼠睾丸组织凋亡阳性细胞率明显低于模型组(P<0.05),高剂量组大鼠睾丸组织凋亡阳性细胞率明显低于模型组(P<0.01)。⑤睾丸组织波形蛋白表达的变化:空白组睾丸组织波形蛋白主要分布于睾丸支持细胞的核周围,并且从基底区域向近腔小室延伸。模型组睾丸组织波形蛋白信号和分布范围与空白组比较明显减弱,波形蛋白表达量明显降低(P<0.001)。低剂量组和高剂量组的睾丸组织波形蛋白的主要分布从睾丸支持细胞的核周围区域向内腔延伸,并且波形蛋白在两组间分布也趋于正常,波形蛋白表达量明显高于模型组(P<0.01)。⑥睾丸组织ERK信号通路的变化:模型组大鼠睾丸组织p-ERK蛋白表达量明显高于空白组(P<0.001);低剂量组和高剂量组大鼠的睾丸组织p-ERK蛋白表达量明显低于模型组(P<0.001)。结论1.润精汤是曾庆琪教授基于“精室理论”,根据精室的功能特点,总结出“通补并用”为核心的治疗法则,创制而成的治疗少弱精子症的经验方,药物组成有菟丝子、黄精、山药、枸杞、仙灵脾、水蛭、刺五加、红景天、陈皮、川牛膝,诸药具有“肝脾肾三脏兼顾、气血阴阳平调、补而不腻、通而不损”的特点,全方以补肾健脾为主,兼有补血养肝、活血通络、行气利湿的作用,本方治法较单补肾填精法或补肾活血法更为全面,更加符合当今大多数男性不育症的临床实际情况,尤其是对江南地区的患者更为适宜。2.润精汤和还少胶囊均能提高精液质量(精液量、精子浓度、精子总数、精子前向运动百分率、精子总活动力)、调节性激素水平和改善中医临床症状,从而提高患者配偶妊娠率和临床有效率,且润精汤改善更为明显。所以说润精汤是安全和有效的,且未见明显不良反应,有一定的临床推广价值。3.润精汤可以改善奥硝唑诱导的少弱精子症大鼠的精液质量、血清性激素和睾丸组织病理形态学变化,初步猜测可能与润精汤调控下丘脑-垂体-睾丸性腺轴,调节生殖内分泌激素的水平,改善睾丸微循环和精子生成的局部微环境有关;此外润精汤可上调睾丸波形蛋白的表达和下降p-ERK的表达,提高生殖细胞结构的稳定性和抑制大鼠生殖细胞的凋亡,促进生殖细胞增殖等,其作用机理可能与抗氧化应激有关。
曹晓丹,魏任雄,李如瑶,贝华锋[3](2020)在《滤泡辅助性T细胞在实验性免疫性不育小鼠中的表达》文中进行了进一步梳理目的检测滤泡辅助性T细胞在实验性免疫性不育小鼠中的表达,探讨滤泡辅助性T(T follicular helper, Tfh)细胞在免疫性不育发病中的作用。方法用同种小鼠精子及完全福氏佐剂免疫BALB/c雄性小鼠获得免疫性不育动物模型,同时设立正常对照组给予生理盐水。流式细胞仪检测免疫性不育小鼠和正常对照小鼠脾脏淋巴细胞中CD4+ CXCR5+ ICOS+ T (Tfh)细胞和CD3-CD19+ B细胞表达水平,并进行相关性分析。结果人工免疫后的雄性小鼠血清抗精子抗体均为阳性,正常对照小鼠均为阴性。流式分析结果显示,免疫性不育小鼠脾脏淋巴细胞中Tfh细胞和B细胞[分别为(4.15±1.03)%和(8.05±1.97)%]表达水平显着高于对照组[分别为(1.05±0.25)%和(2.81±0.473)%]小鼠(P<0.000 1),Tfh细胞与B细胞比例呈显着正相关(r=0.58,P<0.05)。结论滤泡辅助性T细胞和B细胞的增加与免疫性不育的发生有关。
陈小均,王思师,贾玉森,张志杰[4](2018)在《男性不育症实验动物模型在中医药领域的应用概况》文中认为据世界卫生组织(WHO)调查,15%的育龄夫妇存在不育的问题;而我国男性不育的发病率呈上升趋势,约占育龄夫妇的10%。男性不育的影响因素较多,病因复杂,使其治疗难度加大;中医药在治疗男性不育方面,有着丰富的经验,取得了一定的疗效,但其作用机理尚不十分清楚,急需进行相关基础研究。近年来,中医药在不育
王江[5](2017)在《抗精子抗体的作用机制及其生物靶向应用的研究》文中指出目的:利用生物信息学知识筛选人源精子膜蛋白,人工合成多肽免疫动物制备抗体;利用抗精子抗体和纳米金制备抗精子抗体免疫靶向纳米金杀精剂;通过全基因测序绘制mRNA表达谱的变化,揭示抗精子抗体对人类成熟精子的作用机制,为免疫不孕不育诊疗和男性避孕研究提供了理论基础。方法:利用NCBI和Uniprot蛋白数据库建立人源精子膜蛋白数据库,SignalP 4.1Server、TMHMM和ExPASY-ProtScale软件筛选具有免疫原性的人源精子膜蛋白;将人工合成多肽与钥孔戚血蓝素(KLH)交联,作为抗原免疫新西兰大耳白兔,获得多克隆抗体血清,经过饱和硫酸铵沉淀法提纯获得抗体,ELISA验证抗体效价,免疫荧光和Western blot验证抗体特异性;利用柠檬酸钠还原法合成纳米金,连接抗精子抗体制备免疫靶向纳米金进行体外杀精实验;收集并提取分别与SPACA3、SPAG8和OR1D2抗体共孵育的人类精子mRNA,利用Agilent2500进行全转录组测序,经过RNA构建文库和测序质检后,采用生物信息学技术对样本进行差异基因、GO聚类和KEGG通路分析,最后用RT-PCR验证芯片结果。结果:1.对人源精子膜蛋白数据库进行数据挖掘和软件分析,筛选SPACA1、SPACA3、SPAG8和OR1D2作为人源精子膜蛋白的特异性分子进行后续实验;2.ELISA检测结果显示SPACA1、SPACA3、SPAG8和OR1D2抗体血清最高抗体效价分别为1:1600、1:1600、1:3200和1:6400。免疫荧光检测显示SPACA1蛋白主要分布在精子头部的顶体区域,SPACA3蛋白分布在精子头部顶体区域和尾部,SPAG8蛋白主要分布在精子头部、颈部和尾部,而OR1D2蛋白分布精子整个尾部、顶体赤道段区和精子顶体前部,上述抗体在中性粒细胞均未见着色。Western blot检测结果显示SPACA1条带位于35KD;SPACA3条带位于24KD和14KD;SPAG8条带位于50KD;OR1D2条带的位置分别是26KD和32KD。3.利用TEM、紫外可吸收光谱和粒径仪表征20和40nm的纳米金。用Western blot鉴定免疫靶向纳米金的抗体负荷量;体外杀精实验显示,连接SPACA3、SPAG8和OR1D2抗体的免疫靶向纳米金最小抑制精子浓度分别是5×10-9mol/L、2.5×10-9mol/L和1.25×10-9mol/L。4.RNA构建文库和测序质检结果:Agilent2500构建的测序文库主峰长度466bp,Q30的比例大于90%。与对照组比较SPACA3、SPAG8和OR1D2组分别有146、110和90个基因上调,159、256和192个基因下调。SPACA3、SPAG8和OR1D2组共同上调和下调的基因均有9个。GO聚类分析得到48、52和51个类。KEGG通路分析得到66、126和136条通路。RT-PCR验证基因PNRC2和JPH2的表达情况与测序结果一致。结论:1.利用生物信息学软件设计抗原多肽,成功制备可结合活体细胞膜蛋白的抗体进行后续研究。2.发明了一种重组蛋白A(ProteinAG)介导的免疫靶向纳米金的制备方法,具有很好的反应稳定性和特异性。利用免疫靶向纳米金合成技术成功开发一种新型外用杀精剂。3.抗精子抗体可以影响成熟精子的基因表达,上调基因JPH2、AC005863.1、AC084149.2、HNRNPUL2-BSCL2、AC108938.5、RP11-386G11.5、RPPH1、CTC-344H19.6和PRH1-PRR4和下调基因PNRC2、ZBTB9、SEC13P1、KRT16P6、FABP5P14、ATP6V1G2-DDX39B、AC005519.4、RP13-1032I1.10和RP5-850E9.3可能在抗精子抗体作用过程中发挥重要作用,成为免疫不孕不育诊断、预后和防治的靶点。抗精子抗体对生殖发育相关的活动和代谢通路均有影响,首次发现抗精子抗体对成熟精子Metabolic pathways(hsa01100)有影响。可见抗精子抗体的作用机制是多基因参与、多基因调控的结果。
潘艺青[6](2016)在《MAPK磷酸酶-1对血-睾屏障的影响及其机制研究》文中进行了进一步梳理睾丸炎可导致男性不育,危害男性生殖健康和家庭幸福。睾丸炎症发生时,可使生殖细胞抗原暴露,诱发机体对自身精子产生免疫反应,造成不可逆的生育障碍,是目前临床治疗中十分棘手的问题。血-睾屏障可以隔离精子抗原的识别,对建立和维持睾丸免疫豁免微环境至关重要。研究表明,炎症造成血-睾屏障结构与功能的破坏是睾丸产生自身免疫反应的重要致病机理之一。闭锁蛋白(occludin)是最早发现的紧密连接膜蛋白,它能够封闭Sertoli细胞之间的间隙,维持血-睾屏障的正常结构与功能。occludin的功能受到丝裂原蛋白激酶(MAPK)的调控,并与炎症导致的精子发生异常、生育力下降等病理改变密切相关。MAPK磷酸酶-1(MKP-1)特异性地调控MAPK信号通路分子的磷酸化水平,维持机体免疫应答处于合适的强度,是炎症反应中非常重要的负调节分子。然而,MKP-1是否通过调节MAPK信号通路的磷酸化水平影响Sertoli细胞之间紧密连接的结构与功能?MKP-1在睾丸炎中是否发挥保护作用?目前未见报道。本研究通过观察MKP-1对血-睾屏障重要结构分子occludin的作用及其调控机制,旨在研究Mkp-l敲除对小鼠生育力的影响,探讨睾丸炎症中的免疫负调节保护作用及其分子机制。本研究以小鼠为模型,观察MKP-1在睾丸中的时-空表达规律。结果显示,MKP-1在幼年期和性成熟期小鼠睾丸的表达水平较高,而在青春期较低。MKP-1在不同年龄阶段小鼠睾丸中呈现不同的分布特点。性成熟期小鼠的MKP-1主要表达于Sertoli细胞和精子细胞,间质细胞和血管内皮细胞亦有表达。急性炎症(LPS)刺激下,睾丸内MKP-1表达显着增加,其在生精上皮第Ⅶ-Ⅷ期Sertoli细胞核以及血-睾屏障连接部位的表达均明显上升,提示MKP-1可能参与炎症刺激下血-睾屏障结构与功能的调节。通过体外培养Sertoli细胞,观察MKP-1对紧密连接蛋白occludin的作用。我们采用LPS刺激Sertoli细胞模拟体内炎症模型,发现在静息状态下MKP-1表达水平很低;LPS作用后MKP-1的表达显着升高,且此效应具有明显的时间-剂量依赖性。occludin在正常对照组表达水平较高,炎症导致occludin表达显着下降。分析MKP-1对occludin的作用机制,发现MKP-1能够通过阻断p38和IκBα的磷酸化从而抑制occludin表达的下降;且MKP-1与p38存在相互作用,表明MKP-1可能通过与p38的结合对occludin产生作用。MKP-1对occludin定位影响的实验发现:对照组occludin主要呈串珠样分布于Sertoli细胞膜,在胞质和胞核部位表达水平较低;LPS刺激可引起Sertoli细胞膜上的occludin经clathrin介导的内吞活动增加,造成occludin在Sertoli细胞膜的表达降低;RNA干扰抑制MKP-1表达后,clathrin介导的occludin内吞作用较炎症刺激组显着增强,导致Sertoli细胞膜上的occludin进一步下降。以上结果提示,MKP-1不仅能够影响occludin分子的表达水平,还参与调节occludin蛋白的分布和功能。最后,通过在体实验进一步验证上述体外研究的结果。采用形态学观察、精液常规检测以及小鼠交配能力三个实验观察基因敲除小鼠(Mkp-l-/-的生殖表型。结果显示,敲除小鼠的生精上皮多核巨细胞增多,凋亡增加,精子发生异常;精子活力和前向运动力减弱,精子畸形率增加;小鼠生育力下降。此外,敲除小鼠的血-睾屏障结构发生改变、通透性增加,血液抗精子抗体(AsAb)及睾丸内炎症因子(TNFα)均显着升高,提示敲除小鼠睾丸的生殖免疫微环境发生了改变。Mkp-l-/-睾丸内occludin表达水平明显下降,Sertoli细胞紧密连接部位细胞膜上的occludin明显减少。MKP-1能够抑制炎症刺激下p38的磷酸化,从而减少occludin表达的下降,并影响clathrin介导的occludin蛋白内吞活动。以上结果表明,MKP-1参与体内睾丸生殖免疫微环境的维持,并在睾丸炎症的进程中发挥重要的负调节作用。综上所述,本研究首次发现Mkp-l全基因敲除小鼠血-睾屏障结构、功能的改变,抗精子抗体水平升高,生育力下降,表明MKP-1作为免疫调节分子参与维持睾丸免疫豁免微环境。首次揭示MKP-1通过与信号分子p38和IκBα的相互作用,影响紧密连接蛋白occludin的表达与定位,提示MKP-1在睾丸炎症中的保护作用及分子机制。本研究为睾丸炎症导致的男性不育患者的诊治提供了新的理论依据和靶标。
唐乾利[7](2013)在《强精煎治疗少弱精子症的临床疗效及其抗氧化与调控能量代谢的机理研究》文中研究说明[目的]男性不育症是影响人类健康及子孙繁衍的重大疾病,常常表现为少弱精子症,其中过度氧化与能量代谢障碍可能是其关键病理生理学机制。目前,缺乏对少弱精子症的有效治疗药物。前期研究发现,具有健脾益肾功效的中药验方强精煎可抑制生精功能障碍大鼠生精细胞凋亡,并恢复睾丸的生精功能,但具体机制尚未清楚。本项目基于中医学对少弱精子症脾肾两虚的病机认识,在前期研究的基础上临床观察强精煎治疗脾肾两虚少弱精子症患者的疗效,并应用奥硝唑诱导建立少弱精子症大鼠模型,进一步探讨强精煎对该模型大鼠精子质量的影响,观察强精煎对少弱精子症模型大鼠睾丸及附睾组织病理组织、超微结构、抗氧化作用、能量代谢、氧化损伤调控效应因子(Nrf2)和能量代谢调控酶琥珀酸脱氢酶(SDH)基因表达的影响,探讨强精煎治疗少弱精子症的作用机制。[方法]1.临床观察:将符合脾肾两虚的男性不育少弱精子症患者120例随机分为对照组(黄精赞育胶囊组)与治疗组(强精煎组)。治疗组给予口服强精煎治疗,对照组给予口服黄精赞育胶囊治疗,疗程3个月。治疗结束后检测精子密度、活力、活率、精子形态率、精子膜表面抗精子抗体等指标,以及评价其安全性。2.动物实验:将SPF级实验动物100只雄性大鼠随机分为正常组、模型组、黄精赞育胶囊组、左卡尼汀口服溶液组、强精煎组,每组20只。正常组每天给予生理盐水灌胃;模型组予奥硝唑ORN(800mg/kg·d)灌胃;黄精赞育胶囊组予ORN(800mg/kg·d)+黄精赞育胶囊(200mg/kg·d)灌胃;左卡尼汀口服溶液组大鼠给予ORN(800mg/kg·d)+左卡尼汀口服溶液(100mg/kg·d)灌胃;强精煎组大鼠每天给予ORN (800mg/kg-d)+强精煎配方颗粒(10g/kg·d)灌胃。黄精赞育胶囊、左卡尼汀口服溶液、强精煎均溶于生理盐水,疗程4周。治疗结束后,观察大鼠睾丸、附睾组织病理及其超微结构,分析附睾精子密度和活率,以及检测附睾组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、乳酸脱氢酶(LDH)、a-葡糖苷酶、果糖浓度等指标,并采用Real-time PCR法检测大鼠附睾组织Nrf2和SDHmRNA水平。[结果]1.临床研究:①与对照组相比,强精煎显着提高a级和a+b级精子活力、精子密度及精子形态率(P<0.05),总有效率也明显高于对照组(P<0.05)。②强精煎未见明显毒副作用及不良反应。2.动物实验:①模型组大鼠附睾的精子密度及活动率明显低于正常组(P<0.05),而强精煎组、黄精赞育胶囊组、左卡尼汀口服溶液组的精子密度和活动率则明显高于模型组(P<0.05),并且强精煎组与正常组相类似(P<0.05);②病理研究显示,模型组大鼠睾丸生精小管管腔内可见脱落的各级生精细胞,附睾管腔中精子数目明显减少,有较多的非精子细胞成分,而强精煎组、黄精赞育胶囊组及左卡尼汀口服溶液组大鼠睾丸、附睾均未见明显改变,睾丸生精小管内及附睾管腔均可见大量精子;超微结构显示模型组附睾管壁变薄,管腔内精子明显减少,不能充满管腔,排列紊乱,附睾管腔问间隙增大;与模型组相比,强精煎组、黄精赞育胶囊组及左卡尼汀口服溶液组附睾管壁较厚,精子充满管腔,排列较为规则,呈团簇样,管腔间隙较紧密,均与正常组类似。③模型组SOD和GSH-Px含量明显低于正常组(P<0.05),而MDA含量则明显高于正常组(P<0.05);与模型组相比,黄精赞育胶囊组、左卡尼汀口服溶液组和强精煎组SOD、GSH-Px明显高于模型组(P<0.05),而MDA含量明显低于模型组(P<0.05);强精煎组SOD、MDA和GSH-Px含量与正常组相类似(P>0.05)。Real-time PCR结果显示,模型组Nrf2mRNA比正常组明显下降(P<0.05);与模型组比较,黄精赞育胶囊组、左卡尼汀口服溶液细和强精煎组Nrf2mRNA明显升高(P<0.05),也高于正常组(P<0.05),并且强精煎组表达量明显高于黄精赞育胶囊组或左卡尼汀口服溶液组(P<0.05)。④与正常组相比,模型组a-葡糖苷酶、果糖浓度明显下降(P<0.05),而LDH明显高于正常组(P<0.05);与模型组相比,黄精赞育胶囊组、左卡尼汀口服溶液资组和强精煎组a-葡糖苷酶、果糖浓度明显高于模型组(P<0.05),而LDH则明显低于模型组(P<0.05);强精煎组LDH、a-葡糖苷酶和果糖浓度都与正常组相类似(P>0.05)。Real-time PCR结果显示,模型组SDHmRNA明显低于正常组(P<0.05);与模型组比较,黄精赞育胶囊组、左卡尼汀口服溶液细和强精煎组SDHmRNA明显升高(P<0.05),也高于正常组(P<0.05),并且强精煎组表达量明显高于黄精赞育胶囊组或左卡尼汀口服容液组(P<0.05)。[结论]1.强精煎可以明显提高人精子质量,改善精子活力及活率、精子形态率,并且无毒副作用。2.奥硝唑可诱导大鼠产生弱少精子症,并且与氧化过度和能量代谢障碍密切相关。3.强精煎可以改善甚至逆转奥硝唑诱导产生的弱少精子症。4.强精煎可以改善奥硝唑诱导附睾和睾丸的病理组织结构与超微结构。5.抗氧化作用和改善能量代谢很可能是强精煎治疗弱少精子症的机制。
邱敏[8](2012)在《青藤碱对雄性抗精子免疫不育抗体生成及生殖力影响的研究》文中提出目的:观察盐酸青藤碱对免疫性不育雄鼠血清抗精子抗体滴度(AsAb)及相关细胞因子的研究,并探讨对其生殖力的影响。方法:采用人工同种精子与弗氏佐剂主动免疫方法制备成年雄性大鼠抗精子免疫性不育动物模型,以盐酸青藤碱进行治疗,并设阳性对照组与空白对照组。观测治疗药物对血清AsAb、肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素2(IL-2)的含量,及交配后雌鼠的妊娠率和胚胎数。结果:盐酸青藤碱高剂组能够显着降低抗精子免疫不育雄性大鼠血清中抗精子抗体滴度(AsAb)水平,与模型组比较,差别有统计学意义(P<0.01);不同剂量组盐酸青藤碱均能降低其精浆中的肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素2(IL-2)的含量,与模型组比较有统计学意义(P<0.01),同时能提高配对雌鼠的受孕率及增加配对雌鼠胚胎数。结论:采用同种精子及弗氏佐剂人工主动免疫方法可以制备抗精子抗体介导的免疫性不育动物模型。盐酸青藤碱能降低免疫性不育雄性大鼠抗精子抗体滴度和抑制相关细胞因子的作用,提高了与之交配雌鼠的受孕率及胚胎数。研究结果为免疫性不育治疗开拓了新的思路。
彭江宁[9](2012)在《盐酸青藤碱对免疫不育大鼠精子质量及睾丸影响的研究》文中研究指明目的:考察盐酸青藤碱对抗精子抗体免疫不育大鼠精子质量的影响及对睾丸组织形态的作用,为治疗男性抗精子抗体免疫性不育提供新思路。方法:以同种SD大鼠精子制备抗原,采用人工主动免疫方法建立抗精子抗体免疫不育动物模型,酶联免疫吸附法(ELISA (?)去)检测大鼠血清抗精子抗体(anti sperm antibody, AsAb)浓度,确定模型成立后给药。观察给药后各组大鼠精子的密度、活动率、存活率、活力、精子顶体酶活性及睾丸组织形态,并进行组间比较。结果:1.造模实验中,各模型组与正常组相比,大鼠血清中AsAb的浓度显着升高(P<0.05),且各模型组之间血清AsAb浓度差异无统计学意义(P>0.05)。2.与模型组相比,盐酸青藤碱治疗后,大鼠血清AsAb的浓度显着降低(P<0.05,或P<0.01),且高剂量组的治疗效果明显(P<0.01)。低剂量组虽然有治疗效果但不佳,与正常组相比,其血清中AsAb的浓度偏高(P<0.01)。3.与模型组相比,盐酸青藤碱治疗后:大鼠精子密度显着升高(P<0.01);精子顶体酶活性升高,但无统计学意义(P>0.05);精于活动率、存活率明显增大(P<0.05,或P<0.01),且高剂量组作用效果明显(P<O.01)。4.与模型组相比,盐酸青藤碱治疗后,大鼠精子中b级精子数量显着增大(P<0.01),d级精子数量显着减少(P<0.05,或P<0.01),且高剂量组作用效果明显(P<0.01);a+b级精子数量显着增多(P<0.01),c+d级精子数量显着降低(P<0.01)。5.与模型组相比,盐酸青藤碱治疗后大鼠睾丸精曲小管精原细胞,初级、次级精母细胞等结构清楚,排列整齐,层次分明。各级生精细胞发育良好,成熟精子较多,睾丸间质细胞发育良好,未见异常现象。结论:1.正常组与模型组以及各模型组之间相互比较,各模型组大鼠血清中AsAb的浓度显着升高(P<0.05),模型建立成功。2.盐酸青藤碱具有改善AsAb免疫不育大鼠精子质量的作用。其作用主要表现在提高精子密度、精子活动率、精子存活率、精子活力方面。3.盐酸青藤碱具有改善AsAb免疫不育大鼠睾丸组织形态的作用。
辛荣华[10](2011)在《抗凝方治疗男性免疫性不育症的临床研究》文中研究指明目的:通过中药“抗凝方”对男性免疫性不育症临床治疗效果的观察,来探讨中药治疗男性免疫性不育症的机理,探求更加简便、高效的中药制剂。材料与方法:选取符合男性免疫性不育症的患者36例,将36例男性免疫性不育症患者随机分成两组,治疗组24例采用中药“抗凝方”和五子衍宗丸,对照组12例口服强的松片和五子衍宗丸,六周为一个疗程,观察2组治疗前后免疫指标(抗精子抗体,抗透明带抗体)、精液质量指标,并对临床数据进行统计学分析。结果:1.“抗凝方”治疗组抗精子抗体和抗透明带抗体转阴率、精子质量指标的改善均显着高于对照组(P<0.05),有统计学意义。2.中药治疗组未见不良反应,对照组有一定的不良反应。3.两组均有部分患者无效。结论:1.中药“抗凝方”治疗男性免疫性不育症有较好的疗效。通过对“抗凝方”药物的配伍分析,对于男性免疫性不育症的基本治则为补肝肾为主,兼活血化瘀。相对于西药应用皮质类固醇激素的治疗方法有一定的优势。2.对于引起男性免疫性不育症的中医病因病机,在于正虚为本,湿热瘀血为标。采取补虚、清热解毒、活血化瘀、利水渗湿等多种治疗方法。3.抗精子抗体和抗透明带抗体与免疫性不育有关,它们由阳性转为阴性有利于精液常规各项指标正常,从而更加有利于配偶妊娠。4.中药治疗免疫性不育症,与现代医学对于免疫性不育症的产生原因的基础研究以及对于中药和中药复方制剂免疫机理的研究进展密切相关。免疫中药学的发展,更加有利于在中医理论指导下进行选药组方,找出更加适合治疗男性免疫性不育症的简便,高效的中药小复方制剂。5.由于导致男性免疫性不育症的原因相对复杂,而且生殖过程的复杂性,从诊断到治疗以及使配偶成功妊娠并分娩出健康婴儿所需要的随访时间较长,因此治疗的最终效果很难掌握。
二、抗精子抗体介导的免疫性不育动物模型的建立(论文开题报告)
(1)论文研究背景及目的
此处内容要求:
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景,再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题,并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例:
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
(2)本文研究方法
调查法:该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法:用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法:通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法:通过调查文献来获得资料,从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法:依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法:对研究对象进行“质”的方面的研究,这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法:通过具体的数字,使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法:运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法:这是社会科学用来分析社会现象的一种方法,从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法:通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、抗精子抗体介导的免疫性不育动物模型的建立(论文提纲范文)
(1)灵归方对奥硝唑诱导的弱精子症模型大鼠附睾功能影响的实验研究(论文提纲范文)
中文摘要 |
Abstract |
英文缩略语 |
综述一 中医诊治男性不育症研究进展 |
参考文献 |
综述二 西医诊治男性不育症研究进展 |
参考文献 |
实验研究 |
前言 |
第一部分 ORN诱导弱精子症模型大鼠的研究 |
1. 材料与方法 |
2. 数据分析 |
3. 实验结果 |
3.1 大鼠一般状态 |
3.2 大鼠体重,睾丸、附睾重量 |
3.3 大鼠睾丸、附睾脏器系数 |
3.4 精子浓度及活动率 |
4. 小结 |
第二部分 灵归方对ORN诱导的弱精子症模型大鼠附睾功能影响的实验研究 |
实验一 灵归方对ORN诱导弱精子症大鼠附睾LC相关通路的影响 |
1. 材料与方法 |
2. 数据分析 |
3. 实验结果 |
3.1 精子浓度及活动率 |
3.2 附睾LC含量 |
3.3 灵归方对附睾OCTN2蛋白表达的影响 |
3.4 灵归方对附睾OCTN2 mRNA表达的影响 |
实验二 灵归方对弱精子症大鼠血清性激素及附睾氧化应激反应的影响 |
1. 材料与方法 |
2. 数据分析 |
3. 实验结果 |
3.1 灵归方对血清性激素水平的影响 |
3.2 灵归方对附睾组织GSH-Px、SOD活性,MDA含量的影响 |
3.3 灵归方对睾丸、附睾组织结构的影响 |
讨论 |
1. 选择LC相关通路作为研究的依据 |
2. 选择ORN作为造模药物的依据 |
3. 灵归方组方分析 |
4. 灵归方改善弱精子症大鼠作用机制 |
4.1 灵归方增加弱精子症大鼠附睾LC含量 |
4.2 灵归方上调OCTN2蛋白及mRNA在附睾中的表达 |
4.3 灵归方抗氧化作用 |
结论 |
创新点 |
不足与展望 |
参考文献 |
致谢 |
个人简介 |
附录 |
(2)曾庆琪教授辨治男性不育症的学术思想及润精汤治疗少弱精子症的临床和实验研究(论文提纲范文)
中文摘要 |
Abstract |
前言 |
第一部分 中医药治疗少弱精子症的研究进展 |
1 病因病机 |
2 辨证施治 |
2.1 名家经验 |
2.2 辨精论治 |
3 临床研究 |
3.1 专病专方 |
3.2 中成药 |
3.3 针灸及物理治疗 |
3.4 中西医结合治疗 |
3.5 综合治疗 |
4 实验研究 |
4.1 降低生殖细胞凋亡 |
4.2 改变Catsper通道 |
4.3 抗氧化应激损伤 |
4.4 调节生殖性腺轴,改善生殖内分泌功能 |
4.5 改善睾丸微循环 |
4.6 改善附属性腺的分泌功能 |
5 结语 |
参考文献 |
第二部分 曾庆琪教授辨治男性不育症学术思想 |
1 病因病机 |
2 辨病论治 |
2.1 特发性不育症 |
2.2 精液不液化 |
2.3 感染性不育症 |
2.4 免疫性不育 |
2.5 精索静脉曲张性不育症 |
2.6 其他原因引起不育症 |
3 用药规律 |
3.1 用药特点 |
3.2 常用效验对药、角药 |
4 预防调护 |
4.1 三步四法、助孕有道 |
4.2 生活指导、综合治疗 |
5 结语 |
参考文献 |
第三部分 润精汤治疗特发性少弱精子症的临床研究 |
1 研究对象 |
1.1 临床来源 |
1.2 诊断标准 |
1.3 纳入标准 |
1.4 排除标准 |
1.5 脱落标准 |
1.6 剔除标准 |
1.7 终止标准 |
2 研究方法 |
2.1 试验方法 |
2.2 给药方案 |
2.3 治疗方法 |
2.4 注意事项 |
2.5 观察指标 |
2.6 疗效评价 |
2.7 统计学方法 |
2.8 设计路线图 |
3 研究结果 |
3.1 一般资料分析 |
3.2 精液参数比较 |
3.3 血清性激素水平比较 |
3.4 中医症状评分比较 |
3.5 临床疗效比较 |
3.6 安全性观察 |
3.7 不良反应比较 |
4 讨论 |
4.1 润精汤组方思路 |
4.2 润精汤单味药的分析和现代药理研究 |
4.3 还少胶囊作为阳性对照药物的选择依据 |
4.4 润精汤对特发性少弱精子症的临床疗效探讨 |
5 结语 |
参考文献 |
第四部分 润精汤对奥硝唑诱导的少弱精子症大鼠的实验研究 |
1 前言 |
2 实验材料 |
2.1 实验动物 |
2.2 实验药物 |
2.3 实验试剂 |
2.4 主要试剂的配制 |
2.5 实验仪器及耗材 |
3 实验方法 |
3.1 分组与给药 |
3.2 实验取材 |
3.3 实验内容 |
3.4 统计方法 |
3.5 技术路线图 |
4 实验结果 |
4.1 精液参数比较 |
4.2 血清性激素水平比较 |
4.3 睾丸组织病理形态比较 |
4.4 睾丸组织细胞凋亡比较 |
4.5 睾丸组织波形蛋白表达比较 |
4.6 睾丸组织ERK信号通路比较 |
5 讨论 |
5.1 奥硝唑诱导少弱精子症模型的建立 |
5.2 润精汤改善奥硝唑诱导的生精障碍型SD雄性大鼠生精功能的作用机制 |
6 结语 |
参考文献 |
结论 |
附录 |
附录1 润精汤治疗特发性少弱精子症临床观察表 |
附录2 润精汤治疗特发性少弱精子症中医症状评分表 |
附录3 润精汤治疗特发性少弱精子症患者知情同意书 |
附录4 常用英文缩略表 |
攻读博士学位期间取得的学术成果 |
致谢 |
作者简介 |
(3)滤泡辅助性T细胞在实验性免疫性不育小鼠中的表达(论文提纲范文)
1 材料与方法 |
1.1 材料 |
1.1.1 实验动物 |
1.1.2 仪器和试剂 |
1.2 方法 |
1.2.1 免疫性不育小鼠模型的建立 |
1.2.2 小鼠脾脏淋巴细胞的分离 |
1.2.3 流式细胞术检测小鼠脾淋巴细胞内Tfh细胞、B细胞的比例 |
1.3 统计学分析 |
2 结果 |
2.1 免疫性不育小鼠模型的建立 |
2.2 对照组和实验组Tfh 细胞表达的差异 |
2.3 对照组和实验组B细胞表达的差异 |
2.4 免疫性不育小鼠Tfh 细胞比例与B 细胞比例相关性分析 |
3 讨论 |
(4)男性不育症实验动物模型在中医药领域的应用概况(论文提纲范文)
1 实验动物的选择 |
2 少、弱、畸形精子症动物模型的建立 |
2.1 雷公藤多甙模型 |
2.1.1剂量和时间选择: |
2.1.2 造模效果: |
2.2 奥硝唑模型 |
2.2.1剂量和时间选择: |
2.2.2 造模效果: |
2.3 腺嘌呤模型 |
2.4 氢化可的松模型 |
2.5 环磷酰胺模型 |
2.6 乙酸棉酚模型 |
3 免疫性不育动物模型的建立 |
4 精索静脉曲张不育模型的建立 |
5 结语 |
(5)抗精子抗体的作用机制及其生物靶向应用的研究(论文提纲范文)
中文摘要 |
Abstract |
缩略语/符号说明 |
前言 |
研究现状、成果 |
研究目的、方法 |
一、人源精子膜蛋白免疫多肽的筛选及生物信息学研究 |
1.1 对象和方法 |
1.1.1 材料对象 |
1.1.2 实验方法 |
1.2 结果 |
1.2.1 利用NCBI和UniProtKB蛋白数据库查询人源精子膜蛋白 |
1.2.2 人源精子膜蛋白SPACA_1、SPACA_3、SPAG_8和OR1D2跨膜区域预测分析 |
1.2.3 人源精子膜蛋白SPACA_1、SPACA_3、SPAG_8和OR1D2信号肽分析 |
1.2.4 人源精子膜蛋白SPACA_1、SPACA_3、SPAG_8和OR1D2疏水性分析 |
1.3 讨论 |
1.4 小结 |
二、制备人源精子膜蛋白多克隆抗体及鉴定研究 |
2.1 对象和方法 |
2.1.1 实验动物 |
2.1.2 实验材料 |
2.1.2.1 实验仪器 |
2.1.2.2 实验试剂 |
2.1.2.3 主要试剂配置方法 |
2.1.3 实验方法 |
2.1.3.1 多肽抗原与KLH偶联及纯化 |
2.1.3.2 动物免疫 |
2.1.3.3 抗体血清的制备 |
2.1.3.4 饱和硫酸铵法纯化抗体 |
2.1.3.5 抗体浓度测定 |
2.1.3.6 人源精子膜蛋白可溶性抗原的制备 |
2.1.3.7 酶联免疫吸附实验测定血清抗体效价 |
2.1.3.8 人精子细胞免疫荧光染色 |
2.1.3.9 Western blot 实验 |
2.1.3.10 统计方法 |
2.2 结果 |
2.2.1 ELISA检测SPACA_1、SPACA_3、SPAG_8和OR1D2抗体效价 |
2.2.2 SPACA_1、SPACA_3、SPAG_8和OR1D2蛋白在人源精子的表达及占位 |
2.2.3 Western blot鉴定抗体特异性反应结果 |
2.3 讨论 |
2.4 小结 |
三、免疫靶向纳米金的制备及应用 |
3.1 对象和方法 |
3.1.1 实验试剂 |
3.1.2 实验仪器 |
3.1.3 实验试剂配制 |
3.1.4 试验方法 |
3.2 结果 |
3.2.1 利用柠檬酸钠还原法制备纳米金的表征 |
3.2.2 免疫靶向纳米金的表征 |
3.3 讨论 |
3.4 小结 |
四、高通量测序研究抗精子抗体对成熟精子的作用机制 |
4.1 对象和方法 |
4.1.1 实验试剂 |
4.1.2 实验仪器 |
4.1.3 实验方法 |
4.2 实验结果 |
4.2.1 实验质检结果 |
4.2.1.1 精子RNA质控结果 |
4.2.1.2 构建文库质检结果 |
4.2.1.3 测序结果质控 |
4.2.2 数据分析结果 |
4.2.2.1 测序序列质量评估 |
4.2.2.2 数据预处理 |
4.2.2.3 基因组比对结果统计 |
4.2.2.4 表达相关性分析 |
4.2.2.5 差异基因表达分析 |
4.2.2.6 GO聚类分析 |
4.2.2.7 KEGG pathway 聚类分析结果 |
4.2.2.8 RT-PCR 验证结果 |
4.3 讨论 |
4.4 小结 |
全文结论 |
论文创新点 |
参考文献 |
发表论文和参加科研情况说明 |
综述 抗精子抗体对生育影响的研究 |
综述参考文献 |
致谢 |
个人简历 |
(6)MAPK磷酸酶-1对血-睾屏障的影响及其机制研究(论文提纲范文)
摘要 |
abstract |
缩略词表 |
前言 |
第一部分 MKP-1在睾丸组织的表达特性及炎症刺激下的变化 |
引言 |
第一章 MKP-1在不同发育阶段小鼠睾丸中的表达和定位 |
1.1 材料与方法 |
1.2 数据分析 |
1.3 实验结果 |
1.3.1 MKP-1 在不同年龄小鼠睾丸中的表达 |
1.3.2 MKP-1 在不同年龄小鼠睾丸中的定位特征 |
第二章 炎症刺激下MKP-1 在睾丸中的表达和定位改变 |
2.1 材料与方法 |
2.2 数据分析 |
2.3 实验结果 |
2.3.1 LPS刺激后小鼠睾丸MKP-1 的表达 |
2.3.2 LPS刺激后小鼠睾丸MKP-1 的定位 |
讨论 |
小结 |
第二部分 MKP-1 对紧密连接蛋白occludin的作用和机制研究 |
引言 |
第三章 原代培养Sertoli细胞的MKP-1和occludin表达特性 |
3.1 材料与方法 |
3.2 数据分析 |
3.3 实验结果 |
3.3.1 LPS刺激原代培养Sertoli细胞后MKP-1 的表达特性 |
3.3.2 LPS刺激原代培养Sertoli细胞后occludin的表达特性 |
3.3.3 LPS刺激原代培养Sertoli细胞后相关信号分子的表达 |
第四章 MKP-1 靶向调节Sertoli细胞occludin的功能和机制研究 |
4.1 材料与方法 |
4.2 数据分析 |
4.3 实验结果 |
4.3.1 LPS刺激TM4 Sertoli细胞后MKP-1 及相关信号分子的表达特性 |
4.3.2 LPS作用TM4 Sertoli细胞后occludin及相关信号分子的表达特性 |
4.3.3 LPS刺激TM4 Sertoli细胞后MKP-1与occludin的相互作用 |
讨论 |
小结 |
第三部分 Mkp-1 敲除(Mkp-1~(-/-))对小鼠生殖功能的影响 |
引言 |
第五章 Mkp-1~(-/-)小鼠雄性生殖表型改变 |
5.1 材料与方法 |
5.2 数据分析 |
5.3 实验结果 |
5.3.1 Mkp-1~(-/-)小鼠基因型的鉴定 |
5.3.2 Mkp-1 基因敲除小鼠的生殖能力 |
5.3.3 Mkp-1 基因敲除小鼠的雄性配子功能 |
5.3.4 Mkp-1 基因敲除对精子发生的影响 |
5.3.5 Mkp-1 基因敲除对睾丸免疫微环境的影响 |
第六章 Mkp-1~(-/-)小鼠血-睾屏障功能改变及机制研究 |
6.1 材料与方法 |
6.2 数据分析 |
6.3 实验结果 |
6.3.1 Mkp-1 基因敲除对血-睾屏障结构与功能的影响 |
6.3.2 Mkp-1 基因敲除对睾丸紧密连接相关蛋白表达的影响 |
6.3.3 Mkp-1~(-/-)小鼠occludin表达的相关机制研究 |
讨论 |
小结 |
全文小结 |
参考文献 |
致谢 |
攻读博士期间发表论文 |
攻读博士期间参与课题 |
(7)强精煎治疗少弱精子症的临床疗效及其抗氧化与调控能量代谢的机理研究(论文提纲范文)
英文缩写词表 |
中文摘要 |
ABSTRACT |
引言 |
第一部分 文献研究 |
1 中医学对男性不育少弱精子症的认识 |
1.1 中医学对男性不育少弱精子症的认识源流 |
1.2 中医学对男性不育少弱精子症的治疗 |
1.3 中西医结合药物治疗男性不育症、少弱精症的临床研究 |
1.4 中药治疗男性不育少弱精子症的动物实验研究 |
2 西医学对男性不育症的认识 |
2.1 男性不育症的流行病学 |
2.2 男性不育症的病因 |
2.3 男性不育症的发病机制 |
2.4 男性不育少弱精子症的分子生物学机制 |
2.5 西医对少弱精子症的治疗 |
2.6 辅助生殖技术 |
3 问题与展望 |
第二部分 强精煎治疗少弱精子症的临床疗效 |
1 研究对象 |
1.1 病例来源 |
1.2 分组方法 |
1.3 病例选择 |
2 研究方法 |
2.1 研究方法 |
2.2 技术路线图 |
2.3 治疗方案 |
2.4 观察指标 |
2.5 疗效评定 |
2.6 受试者权益保障 |
2.7 质量控制与保证 |
2.8 伦理学委员会审批 |
2.9 数据管理及统计与分析 |
3 研究结果 |
3.1 一般资料分析 |
3.2 两组病例患者年龄比较 |
3.3 两组病例患者病程比较 |
3.4 试验结果分析 |
4 讨论 |
4.1 强精煎治疗脾肾两虚少弱精子症的临床疗效分析 |
第三部分 强精煎对奥硝唑所致少弱精子症大鼠作用的机理研究 |
1 实验材料 |
1.1 实验动物 |
1.2 器材 |
1.3 试剂及药物 |
2 实验方法 |
2.1 少弱精子症大鼠动物模型造模方法及给药治疗 |
2.2 取材 |
2.3 总RNA提取 |
2.4 检测部分 |
3 统计学处理方法 |
4 结果 |
4.1 强精煎对大鼠精子密度及活动率的影响 |
4.2 各组大鼠睾丸、附睾病理学观察 |
4.3 各组大鼠睾丸、附睾组织超微结构观察 |
4.4 强精煎对大鼠附睾组织SOD、MDA、GSH-PX含量的影响 |
4.5 强精煎对大鼠附睾组织LDH、A-葡糖苷酶、果糖浓度的影响 |
4.6 强精煎对大鼠附睾组织SDH和NRF2 MRNA表达的影响 |
5 讨论 |
5.1 大鼠少弱精子症动物模型成功建立 |
5.2 强精煎提高大鼠生精的作用机制 |
结论 |
课题创新性 |
参考文献 |
附图 |
致谢 |
附录一:临床病例观察表 |
附录二:综述 少弱精子症研究近况与展望 |
参考文献 |
附录三:攻读学位期间主要研究成果及发表的论文、论着 |
(8)青藤碱对雄性抗精子免疫不育抗体生成及生殖力影响的研究(论文提纲范文)
中文摘要 |
Abstract |
英文缩写与含义列表对照 |
引言 |
1. 实验材料 |
1.1 实验药物 |
1.2 实验动物 |
1.3 实验试剂 |
1.4 实验仪器 |
2. 实验方法与结果 |
2.1 雄性抗精子免疫不育模型的制备 |
2.1.1 实验方法 |
2.1.2 实验结果 |
2.2 盐酸青藤碱对雄性免疫不育抗精子抗体生成及相关细胞因子的研究 |
2.2.1 模型的制备与分组给药 |
2.2.2 实验结果 |
2.2.2.1 对血清抗精子抗体水平的影响 |
2.2.2.2 对精浆中与抗精子抗体相关的细胞因子的影响 |
2.2.2.2.1 对精浆中TNF-α含量的影响 |
2.2.2.2.2 对精浆中IL-6含量的影响 |
2.2.2.2.3 对精浆中IL-2含量的影响 |
2.3 盐酸青藤碱对雄性抗精子抗体阳性模型大鼠生殖能力的影响 |
2.3.1 模型的制备与分组给药 |
2.3.2 与雌鼠的交配方法 |
2.3.3 主要观测指标 |
2.3.3.1 交配后雌鼠的妊娠率 |
2.3.3.2 交配后雌鼠的胚胎数 |
3 讨论 |
3.1 现代医学对抗精子免疫不育的认识 |
3.2 中医学对男性抗精子免疫性不育病因病机的分析 |
3.3 本实验研究男性抗精子抗体模型制备方法的选择依据 |
3.4 盐青藤碱治疗男性抗精子免疫不育的重要意义4 |
3.5 与盐酸青藤碱治疗抗精子免疫不育相关的其他基础研究 |
3.6 盐酸青藤碱治疗男性抗精子免疫不育的发展前景 |
4 结论 |
致谢 |
参考文献 |
附录 抗精子免疫不育治疗方法的研究进展 |
参考文献 |
(9)盐酸青藤碱对免疫不育大鼠精子质量及睾丸影响的研究(论文提纲范文)
中文摘要 |
ABSTRACT |
引言 |
实验研究 |
1 实验材料 |
1.1 实验动物 |
1.2 实验药物 |
1.2.1 受试药物 |
1.2.2 阳性药物 |
1.3 实验试剂 |
1.4 主要实验仪器 |
1.5 统计方法 |
2 实验方法与结果 |
2.1 AsAb免疫不育大鼠模型的建立 |
2.1.1 实验方法 |
2.1.2 实验结果 |
2.2 盐酸青藤碱对抗精子抗体大鼠精子质量影响 |
2.2.1 实验方法 |
2.2.2 实验结果 |
2.3 盐酸青藤碱对抗精子抗体大鼠睾丸组织形态的影响 |
2.3.1 实验方法 |
2.3.2 实验结果 |
3 讨论 |
3.1 现代医学对抗精子抗体免疫不育的认识 |
3.2 盐酸青藤碱用于治疗抗精子抗体免疫不育的理论依据 |
3.3 AsAb免疫不育模型的制备 |
3.4 精子顶体酶的意义 |
3.5 盐酸青藤碱对AsAb免疫不育大鼠睾丸的影响 |
4 实验结论 |
附图 |
致谢 |
参考文献 |
综述 |
参考文献 |
附件:攻读学位期间主要的科研成果和发表论文 |
(10)抗凝方治疗男性免疫性不育症的临床研究(论文提纲范文)
中文摘要 |
英文摘要 |
前言 |
文献综述 |
1 引起男性免疫性不育症的病因 |
2 男性免疫性不育症的诊断和治疗 |
3 实验室各项指标的检测有助于疗效的判定 |
4 对于免疫性不育动物模型的实验研究 |
正文 |
1 材料 |
2 方法 |
3 结果 |
分析讨论 |
结论 |
参考文献 |
致谢 |
个人简历 |
四、抗精子抗体介导的免疫性不育动物模型的建立(论文参考文献)
- [1]灵归方对奥硝唑诱导的弱精子症模型大鼠附睾功能影响的实验研究[D]. 晏斌. 中国中医科学院, 2020(01)
- [2]曾庆琪教授辨治男性不育症的学术思想及润精汤治疗少弱精子症的临床和实验研究[D]. 杨凯. 南京中医药大学, 2020
- [3]滤泡辅助性T细胞在实验性免疫性不育小鼠中的表达[J]. 曹晓丹,魏任雄,李如瑶,贝华锋. 中华临床免疫和变态反应杂志, 2020(01)
- [4]男性不育症实验动物模型在中医药领域的应用概况[J]. 陈小均,王思师,贾玉森,张志杰. 北京中医药, 2018(03)
- [5]抗精子抗体的作用机制及其生物靶向应用的研究[D]. 王江. 天津医科大学, 2017(04)
- [6]MAPK磷酸酶-1对血-睾屏障的影响及其机制研究[D]. 潘艺青. 上海交通大学, 2016(03)
- [7]强精煎治疗少弱精子症的临床疗效及其抗氧化与调控能量代谢的机理研究[D]. 唐乾利. 湖南中医药大学, 2013(02)
- [8]青藤碱对雄性抗精子免疫不育抗体生成及生殖力影响的研究[D]. 邱敏. 湖南中医药大学, 2012(10)
- [9]盐酸青藤碱对免疫不育大鼠精子质量及睾丸影响的研究[D]. 彭江宁. 湖南中医药大学, 2012(10)
- [10]抗凝方治疗男性免疫性不育症的临床研究[D]. 辛荣华. 辽宁中医药大学, 2011(01)