一、血管内皮功能与心血管疾病（论文文献综述）
周芳[1]（2021）在《基于差异表达的LncRNA TUG1研究小陷胸加味汤治疗冠心病（痰热互结证）的作用机制》文中研究指明目的:冠状动脉粥样硬化性心脏病（Coronary Atherosclerotic Heart Disease,CHD）是由冠状动脉血管发生动脉粥样硬化病变而引起血管腔狭窄或阻塞,造成心肌缺血、缺氧或坏死而导致的心脏病。一项由国家心血管病中心组织编撰体现我国心血管疾病流行与防治的报告—《中国心血管病报告2018》中分析指出:目前我国约有3亿口人被确诊罹患心血管疾病,其中冠状动脉粥样硬化性心脏病患者人数超过1100万,位列心血管疾病第二,并且死亡率在心血管疾病中位列第一,这给社会和家庭带来了很大的负担。因此,安全有效的防治工作对降低冠心病的病亡率具有重要意义。血管内皮细胞功能障碍在冠心病的发生、发展过程中具有举足轻重的作用,其贯穿冠状动脉粥样硬化的始动、发展及临床事件整个过程。中医作为中华民族的瑰宝,历经时间的沉淀和反复验证,在保护血管内皮、改善血管内皮功能方面治疗冠心病具有独特优势。近年来,随着高通量基因测序技术、基因转录组学的不断革新进步,非编码RNA（noncoding RNA,nc RNA）在各种疑难疾病中揭开神秘面纱,有关其在心血管疾病中研究不在少数,这为心血管疾病的防治提供重要思路,也为疾病的基因治疗夯实基础。牛磺酸上调基因1（Taurine up-regulated1,TUG1）首先是在体外培养的新生小鼠视网膜细胞中被发现,后来被证实在损伤血管内皮细胞中高表达,可以通过介导血管内皮细胞的损伤参与心血管疾病的发病。p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 mitogen-activated protein kinases,p38MAPK）信号通路的激活在内皮细胞损伤中发挥重要作用,可以通过磷酸化转录因子引起多种相关基因转录,调控活性物质的表达,参与血管内皮细胞氧化应激损伤、凋亡等过程。基于差异表达的LncRNA TUG1与p38MAPK信号通路在冠心病血管内皮损伤中的重要作用,本研究将以保护血管内皮细胞作为切入点深入探讨小陷胸加味汤治疗冠心病作用机制,旨在为小陷胸加味汤的临床应用提供科学依据。方法:1.通过理论研究探索冠心病中医病名、病因病机、中医治疗的历史渊源及进展,揭示小陷胸汤治疗冠心病（痰热互结证）的中医辨证思路。基于中医药改善血管内皮功能治疗冠心病的独特优势,从基因层面及分子生物学层面挖掘小陷胸汤治疗冠心病（痰热互结证）可能潜在的作用机制,为下一步我们临床应用小陷胸加味汤治疗冠心病（痰热互结证）研究夯实理论基础。2.小陷胸加味汤治疗冠心病（痰热互结证）的临床观察及血管内皮功能的影响。选取56例冠心病（痰热互结证）患者,随机分为小陷胸加味汤组和对照组,小陷胸加味汤组在对照组西医常规治疗基础上予以小陷胸加味汤,疗程均为30天,分别观察（1）临床指标:中医临床症状,心绞痛发作次数、持续时间及发作程度;（2）实验室指标:心电图检查记录心绞痛发作时S-T段及T波的变化;血管内皮相关指标一氧化氮（NO）和内皮素（ET）分泌水平;（3）药物不良反应评价指标:血常规、尿常规、肝肾功能等。3.冠心病（痰热互结证）患者外周血LncRNA TUG1与血管内皮损伤相关性研究。随机选取15例冠心病（痰热互结证）患者,另设健康对照组15例。所有入选对象取血6ml,Real-Time PCR法检测外周血单个核细胞中LncRNA TUG1,免疫学方法测定循环内皮细胞计数,硝酸还原酶法测定一氧化氮分泌水平,放射免疫法测定内皮素分泌水平。采用Pearson相关分析,分别将LncRNA TUG1与循环内皮细胞计数、一氧化氮、内皮素做相关分析。4.基于中药血清药理学研究及时效关系研究,探索小陷胸汤加味汤调控差异表达的LncRNA TUG1与p38MAPK信号通路保护血管内皮细胞的作用机制。选用SPF级SD大鼠经灌胃给药制备小陷胸加味汤含药血清及空白对照血清;TNF-α诱导人脐静脉内皮细胞（HUVEC）制备内皮损伤模型,MTT法筛选最佳含药血清浓度及作用时间。实验分为模型组、空白血清组、小陷胸加味汤含药血清组,分别应用运用培养基、空白组血清及最佳小陷胸加味汤含药血清进行干预。采用RT-PCR法检测小陷胸加味汤含药血清对TNF-α诱导的损伤HUVEC中LncRNA TUG1的表达;Western Blot检测TNF-α诱导的损伤HUVEC中p38MAPK信号通路相关蛋白p38、P-p38的表达水平。采用Pearson相关分析来分析差异表达的LncRNA TUG1与内皮细胞p38MAPK信号通路相关蛋白p38、P-p38之间的相关性。结果:1.小陷胸汤源于《伤寒论》,后世医家在遵循原文的基础上不断扩义,明确提出在审明痰热互结病机的条件下,小陷胸汤能从多靶标、多途径、多层次改善血管内皮治疗冠心病。2.小陷胸加味汤治疗冠心病（痰热互结证）的临床疗效及对血管内皮功能的影响。小陷胸加味汤组能明显改善心绞痛症状和中医证候,与对照组比较差异具有统计学意义（P<0.05）,总有效率分别为92.86%和96.43%,心电图疗效总有效率为92.86%,优于对照组（P>0.05）。治疗后,两组NO分泌水平上调（P<0.05）,ET分泌水平降低（P<0.05）。两组治疗前后血常规、尿常规、肝肾功能等均无临床意义,小陷胸加味汤组出现1例胃痛（3.57%）,2例腹胀（7.14%）。对照组出现2例头昏、头痛（7.14%）,2例腹胀（7.14%）。3.冠心病（痰热互结证）患者外周血LncRNA TUG1与血管内皮损伤相关性研究。冠心病（痰热互结证）患者外周血中LncRNA TUG1相对表达量增加;血管内皮损伤相关指标循环内皮细胞、ET的分泌水平、NO的分泌水平与健康对照组比较,差异具有统计学意义（P<0.05）,分别为循环内皮细胞计数增加,ET分泌增加,NO分泌降低。Pearson相关分析显示:冠心病（痰热互结证）患者外周血中LncRNA TUG1与循环内皮细胞计数呈显着正相关（r=0.56,P=0.03）,与NO的分泌（r=-0.58,P=0.02）呈显着负相关,同时与ET的分泌水平呈显着正相关（r=0.62,P=0.01）。4.小陷胸加味汤调控差异表达的lnc RNA TUG1与p38MAPK信号通路保护血管内皮细胞的作用机制。时效关系研究发现小陷胸加味汤含药血清以一定的时间-剂量依赖方式改善TNF-α诱导损伤HUVEC细胞的增值能力。最终选用20%小陷胸加味汤含药血清干预TNF-α诱导损伤HUVEC细胞24小时。Real-Time PCR结果显示,LncRNA TUG1的相对表达水平在模型组的平均值为1.00,在空白血清组中的平均值为0.98,在20%小陷胸加味汤含药血清组中的平均值为0.96,小陷胸加味汤含药血清组与模型组、空白血清组比较,差异具有统计学意义（P<0.05）。Western Blot结果显示,20%小陷胸加味汤含药血清组中p38、P-p38蛋白表达量明显下调,与模型组、空白血清组比较差异均具有显着统计学意义（P<0.05）。Pearson相关分析显示LncRNA TUG1的相对表达量与p38、P-p38蛋白的表达呈显着正相关,分别为（r=0.997,P=0.048）,（r=0.990,P=0.017）。结论:1.小陷胸加味汤联合西医常规治疗能有效改善冠心病（痰热互结证）临床症状和血管内皮功能。2.冠心病（痰热互结证）患者外周血LncRNA TUG1表达具有差异性,差异表达的LncRNA TUG1与血管内皮损伤存在一定相关性。3.小陷胸加味汤含药血清能够通过调控差异表达的LncRNA TUG1进而减少p38MAPK信号通路相关蛋白的表达,减轻内皮细胞损伤。4.在审明病机的前提下,小陷胸加味汤可以从基因层面、分子生物学层面改善血管内皮功能治疗冠心病（痰热互结证）。
王宇[2]（2021）在《五龙通络解郁方治疗冠心病稳定型心绞痛合并抑郁症的研究》文中指出自从“双心医学”概念的提出,冠心病合并抑郁症日益受到关注,已成为当前研究的焦点。业已证明二者之间存在着复杂的双向联系,但具体发病机制尚未明确,且尚无统一公认的诊疗方案。本研究从文献整理、临床评价、网络药理学预测、动物实验验证四个方面对五龙通络解郁方治疗冠心病稳定型心绞痛合并抑郁症进行了初步的探索研究,以期为中医药治疗冠心病稳定型心绞痛合并抑郁症指出一个新的方向。目的1.对古代文献中,中医药治疗冠心病合并抑郁症的治疗思路和经验进行整理,梳理其病机和治法,为“益气活血解郁”法提供理论支撑。2.通过临床试验初步评价五龙通络解郁方治疗冠心病稳定型心绞痛合并抑郁症的临床有效性及安全性。3.运用网络药理学方法预测五龙通络解郁方潜在的作用靶点,并通过动物实验对其进行验证。方法1 古代文献研究以北京中医药大学图书馆及国家图书馆馆藏为主,结合“超星阅读器”以及网络数据库“国学大师”,对先秦至明清时期中医古籍文献进行检索,以“胸痹”“郁证”为主题词,并制定相关限制词。将检索得到的相关古籍原文按照中医文献学整理方法,采用分门别类的方法,结合文献体例进行整理。2随机对照的小样本探索性临床研究将65例符合诊断标准的冠心病稳定型心绞痛合并轻中度抑郁症的患者区组随机分为治疗组和对照组,对照组给予指南推荐的最佳治疗方案,治疗组在此基础上加用五龙通络解郁方,治疗4周。对比观察两组患者治疗前后的心绞痛发作情况（SAQ积分）、抑郁状态（HAMD积分、PHQ-9积分）、中医证侯积分以及安全性指标。3网络药理学研究获取五龙通络解郁方的活性成分及靶点、冠心病稳定型心绞痛合并抑郁症的疾病靶点,把两者对接得到五龙通络解郁方治疗冠心病稳定型心绞痛合并抑郁症的可能靶点。利用Cytoscape软件构建“药物—疾病”蛋白作用网络,并对潜在的治疗靶点进行筛选,选取关键的作用靶点,通过动物实验进行进一步的验证。4实验研究4.1五龙通络解郁方对血管损伤模型斑马鱼行为学的影响通过血管内皮细胞生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂（VEGFR tyrosine kinase inhibitor Ⅱ,VRI）诱导,建立斑马鱼血管内皮损伤模型,并通过斑马鱼行为分析仪采集斑马鱼的游行轨迹、游行距离、游行速度以及活跃时间等,观察不同浓度五龙通络解郁方对血管损伤模型斑马鱼行为学的影响。4.2五龙通络解郁方对斑马鱼血管新生的影响通过VRI诱导,建立斑马鱼血管内皮功能损伤模型,通过计算节间血管指数,评价五龙通络解郁方对斑马鱼血管内皮功能的保护作用。4.3五龙通络解郁方对斑马鱼炎症模型的影响通过切尾建立斑马鱼巨噬细胞迁移和聚集模型,在倒置荧光显微镜下观察五龙通络解郁方在不同浓度下对巨噬细胞迁移及聚集的影响。结果1文献研究通过对古代文献中记载的诊疗思路进行整理,发现古代医家多认为心气不足是冠心病稳定型心绞痛合并抑郁症的重要病机,气滞是关键因素。通过对古代医家的用药经验整理发现,益气温阳药物所占比例最大,出现频次也最多;其次为理气类药物。活血类药物的药味虽然少,但是其出现的频次仅次于益气类药物和理气类药物之后。本次研究还发现古代医家在治疗胸痹合并情志疾病时,还运用了一定比例的祛风药物,如防风、蔓荆实、麻黄等。2随机对照的小样本探索性临床研究SAQ积分方面,治疗后两组SAQ总分较治疗前均有降低,治疗组疗效优于对照组（P<0.05）。在AS、AF、TS、DP四个维度,治疗组疗效优于对照组（P<0.05）。在PL维度,治疗组与对照组无统计学差异（P>0.05）。HAMD方面,治疗后两组HAMD总分较治疗前均有降低（P<0.05）,治疗组疗效优于对照组（P<0.05）。在阻滞状态、睡眠障碍、焦虑躯体化方面,治疗组疗效优于对照组（P<0.05）。在认知障碍方面,治疗组与对照组无统计学差异（P>0.05）。PHQ-9方面,治疗后两组PHQ-9总分较治疗前均有降低（P<0.05）,治疗组疗效优于对照组（P<0.05）。中医证侯积分方面,包括总分、主症和次症,治疗后两组均较治疗前有统计学差异（P<0.05）。治疗后两组间比较均有统计学差异（P<0.05）,治疗组优于对照组。治疗后两组患者未出现心律失常现象（如心率增快、PR间期延长、房室传导阻滞、QTc间期延长等）、凝血功能异常、肝肾功能异常等不良反应。3网络药理学研究通过网络药理学预测,五龙通络解郁方可能作用于VEGFA、IL6、STAT3、AKT1、MAPK1、APP、EGFR、MMP9、CTNNB1、IL-1β等97个作用靶点。选取重要程度排名前两位的VEGFA、IL6为作用靶点,预测五龙通络解郁方可能通过改善血管内皮功能以及抑制炎症反应来治疗冠心病稳定型心绞痛合并抑郁症。4实验研究4.1五龙通络解郁方对血管损伤模型斑马鱼行为学的影响在游行距离方面,模型组斑马鱼游行距离明显减少,与空白对照组相比,具有统计学意义（P<0.05）。五龙通络解郁方不同浓度组均可增加血管损伤模型斑马鱼的游行距离,其中VRI+100 μg/mL组与模型组相比,具有统计学意义（P<0.05）;而VRI+30 μg/mL、VRI+300μg/mL、VRI+1000μg/mL组与模型组相比,无统计学意义（P>0.05）。在游行速度方面,模型组斑马鱼游行速度明显减慢,与空白对照组相比,具有统计学意义（P<0.05）。五龙通络解郁方不同浓度组均提高血管损伤模型斑马鱼的游行速度,其中VRI+100 μg/mL组与模型组相比,具有统计学意义（P<0.05）;而VRI+30 μg/mL、VRI+300μg/mL、VRI+1000μg/mL组与模型组相比,无统计学意义（P>0.05）。在活跃时间方面,模型组斑马鱼活跃时间明显缩短,与空白对照组相比,具有统计学意义（P<0.05）。五龙通络解郁方不同浓度组均延长血管损伤模型斑马鱼的活跃时间,其中VRI+100 μg/mL组与模型组相比,具有统计学意义（P<0.05）;而VRI+30 μg/mL、VRI+300μg/mL、VRI+1000μg/mL组与模型组相比,无统计学意义（P>0.05）。在游行轨迹方面,与空白对照组相比,模型组的斑马鱼游行轨迹明显稀疏。与模型组相比,五龙通络解郁方不同浓度组均可增加斑马鱼的游行线路,其中以VRI+100μg/mL组最明显。4.2五龙通络解郁方对斑马鱼血管新生的影响结果发现,模型组斑马鱼背部节间血管明显减少,与空白对照组相比,具有统计学意义（P<0.001）。与模型组相比,不同浓度的五龙通络解郁方均可促进斑马鱼血管新生,差异具有统计学意义[VRI+30 μg/mL（P<0.001）、VRI+100 μg/mL（P<0.001）、VRI+300 μg/mL（P<0.001）、VRI+1000μg/mL（P<0.001）]。4.3五龙通络解郁方对斑马鱼炎症模型的影响结果发现,与空白对照组相比,模型组斑马鱼尾部出现明显地巨噬细胞迁移和聚集,差异具有统计学意义（P<0.001）。与模型组相比,不同浓度的五龙通络解郁方均可减少斑马鱼尾部巨噬细胞的迁移和聚集。其中300 μg/mL组与1000 μg/mL组分别抑制了26%和31%的巨噬细胞迁移和聚集,且差异具有统计学意义（P<0.001）;30 μg/mL组与100 μg/mL组分别抑制了 7.8%和8.7%的巨噬细胞迁移和聚集,差异无统计学意义（P>0.05）。结论1.心阳（气）不足是胸痹合并情志疾病的根本原因,而气郁（滞）是关键因素,病位主要在心、肝、脾。治疗以益气温阳为主,兼之以解散,并在此基础上运用风药进行治疗。2.五龙通络解郁方可改善冠心病稳定型心绞痛合并轻中度抑郁症患者（气虚血瘀,肝郁气滞证）的心绞痛发作情况以及抑郁状态,且临床应用是安全、有效的。3.结合网络药理学及动物实验结果,五龙通络解郁方可能是通过改善血管内皮功能以及抑制炎症反应发挥治疗冠心病稳定型心绞痛合并抑郁症的治疗作用。综上所述,基于“络风内动-络损神伤”理论的“益气活血解郁、祛风通络止痛”法为中医药治疗冠心病稳定型心绞痛合并抑郁症提供了一条新的思路,值得临床推广和应用。
陈刚[3]（2020）在《外周血中HCMV-MIR-UL112-3p水平与颈动脉IMT增加的相关性及HCMV引起脐静脉内皮细胞内皮-间质转化的分子机制》文中进行了进一步梳理第一部分外周血中HCMV-MIR-UL112-3p水平与颈动脉IMT增加的相关性1研究背景动脉粥样硬化是一种进行性疾病,以脂质和纤维成分在动脉中聚集为主要特征。炎症反应在动脉粥样硬化发生过程中发挥重要作用,是引起心血管疾病的最重要原因,包括中风、心肌梗死、心力衰竭和血管瘤等。流行病学研究表明动脉粥样硬化存在多种危险因子,然而动脉粥样硬化的发病机制和病因尚不完全清楚。人巨细胞病毒（Human Cytomegalovirus,HCMV）属于疱疹病毒β亚科,为双链DNA病毒。在全球范围成人血清抗体阳性率为60-90%以上,与所有的疱疹病毒一样,一旦发生感染,HCMV会在宿主体内（唾液腺、白细胞等处）建立持续终生的潜伏感染,潜伏感染常会间断性地被激活而发生再激活感染。血管系统中的HCMV感染与心血管疾病如动脉粥样硬化、再狭窄和移植血管硬化,均存在相关性。HCMV可通过改变细胞粘附分子的表达、诱导内皮功能障碍和干扰细胞因子信号来加重病变血管的炎症反应。抗病毒药物更昔洛韦已被证明能降低心脏移植相关的动脉粥样硬化发生。HCMV编码至少26个成熟的mi RNA,但这些mi RNA与临床病理的相关性仍不确定。HCMV-mir-UL112-3p（mi R-UL112-3p）是HCMV编码的mi RNA中研究最广泛的一种,可以靶向调控宿主细胞和病毒转录。先前的研究表明,在高血压患者中,mi R-UL112-3p是唯一高表达的循环型HCMV编码mi RNA,并且它与高血压风险的增加有关。此外,有研究显示血浆HCMV-Ig G或抗CMV抗体水平与动脉粥样硬化有关,而另一些临床研究则发现HCMV感染与动脉粥样硬化之间的相关性不强。在本研究中我们检测了动脉粥样硬化患者血浆/血清中的mi R-UL112-3p和HCMV Ig G水平,同时通过颈动脉超声检查患者内膜中层厚度（IMT）,分析mi R-UL112-3p和HCMV Ig G、Ig M水平与IMT之间的关系,评估HCMV感染与动脉粥样硬化的相关性。2研究目的通过回顾性调查分析动脉粥样硬化患者颈动脉IMT和外周血炎性细胞因子水平与外周血中HCMV Ig G、Ig M和mi R-UL112-3p水平之间的关系,评估HCMV感染与动脉粥样硬化的相关性。3研究方法3.1研究对象和检测方法招募2012年9月至2016年6月在安徽医科大学第一附属医院心内科、神经内科、内分泌科就诊的颈动脉粥样硬化患者458名,收集患者临床资料,包括年龄、性别、糖尿病史、体重指数（BMI）、吸烟史和高血压史。抽血检测空腹血糖（FBG）、餐后血糖（PBG）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、T3、游离T4和促甲状腺激素（TSH）。通过颈动脉超声检查患者IMT值。通过荧光定量PCR（Polymerase Chain Reaction）检测外周血中mi R-UL112-3p的拷贝数,使用梅里埃酶联荧光试剂盒分析（ELFA）HCMV Ig M和Ig G水平,使用ELISA试剂盒检测血浆中TNF-α、IL-6和IL-1β的水平。3.2统计学分析采用Excel 2007建立数据库,SPSS 16.0进行统计分析,正态分布定量资料采用均数标准差进行描述,组间比较采用t检验或方差分析。定性资料采用构成比或频率进行描述,组间比较使用χ2检验。对于IMT值的以高于平均IMT值定义为“高”。为了确定独立的风险因素和高IMT的优势比（OR）,置信区间（cis）设为95%,采用多元逻辑回归模型,包括mi R-UL112-3p阳性率、HCMV Ig G滴度、Framingham评分以及IL-1β含量的对数、TNF-α含量的对数和IL-6含量的对数,单变量分析P<0.05,以确保没有显着的多重共线性。利用单一的线性单变量相关（Pearson相关系数）和逐步多变量回归分析来评价抗HCMV Ig G抗体滴度和其它变量的值之间关系。以P<0.05为差异有统计学意义。4研究结果共458名参与者被纳入研究,其中247人（53.9%）被指定为高（IMT）组。多变量logistic回归分析显示高IMT的四个独立危险因素分别是mi R-UL112-3p阳性（OR 1.05,95%CI 1.01-1.07;P=0.004）,抗HCMV抗体滴度高（OR 1.04,95%CI 1.01-1.06;P=0.003）,Framingham评分高（OR1.14,95%CI 1.02-1.27;P=0.018）,高IL-1β含量（OR 2.96,95%CI 1.26-6.97;P=0.013）。多变量相关性分析显示mi R-UL112-3p阳性率与最大IMT（r=0.328,P<0.001）、游离T4水平（r=0.247,P=0.032）和对数（TNF-α）（r=0.509,P<0.001）显着正相关。5研究结论本研究首次评估了颈动脉粥样硬化与亚洲人群中mi R-UL112-3p阳性率之间的相关性。研究结果表明HCMV与动脉粥样硬化存在相关性。第二部分HCMV通过MMP-2促进内皮-间质转化后脐静脉内皮细胞中的TGF-β1活化1研究背景HCMV属于疱疹病毒β亚科（β-herpesvirus）,为双链DNA病毒。世界范围内HCMV感染非常普遍,在成年前大部分人群均已感染,一旦感染病毒将终身存在于宿主体内。现已发现HCMV与多种心血管疾病,如动脉粥样硬化（AS）、冠心病和高血压存在联系,此外HCMV感染还与血管内皮细胞功能障碍有关。血管内皮细胞能够参与心血管疾病的多种生理和病理过程。内皮功能障碍以及与其相关的心血管疾病是由于内皮细胞间质转化（End MT）引起的。在End MT过程中,内皮细胞（ECs）失去特异性血管内皮标记物如血管内皮钙粘蛋白（VE-cadherin）和白细胞分化抗原31（CD31）,获得间质细胞标志物α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、成纤维细胞特异性蛋白1（角蛋白）和纤维连接蛋白,获得迁移性、侵袭性和增殖性表型。End MT的发生受到多种细胞因子的调节,其中TGF-β1（Transforming growth factor-β1）是End MT发生的关键细胞因子,同时也是血管病理生理过程中重要的细胞因子。TGF-β1的表达水平升高能够促进心血管疾病的发生,如引起肺动脉高压（PAH）和动脉粥样硬化,阻断TGF-β1的表达可以抑制PAH过程和不稳定AS斑块形成。在人成纤维细胞中HCMV感染5h后即可由HCMV IE基因激活TGF-β1启动子,使TGF-β1的表达量提高4倍。此外,TGF-β1可以被蛋白酶（plasmin）、金属蛋白酶（MMPs）、血小板反应蛋白-1（TSP-1）、αvβ6和αvβ8激活,由无活性状态转变为高活性状态。因此,我们推测HCMV感染可能引起血管内皮细胞中TGF-β1表达水平提高或激活潜伏的TGF-β1,使得血管内皮细胞出现End MT,参与动脉粥样硬化的发生。2研究目的观察HCMV感染对血管内皮细胞End MT的影响,讨论HCMV感染参与动脉粥样硬化发生和进展的可能分子机制。3研究方法3.1细胞和病毒培养脐静脉内皮细胞（Human Umbilical vein endothelial cells,HUVEC）用含有BFGF（20 ng/ml）、EFG（10 ng/ml）和人血浆纤连蛋白（10μg/ml）的Human Endothelial-SFM（Life Technologies,Carlsbad CA,USA）无血清培养基进行培养。HELF和水貂肺上皮细胞用含10%胎牛血清（Life Technologies,Carlsbad CA,USA）的DMEM培养基（Life Technologies,Carlsbad CA,USA）培养。HCMV TR株病毒在HELF细胞上传代培养,将病毒培养物上清通过4℃,16000×g离心2h,用Human Endothelial-SFM培养液重悬病毒,并分装冻存于-80℃。对于紫外线灭活病毒,将病毒置于无菌交联小室（Bio-Rad,Hercules CA,USA）中用150 m J的紫外线照射。3.2病毒滴度检测在96孔细胞培养板中每孔加入2.5×104个HELF培养过夜;次日,每孔加入100μl稀释后的病毒悬液,在37℃,5%CO2培养箱中培养过夜;次日,弃去培养液,用PBS洗涤3次,每孔加入无水乙醇50μl室温固定20min,弃去无水乙醇,立即用PBS水化15min;用PBS洗涤3次,每孔加入20μl稀释好的HCMV IE单克隆抗体,室温孵育2h;用PBS洗涤3次,每孔加入20μl稀释好的山羊抗小鼠Ig G-FITC,室温孵育1h;用PBS洗涤3次,每孔加入用PBS配制的70%甘油20μl,于倒置荧光显微镜下观察。根据以下公式计算感染单位（in infectious units/ml）),IU/ml=IE阳性信号数×10×1×稀释倍数。3.3间接免疫荧光细胞爬片至盖玻片上,按照MOI=1接种HCMV TR,加入或不加入ra TGF-β1孵育5d或48h,用4%的多聚甲醛固定,再于0.1%的Triton X-100透化。向细胞中加入一抗4℃孵育过夜,洗涤,与Alexa Fluor 488或Alexa Fluor 594标记的二抗室温孵育1h,加入Alexa Fluor 488标记的鬼笔环肽和4’,6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）,或单独使用DAPI室温孵育15min,洗涤后封片,在荧光显微镜（Olympus Fluoview BX51,Center Valley PA）下观察。3.4蛋白质印迹法（Western Blot）裂解细胞,取30μg总蛋白用的10%的SDS-PAGE胶进行电泳,使用半干式转膜仪（Bio-Rad）转移至PVDF膜上。将膜置于5%脱脂奶粉溶液中室温封闭2h,加入适当稀释的一抗4°C孵育过夜,洗涤后加入适当稀释的辣根过氧化物酶（HRP）标记二抗室温孵育1h。将膜洗涤3次后在膜上涂布ECL发光液,在化学发光成像仪上观察结果。3.5 RNA提取、逆转录和荧光定量PCR检测收集细胞,用RNeasy kit提取总RNA,使用RT2 First Strand Kit将RNA反转录成c DNA,所有操作按照说明书进行。通过荧光定量PCR检测目的基因的表达水平,以18S RNA作为内参进行标化。3.6 TGF-β1含量检测分别使用水貂肺上皮细胞报告基因生物测定法和ELISA试剂盒测定细胞培养上清中总TGF-β1和活化TGF-β1的含量。3.7免疫共沉淀用预冷含蛋白酶抑制剂的RIPA裂解液裂解细胞,加入MMP-2抗体,4℃孵育过夜,再与protein A-agarose孵育,用RIPA裂解液洗涤并重悬,加入SDS-PAGE上样缓冲液,煮沸,用8%的SDS-PAGE胶进行电泳,保留免疫共沉淀前的细胞裂解液作为对照。使用TIMP-2,MT1-MMP和MT3-MMP分别对免疫共沉淀前、后的细胞裂解液进行Western blot检测。3.8 sh RNA转染将MMP-2 sh RNA及其对照质粒通过Amaxa cell line nucleofector Kit V转染HUVEC细胞,24h后在荧光显微镜下观察到细胞出现明显的绿色荧光时,即可判定为转染成功。转染步骤参考试剂盒说明书进行。3.9统计学分析所有分析在Prism 5.0软件上进行。使用Student T test和one-way analysis of variance（ANOVA）比较不同组间差异,以P<0.05表示差异有显着性。4.研究结果1)HCMV可以在HUVEC细胞中增殖但不受ra TGF-β1的影响;2)HCMV能够感染被TGF-β1诱导发生EndMT的HUEVC;3)HCMV可以诱导发生EndMT的HUEVC细胞中TGF-β1活化;4)细胞中新合成活化TGF-β1的量与TGF-β1及HCMV的感染量呈正相关;5)MMP-2参与了HCMV感染引起发生EndMT的血管内皮细胞上调活化TGF-β1。5研究结论在本研究中我们发现感染HCMV的脐静脉内皮细胞与未感染细胞一样,在经过TGF-β1处理后出现End MT相关的形态和基因表达变化。感染HCMV的HUEVC细胞,经TGF-β1处理后,可以通过激活MMP-2活化细胞外潜伏状态的TGF-β1。HCMV感染不会阻止或减少TGF-β1诱导的End MT,相反可以上调发生End MT的细胞中大量纤维化分子的表达,这可能是HCMV影响动脉粥样硬化发生发展的分子机制之一。
金香兰[4]（2020）在《二肽基肽酶-4在慢性应激性血栓形成中的作用及机制研究》文中提出目的 慢性应激（心理压力）作为心血管疾病的重要危险因素,严重危害人类的身心健康。尤其是长期暴露于慢性应激状态下,血栓性CCVD的发生率逐年攀升,日益被受重视。动脉血栓形成是局部凝血系统功能亢进的一种病理生理反应,主要与血管性血友病因子（vWF）/含Ⅰ型血小板反应蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶（ADAMTS13）失衡密切相关。另外,二肽基肽酶-4（DPP-4）是一种丝氨酸蛋白酶,主要参与代谢性/炎症性疾病的发生、发展。最近,我们观察到慢性应激可增加血浆DPP-4活性水平并引起一系列病理生理变化,如动脉粥样硬化、糖尿病、血栓前状态等,但是DPP-4在慢性应激性血栓形成中的作用机制尚未明确。因此,本研究通过建立慢性制动应激模型和FeCl3诱导的血栓模型,探讨DPP-4在慢性应激相关血栓形成中的作用机制。聚焦探讨慢性应激负荷下激活的DPP-4,通过参与氧化应激/炎症反应,使PAI-1增多、vWF/ADAMTS13失衡,从而促进动脉内皮细胞的损伤及动脉血栓形成的作用机制,为今后应激相关血栓性CCVD的防治工作提供新的治疗靶点及实验依据。方法实验1:观察慢性制动束缚应激对小鼠颈动脉血栓形成的影响将选取6周龄大小雄性野生型小鼠,随机分为应激血栓模型组（Stress组,n=12）与非应激血栓模型组（Non-stress组,n=12）。去应激饲养2周后（8周龄）,建立慢性制动束缚应激模型。Stress组小鼠放入固定应激模型设备,禁止进食和饮水,4小时/天,一次/日,连续14天。Non-stress组小鼠作为对照组,未进行任何处理。慢性制动束缚应激模型第15天,腹腔内注射戊巴比妥进行麻醉后,两组均建立FeCl3的左颈总动脉血栓形成模型（15min）。两组小鼠均采集心脏血液、腹股沟区皮下脂肪和颈动脉组织进行以下实验:①观察小鼠体重变化;②分析颈动脉内形成血栓重量和长度;③进行颈动脉HE染色和CD31免疫组化染色,观察慢性应激对颈动脉血栓形成面积的影响及颈动脉病变区内皮损伤程度;④化学发光法测定血浆中DPP-4活性水平;⑤酶联免疫吸附试验测定血浆中PAI-1、vWF和ADAMTS13的水平;⑥应用实时PCR技术对颈动脉组织和脂肪组织的目标基因PAI-1、ADAMTS13、NADPH氧化酶组分（p22phox、gp91phox、p47phox和p67phox）、ICAM-1、VCAM-1、MCP-1、TNF-α、IL-1β、基质金属蛋白酶（MMP-2、MMP-9）、MMP 组织抑制剂（TIMP-1、TIMP-2）,组织蛋白酶（Cats、Catk）等进行定量分析;⑦免疫蛋白印迹法测定颈动脉组织目标蛋白（gp91phox、eNOS、Catalase、SOD-1、SOD-2）表达;实验2:探讨DPP-4抑制剂对慢性应激小鼠由FeCl3诱导血栓形成的影响将小鼠随机分为应激血栓模型组（Stress组）与应激血栓模型+阿格列汀组（S-Ana组）。两组均建立慢性制动束缚应激模型（方法同实验1）同时,S-Ana组小鼠每天灌胃阿格列汀（DPP-4抑制剂）30mg/kg/次,两次/日,持续14天,Stress组小鼠作为对照组用蒸馏水处理。应激负荷第15天,两组小鼠均建立由FeCl3导颈动脉血栓形成模型,进行实验（方法同实验1）。实验3:观察H2O2诱导氧化应激对HUVECs的损伤作用。将HUVECs接种到6孔板培养皿中培养24小时。无血清EBM-2中过夜后,不同浓度H2O2（0μM、200μM 和 400μM）导氧化应激,RT-PCR 技术检测 eNOS、VCAM-1、ICAM-1 和 MCP-1、MMP-2、MMP-9、gp91phox、p22phox等目标基因表达水平。实验4:观察DPP-4抑制剂对H2O2诱导氧化应激的HUVECs保护作用。将以三个不同浓度阿格列汀(0μM、10μM和30μM预处理HUVECs30分钟,再用400μM H2O2 处理 24 小时,使用 RT-PCR技术检测eNOS、VCAM-1、ICAM-1、CatK、CatS、MCP-1、gp91phox和p22phox等基因表达水平。结果1、慢性制动应激促进小鼠颈动脉由FeCl3诱导血栓的形成①Stress组小鼠的体重低于Non-stress组小鼠。②与Non-stress组相比,Stress组小鼠颈动脉血栓的重量显着增高,并且血栓的长度明显增加。③HE染色显示Stress组小鼠颈动脉血栓面积明显增加,在血栓形成颈动脉病变区域CD31+内皮细胞数量显着减少。④Stress组小鼠血浆DPP-4活性水平显着增高,ELISA结果显示Stress组小鼠血浆PAI-1、vWF水平显着增高,而ADAMTS13 水平显着降低。⑤PCR结果显示Stress组小鼠FeCl3诱导血栓形成部位的颈动脉内目标基因包括ICAM-1、VCAM-1和MCP-1、p22phox、p47phox、p67phox和gp91phox水平明显增高,蛋白水解相关基因包括CatK、CatS、MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2和PAI-1 mRNA水平显着增高,而eNOS的mRNA表达水平显着降低;Stress组小鼠皮下脂肪组织中PAI-1和氧化应激相关基因p22phox、gp91phox及炎症相关基因包括TNF-α、IL-1β、MCP-1、ICAM-1、VCAM-1的mRNA表达水平显着增加。⑥免疫蛋白印迹结果显示Stress组颈动脉中gp91phox蛋白表达显着增多,eNOS、Catalase、SOD-1、SOD-2蛋白表达显着减少。⑦Stress组小鼠血液白细胞、中性粒细胞和血小板计数明显增多。2、DPP-4抑制剂可改善慢性应激小鼠动脉由FeCl3诱导的血栓形成①DPP-4抑制剂阿格列汀预处理可显着降低S-Ana组小鼠血栓重量,并血栓长度明显短于Stress组小鼠。②S-Ana组小鼠颈动脉血栓形成病变区域内CD31+内皮细胞数量显着多于对照组,并颈动脉血栓形成面积明显减小,同时S-Ana组小鼠血液白细胞数量显着降低,但S-Ana组小鼠的体重没有明显变化。③ELISA结果显示阿格列汀明显降低S-Ana组小鼠血浆DPP-4活性和PAI-1、vWF水平,并提高ADAMTS13水平。④阿格列汀预处理后S-Ana组小鼠颈动脉组织 ICAM-1、VCAM-1 和 MCP-1、P22phox、P47phox、p67phox和gp91phox 的 mRNA表达显着降低,同时 CatS、Catk、MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2 和 PAI-1mRNA 表达显着降低,而eNOS mRNA表达显着增高。⑤可格列汀明显降低S-Ana组小鼠颈动脉gp91phox蛋白表达,并增加eNOS、Catalase、SOD-1、SOD-2蛋白表达。⑥S-Ana组小鼠皮下脂肪组织 PAI-1、P22phox、gp91phox、TNF-α IL-1β、MCP-1、ICAM-1 和 VCAM-1 的 mRNA 表达水显着降低平。3、H2O2诱导氧化应激对HUVECs的损伤作用及DPP-4抑制剂对氧化应激的保护作用H2O2以剂量依赖性降低HUVECs中ADAMTS13和eNOS的mRNA表达水平。相反,以剂量依赖性增加炎症趋化因子（ICAM-1、VCAM-1和MCP-1）和蛋白水解酶（MMP-2、MMP-9、CatS、Catk）的mRNA 表达水平。阿格列汀明显改善H2O2对HUVECs的损伤作用,以剂量依赖性提高ADAMTS13和eNOS mRNA表达,同时显着抑制了 ICAM-1、VCAM-1、MCP-1、CatS、Catk 的 mRNA 表达水平。结论1.慢性应激负荷下血浆DPP-4被激活,介导颈动脉组织内皮氧化应激和炎症反应及内皮细胞损伤,使蛋白水解增多和vWF/ADAMTS13失衡,从而促进血栓形成。2.慢性应激所致DPP-4的激活,介导皮下脂肪组织氧化应激和炎症反应,使脂肪组织释放PAI-1,从而促进血栓形成。3.阿格列汀可抑制慢性应激小鼠DPP-4活性,通过抑制颈动脉组织和脂肪组织的氧化应激和炎症反应,减轻颈动脉内皮损伤、改善vWF/ADAMTS13失衡及PAI-1高表达,从而抑制应激性血栓的形成。4、阿格列汀可改善H2O2诱导氧化应激对HUVECs的损伤作用提示DPP-4可成为应激相关血栓性心血管事件的新的生物标志物及防治慢性心理应激相关血栓性心血管疾病的新的治疗靶点。
李明[5]（2020）在《血脂参数与血管性勃起功能障碍的临床研究》文中研究表明勃起功能障碍（erectile dysfunction,ED）是指阴茎持续或反复不能达到和（或）维持足够阴茎勃起以完成满意的性生活,是男性最常见的性功能障碍疾病之一。以往研究表明,ED的发病率正在逐步升高,预计到2025年,全球将会约3.22亿的男性受此疾病困扰。随着ED患者数量的持续增多,ED越来越受到泌尿男科医生的重视。勃起功能障碍的病因复杂,涉及神经、内分泌、血管、心理因素、先天发育等各个方面,根据其发病机制,临床上ED可以分为三类,即,心理性勃起功能障碍、器质性勃起功能障碍,混合型勃起功能障碍（器质性合并心理性）。其中器质性勃起功能障碍发病率占总勃起功能障碍的一半以上。因阴茎海绵窦实为一张特殊的血管网,决定着阴茎的充血状态,故血管因素在器质性勃起功能障碍中起着至关重要的作用。根据血管性勃起功能障碍的发病原因,将血管性勃起功能障碍又分为动脉性勃起功能障碍,静脉性勃起功能障碍和混合性勃起功能障碍。其中,动脉性勃起功能障碍最为常见。先前研究表明,阴茎动脉血管内皮功能障碍及动脉粥样硬化是动脉性勃起功能障碍的主要原因。血脂,包括总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL）、和高密度脂蛋白（HDL）等,影响着动脉粥样硬化和内皮功能障碍发生发展,在心血管疾病（CVD）中起着至关重要的作用。在脂质渗入学说中,LDL-C为动脉粥样硬化及内皮功能障碍发病机制的核心,防治LDL-C的异常增高以减缓动脉粥样硬化的发生发展已得到公认。然而,基于LDL-C的心血管风险评估和脂质管理尚未充分考虑其他脂质的作用。许多研究表明,其他脂质,例如HDL-C,因其对内皮功能障碍和动脉粥样硬化的重要作用与CVD独立相关。近年来,人们对TC/HDL,TG/HDL,LDL/HDL等脂质比值的组合与心血管疾病之间的关系进行了多项研究与评估,以寻求对心血管事件更好的风险预测能力。鉴于动脉性勃起功能障碍与心血管疾病的发病机制相同,我们预测这些脂质参数也可能与动脉性勃起功能障碍有关。在对ED以往的研究中,发现ED的发病率与年龄显着相关,70岁以上的老人发病率高达50%,在40岁以下发病率较低。然而最新研究表明,ED的发病率在40岁以下的人群中有明显增长的趋势,并且这种趋势增长的原因可能是以往对年轻患者的漏报而被低估有关。血脂紊乱与男性勃起功能障碍的关系先前已有研究,但此前的研究多集中在老年患者且已经出现心血管疾病时其勃起功能与血脂的关系。亚临床内皮功能障碍与高血压、总胆固醇甘油三酯、颈动脉内膜厚度等心血管危险因素密切相关,是勃起功能障碍的重要危险因素。近来研究人员以40岁以下ED患者与非ED健康对照组为研究对象,比较两组血压、总胆固醇、甘油三酯、颈动脉内膜厚度等心血管危险因素相关指标,结果显示ED组心血管危险因素相关指标明显高于对照组,但其相关指标皆在正常参考区间。这项研究表明,许多患有ED的青年患者虽然没有明显的心血管疾病,但仍然具有许多亚临床心血管危险因素使他们更容易产生ED。与此同时,血管性ED的发病机制及其与其他心血管疾病的潜在关系使我们推测相关血脂参数可能与血管性ED的发生发展有关,因此,本研究以青年患者为研究对象,进一步明确青年患者中血脂参数与动、静脉性ED之间的关系,并进一步研究血脂参数预测相关青年男性血管性勃起功能障碍的能力。研究目的:探讨血脂参数,包括 TC,TG,LDL-C,HDL-C,non-HDL-C,TC/HDL,TG/HDL 和 LDL/HDL 在阴茎血管性勃起功能障碍发病中的作用,探讨血脂参数与血管性勃起功能障碍的相关性及血脂参数对血管性勃起功能障碍的预测能力,以求进一步优化对血管性勃起功能障碍的鉴别诊断工具,减少药物勃起试验及阴茎海绵体造影对患者的造成创伤及恐惧,并为动脉性勃起功能障碍的降脂治疗提供理论依据。材料和方法:1.研究对象及排除标准选取2016年3月至2019年3月期间因自觉勃起功能障碍来诊的320名患者为研究对象。具有勃起功能障碍的典型症状,且此症状一般应持续6个月方可入组。以国际勃起功能评分表（International Index of Erectile dysfunction IIEF-5）作为诊断工具判定入组患者是否存在勃起功能障碍,评分表总分25分,小于或等于21分的患者被诊断为阴茎勃起功能障碍。于相同时间段,随机抽取在山东大学第二医院体检中心行健康查体的60名健康志愿者为对照组,要求健康志愿者已婚且性生活和谐的健康男性（IIEF-5>21分）。为最大程度避免亚临床心血管疾病作用对所有参与者血脂的影响,年龄20-50岁限定为入组标准。。如有以下情况者应给予排除:具有糖尿病病史或既往糖耐量减低、既往代谢性疾病病史如代谢综合征、恶性肿瘤病史、酒精依赖症、炎症、生殖器外伤或手术史、骨盆外伤或手术史、脊髓神经外伤史或手术史、心脑血管疾病病史、血液病病史、精神疾病病史、性激素紊乱如高催乳素血症、性腺功能减退等、神经系统疾病病史、阴茎硬结症、肝功能紊乱,以及已知影响血脂的药物的使用。这项研究得到了山东大学第二医院伦理委员会的批准,每个参与者在参与研究之前都签署了正式的知情同意书。2.实验设计通过门诊筛查勃起功能国际问卷评分（IIEF-5）≤21分的患者,结合其临床病史、症状,诊断为260例勃起功能障碍患者,所有参与者均进行男科常规查体,于山东大学第二医院检验医学中心行性激素、血脂等相关指标化验。对ED患者行夜间阴茎勃起试验（NPT）,区分心理性ED和器质性ED,216名患者诊断为器质性ED,进一步行神经电生理检查未见异常,排除神经源性ED,216患者接着行pDUS检查,疲软状态下记录阴茎背动脉初始血流信号,注射药物后,记录患者5-Min动脉收缩期最大血流峰值（5-Min PSV）、5-Min舒张末期血流速度（5-Min EDV）、10-Min PSV、10-Min EDV,经pDUS检查,216名患者分为三组,动脉性ED组（n=87）、静脉性ED组（n=45）、混合性及非血管性ED组（n=84）。3.数据收集全面了解所有参与者性生活史、既往病史及心理社会史,汇总数据包括国际勃起功能评分表得分,年龄,吸烟史,饮酒史,身高,体重,体重指数,收缩压,舒张压,收集静脉血（包括测空腹血糖,性激素指标,LDL-C,HDL-C,TC,TG）,NPT试验数据,pDUS检查数据。4.统计分析使用SPSS23.0统计软件（SPSS Inc,Chicago,IL,USA）对数据分析以确定血脂参数与血管性ED之间的相关性分析及测定血脂参数对血管性ED的预测能力。结果:1.不同分组人口统计学特征及性激素的比较。只有FSH在三组样本在之间具有显着性差异（P<0.05）,经过多重比较,动脉性ED组和静脉性ED组之间FSH差异无统计学意义（P>0.05）,对照组中FSH高于血管性ED组,差异具有统计学意义。三组样本在人口统计学及其他性激素指标中未见明显差异。2.不同分组血脂参数的比较。动脉性ED组较静脉性ED组及对照组TC/HDL,LDL/HDL,LDL-C高,HDL-C较静脉性勃起功能患者及健康志愿者低,差异具有统计学意义（均P<0.05）,静脉性勃起功能患者与健康志愿者各指标无明显差异（均P>0.05）。3.动脉性ED组和静脉性ED组中血脂参数与阴茎血流信号的关系。在动脉性勃起功能障碍组中患者的动脉性ED的诊断性指标10-Min阴茎背动脉收缩期最大流速（PSV）与 TC/HDL,LDL/HDL,LDL-C 之间显着负相关（r=-0.347,P<0.01 VS r=-0.487 P<0.01 VS r=-0.330,P<0.01）,与 HDL-C 呈显着正相关（r=0.471,P<0.01）。在静脉性ED组患者中阴茎背动脉收缩期最大流速（PSV）及舒张末期流速（EDV）与血脂参数与均无明显的相关关系（均P>0.05）。4.血脂参数与动脉性勃起功能障碍疾病之间的关系.血脂参数用于预测动脉性勃起功能障碍的ROC 曲线分析结果:T C/HDL,LDL/HDL,LDL-C,HDL-C检测诊断动脉性勃起功能障碍的AUC分别为0.720,0.737,0.641,0.791,四项指标的最佳截点为 TC/HDL≥3.73,LDL/HDL≥2.01,LDL-C≥2.41mmol/L,HDL-C≤1.25mmol/L。5.血脂参数对动脉性ED阴茎血流信号的多元逐步回归分析以各血脂参数为自变量,10-Min PSV为因变量,控制年龄,吸烟,饮酒,体重指数,空腹血糖,收缩压和性激素等混杂变量后行多元逐步回归分析,结果显示,LDL/HDL,HDL-C对10-Min PSV有明显的预测作用。结论:LDL/HDL和HDL-C可能是预测和诊断动脉性勃起功能障碍的有力指标。对于动脉性勃起功能障碍患者,可考虑行降脂治疗。
吴祖祥[6]（2020）在《糖尿病患者手指复温时间与下肢动脉粥样硬化的相关性研究》文中研究表明研究背景:外周动脉疾病（Peripheral artery disease,PAD）是指由于下肢动脉粥样硬化引起动脉管腔狭窄或闭塞,导致相应供血区域的低灌注,进而引起患者下肢感觉异常、部分活动受限甚至局部皮肤溃烂等,给患者的正常生活造成巨大影响。糖尿病（diabetes mellitus,DM）合并PAD的患者预后差,且与心血管疾病的发病率及死亡率的增加密切相关。PAD常常被低估,尽管可以通过超声检查和踝臂指数（ankle brachial index,ABI）进行早期诊断和筛查。近年来研究表明内皮功能障碍是糖尿病及外周动脉疾病共同的病理生理特征。作为一种新型的数字热监测（digital thermal monitoring,DTM）评估手段,手指冷却实验（finger cooling test,FCT）可用于评价内皮功能,可能提供一定的诊断价值。研究目的:在糖尿病患者中探讨手指冷却实验复温时间（rewarming time,RT）是否与下肢动脉斑块相关以及RT的相关影响因素。研究方法:选取154名糖尿病患者,应用彩色多普勒超声对髂、股、腘动静脉斑块进行评估。同时,以右手食指在10℃水中浸没60秒作为应激状态,进行手指冷试验（FCT）以评估内皮功能。根据FCT复温曲线,采集初始温度T0、手指瞬时最低温度T1、降温幅度DA（T0-T1）及RT。根据斑块存在与否分为两组:非斑块组（74例）、斑块组（80例）。并收集患者的年龄、性别、BMI及糖尿病病程等一般临床资料。研究结果:在糖尿病患者中,斑块组年龄、糖尿病病程均高于非斑块组。同时,与非斑块组相比,斑块组RT延长。多元logistics分析表明RT是下肢动脉斑块的独立阳性预测因子,即使在调整性别、年龄、BMI、糖尿病病程、高血压、降糖药、降脂药等混杂因素后,与rt<5min相比,5min≤rt<10min及rt≥10min出现下肢动脉斑块的风险分别是其的4.36倍（OR=4.36,95%CI（1.62,11.77）,P=0.004）和4.85倍（OR=4.85,95%CI（1.77,13.29）,P=0.002）。Spearman相关分析表明RT与年龄、下肢动脉斑块、BMI、降糖药、LDL-C、e GFR、Cr、T0及T1具有相关性。多元线性回归分析发现下肢动脉斑块与RT独立正相关（r=0.31,p=0.000）,而降糖药、LDL-C、T1是RT独立阴性预测因子（r=-0.17,p=0.013;r=-0.16,p=0.019;r=-0.34,p=0.000）。研究结论:在糖尿病患者中RT越长,下肢动脉动脉斑块存在的可能性越高。并且在糖尿病患者中,合并PAD的患者中存在更加严重的内皮功能障碍。下肢动脉斑块、降糖药、LDL-C及T1是RT的独立影响因素。
何月华[7]（2020）在《有氧运动对衰老大鼠血管内皮功能和mircoRNAs调控的影响》文中研究说明研究目的:随着年龄增长,机体的衰老血管伴随着血管功能障碍、炎症增加等,而通过有氧运动可以改善血管衰老所引发的上述问题。本研究通过对衰老大鼠进行有氧运动,利用RNA-Seq技术筛选血管衰老和有氧运动改善血管衰老差异表达miRNA的通路,分析有氧运动对衰老大鼠血清转录组的相关miRNA的差异表达,以及该差异表达对血管功能的影响,为有氧运动改善血管功能提供理论依据。研究方法:选用20月龄无特定病原体（Specific pathogen Free,SPF）级健康老龄大鼠Sprague-Dawley（SD）30只,选用78周龄SPF级健康雄性SD大鼠15只。将30只老龄大鼠随机分为2组,每组15只。分别为老年安静组（Old组）、老年运动组（Old+ET组）;将15只年轻大鼠为年轻安静组（Young组）。Old+ET组15只大鼠,进行12周跑台运动,运动方案为:坡度0,速度为15 m/min,60min/d,5d/w。大鼠经腹主动脉取血后,通过高通量测序,对三组转录本进行差异分析获得差异表达miRNA,并对差异表达miRNA进行深层次的生物信息学分析。根据分析结果对胸主动脉进行研究,显微镜下仔细分离胸主动脉,制成离体血管环进行张力测定,检测各组胸主动脉内皮功能。取全血后,分离血清,用ELISA实验检测各组血清相关血管功能因子的含量。研究结果:（1）三组miRNA差异表达分析,共筛选出67个差异表达miRNA,分别是:let-7c-1-3p、miR-17-5p、miR-130b-3p、miR-130b-5p、miR-140-5p、miR-143-3p、miR-29c-5p、miR-146a-3p、miR-181a-1-3p、miR-181c-3p、miR-1839-5p、miR-191a-sp、miR-145-3p、miR-212-3p、miR-296-3p、miR-125b-5p、miR-298-5、miR-29b-3p、miR-29c-3p、miR-339-3p、miR-101a-3p、miR-351-5p、miR-363-3p、miR-370-3p、miR-449a-5p、miR-450a-5p、miR-450b-3p、miR-452-5p、miR-335、miR-455-3p、miR-5132-5p、miR-532-3p、miR-3064-5p、miR-6324、miR-872-3p、novelmiR-11、novel-miR-122、novel-miR-266、novel-miR-282、novel-miR-305、novelmiR-309、novel-miR-322、novel-miR-344、novel-miR-38、novel-miR-392、novelmiR-402、novel-miR-422、novel-miR-519、novel-miR-601、novel-miR-631、novelmiR-637、novel-miR-654、novel-miR-663、novel-miR-689、novel-miR-692、novelmiR-75、novel-miR-780、novel-miR-785、novel-miR-813、novel-miR-870、novelmiR-884、novel-miR-90、novel-miR-901、novel-miR-907、novel-miR-926、novelmiR-930、novel-miR-1065。这些差异表达miRNA与细胞凋亡、TNF通路和细胞粘附分子等生物学过程有关。（2）在离体血管环实验,与Young组相比,衰老大鼠中乙酰胆碱（Acetylcholine,ACh）诱导的内皮依赖性舒张明显减弱（P<0.01）,然而与Old组大鼠相比,在有氧运动训练后,Old+ET组大鼠中ACh诱导的内皮依赖性舒张明显增加（P<0.01）。（3）在大鼠血清检测中,与Young组相比,Old、Old+ET组血清中肿瘤坏死因子-α（Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α）、血管细胞粘附分子-1（Vascular Cell Adhesion Molecule 1,VCAM-1）浓度显着增加（P<0.01）,血管内皮生长因子（Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF）、一氧化氮（Nitric Oxide,NO）浓度显着减少（P<0.01）;与Old组相比,Old+ET组血清中TNF-α、VCAM-1浓度显着减少（P<0.05）,内皮性一氧化氮合酶（Endothelial Nitric Oxide Synthase,eNOS）、VEGF、NO浓度显着增加（P<0.05）。结论:miR-351-5p和miR-455-3p参与血管衰老调控;衰老大鼠内皮功能下降,可能与eNOS、NO、VEGF减少和炎症反应增加有关;通过有氧运动后,miR-351-5p表达上调,抑制了TNF-α和VCAM-1的表达,减少了血管炎症的产生,以及miR-455-3p调节eNOS表达,增加NO浓度,可能改善衰老引起的血管内皮依赖性舒张功能下降。
伟人悦[8]（2020）在《猪诱导多能性干细胞定向分化为血管内皮细胞的研究》文中研究说明心血管疾病（cardiovascular disease,CVD）是目前全球范围内导致患者死亡的最主要因素之一。冠状动脉类疾病（coronary artery disease,CAD）是心血管疾病中的一种,其致病机理为:由于血管内皮功能障碍引发血管损伤或血管功能丧失,造成心脏的血液灌注减少,最终引发心肌缺血甚至心肌梗塞。但是传统的药物针对该类疾病的治疗具有很大局限性,因此细胞移植治疗成为相关医疗及科研人员的关注点。胚胎干细胞（embryo stem cell,ESCs）和诱导多能性干细胞（induced pluripotent stem cell,i PSCs）是细胞移植治疗的种子细胞来源。但是ESCs的临床应用涉及到医学伦理问题和异体移植后的免疫排斥风险,i PSCs的应用将为心血管疾病的治疗提供便利。目前,很多研究人员对i PSCs向血管内皮细胞的定向分化进行了探索,相关研究主要集中在小鼠和人上。猪作为一种重要的农用家畜,其器官大小及生理学特征与人体具有很大的相似性,猪的寿命又相对较长,因而被认为是研究人类心血管及代谢性疾病的良好动物模型。对于猪诱导多能性干细胞的建系、培养及定向分化为血管内皮细胞体系的研究将为创建猪心血管疾病模型提供保障。目前,很多研究组通过不同的方法建立了猪i PS细胞系,但是关于其向血管内皮细胞定向分化的研究少之又少。2013年,Gu等首次报道了将猪脂肪间充质来源的i PSCs诱导分化为内皮细胞的方法,但其采用了周期较长且效率较低的拟胚体诱导分化途径,培养液成分也相对复杂。针对上述问题,我们进行了以下四部分研究:（1）使用无血清单层细胞诱导的方式对四种猪多能性干细胞系（猪胚胎来源的干细胞系Penk6和Pe WCHX,猪诱导多能性干细胞系Pilw4和M10）进行诱导分化,并检测细胞分化前期谱系特异性基因的表达趋势,从而筛选出中胚层分化潜能最高的猪多能性干细胞系;（2）使用不同的细胞因子或化学小分子组合对上述细胞进行诱导,筛选出促进细胞向中胚层分化的最优组合;（3）优化上述培养体系,建立一种无血清无饲养层的猪i PSCs向血管内皮细胞定向分化的诱导方法;（4）使用上述方法分别诱导人和猪的多能性干细胞向内皮细胞分化,并比较二者分化进程中的差异。研究结果表明,猪胚胎来源的Penk6和Pe WCHX细胞系在诱导分化过程中细胞形态无明显变化,猪诱导多能性干细胞M10和Pilw4在诱导分化过程中失去克隆形态并有部分细胞死亡。谱系特异性基因的表达检测结果显示,Penk6、Pe WCHX和M10细胞没有启动向原条期的分化且中胚层标记基因的表达变化无规律,Pilw4细胞的原条期、内胚层以及中胚层标记基因的表达水平均是先提高后下降,说明该细胞启动了分化进程。据此,我们选择猪诱导多能性干细胞系Pilw4进行后续实验。首先,我们使用四种前人报道的诱导人ESCs向血管内皮细胞分化的单层培养方法对pi PSCs进行定向诱导,在其中选择能够有效促进pi PSCs向中胚层分化的方法用于后续实验。接下来,我们对上述方法进行优化并研究了CHIR99201和BMP4在诱导分化前期的作用。实验根据第0至4天的不同处理方案分为6组进行:F,在第0至2天不添加CHIR99021、第3至4天添加FGF2;FB,第0至2天不添加CHIR99021、第3至4天添加FGF2和BMP4;BFB,第0至2天添加BMP4、第3至4天FGF2和BMP4;CF,在0至2天添加CHIR99201、3至4天添加FGF2;CFB,在0至2天添加CHIR99201,第3至4天添加FGF2和BMP4;CBFB,在第0至4天添加CHIR99021和BMP4,第3至4天添加FGF2和BMP4。上述6组从第5天开始处理一致:第5至7天培养液中添加VEGF和BMP4,8至10天换用商品化的内皮细胞培养液进行培养,第11天对细胞进行流式分选以及血管内皮细胞鉴定。实验结果显示,F、FB、BFB三组在诱导分化前期原条期标记基因的表达水平很低,完成诱导周期后CD31阳性细胞百分比仅为3.12%-5.16%;CF、CFB、CBFB三组在诱导分化前期原条期和内胚层标记基因的表达水平先上升后下降,中胚层标记基因表达水平持续上升,完成诱导周期后CD31阳性细胞百分比均高于12%,其中实验组CFB,CBFB的CD31阳性细胞率分别为21.3%和17.1%。以上结果表明,CHIR99201在pi PSCs向血管内皮细胞分化的前期具有促进作用,在诱导分化中期添加BMP4能够显着提高血管内皮细胞的诱导效率。此后,我们利用优化后的诱导步骤,从pi PSCs中获得了血管内皮细胞,该细胞具有与猪主动脉血管内皮细胞（AOCs）相似的形态、基因表达模式和功能特征。此外,我们使用相同的诱导步骤对人胚胎来源的干细胞进行诱导分化,结果表明人胚胎干细胞的分化效率远低于pi PSCs的分化效率,这可能与诱导过程中二者谱系基因表达模式上的差异相关。综上所述,我们建立了一种无血清的不依赖于饲养层的单层细胞诱导分化方法,可以将猪诱导多能性干细胞定向分化为具有功能的血管内皮细胞。该研究为评价大动物体内血管内皮细胞自体移植效果以及创建猪心血管疾病模型提供了可能。
杜丽根[9]（2020）在《白藜芦醇延缓氧化应激诱导的心肌及内皮细胞衰老的机制研究》文中提出目的氧化应激可诱发细胞衰老,衰老是心血管疾病新的危险因素。已有研究证实白藜芦醇在心血管的保护作用,但具体作用机制还不清楚。白藜芦醇是SIRT1促进剂,PGC-1α是一种重要的辅激活因子,两者在内皮细胞的氧化应激中的作用机理及与衰老相关蛋白p53/p21的关系,有待进一步研究。因此,本研究通过氧化应激诱导细胞衰老,加入不同浓度白藜芦醇干预,分析探讨白藜芦醇SIRT1/PGC-1α诱导的自噬作用与细胞氧化应激及衰老的关系。方法1.实验KM小鼠分正常组（NC）、D-半乳糖组（D-gal）、低、中、高剂量白藜芦醇+D-半乳糖组（L-RESV）、（M-RESV）、（H-RESV）,分离血清和心肌测定超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）水平、乳酸脱氢酶（LDH）和心肌酶（CKMB）以及测定衰老蛋白P53、p21表达量及自噬蛋白LC3、p62表达量。2.脐静脉内皮细胞加入5、10、50μmol/L白藜芦醇干预,检测细胞ROS、NO、ET-1、MDA、SOD的变化及LC3、p62、p53、p21等蛋白的表达变化。3.脐静脉内皮细胞加入10 μmol/L白藜芦醇及自噬抑制剂3-MA及SIRT1抑制剂EX-527作用1小时后,再加入100μmol/L过氧化氢作用24h,分别检测细胞活力及氧化指标及内皮功能的变化,蛋白电泳检测衰老相关指标p53、p21,自噬相关指标SIRT1、PGC-1α、LC3及p62等蛋白的表达变化。结果:1.与D-gal组比,RESV组能减少小鼠心肌组织MDA及血清LDH、CKMB含量,增加心肌SOD含量（P<0.05）,RESV通过促进自噬,下调衰老相关蛋白p53、p21蛋白（P<0.05）,其中M-RESV组作用明显。2.过氧化氢可诱导细胞衰老相关蛋白p53和p21以及细胞自噬负相关蛋白p62的上调。而在衰老细胞中,不同浓度白藜芦醇可下调p53、p21蛋白的表达（p<0.05）,同时也可上调LC3 Ⅱ/Ⅰ的比值,促进p62蛋白的降解（p<0.05）,其中10μmol/L白藜芦醇作用明显。3.10μmol/L白藜芦醇干预后,氧化应激的内皮细胞LC3蛋白增加,p62蛋白减少,SOD增加,ROS、MDA及ET-1含量减少,内皮功能NO生成增加,提示白含量芦醇能增强衰老细胞的自噬能力,减少氧化应激。而当加入3-MA时,白藜芦醇这种作用受到抑制。4.10 μmol/L白藜芦醇可提高SIRT1、PGC-1α蛋白的表达（p<0.05）,下调p53及p21蛋白量。在加入SIRT1抑制剂EX527后,SIRT1、PGC-1α、LC3蛋白表达及p62蛋白分解明显被抑制（p<0.05）,p53及p21蛋白表达水平上升（p<0.05）。结论:1.氧化应激可增加小鼠心肌和脐静脉内皮细胞p53、p21蛋白表达,白藜芦醇能通过增加自噬作用,下调皮p53、p21蛋白减少氧化应激,延缓组织细胞衰老。2.氧化应激状态下,低浓度的白藜芦醇促进心肌及内皮细胞自噬,延缓衰老;高浓度的白藜芦醇起抑制作用。3.白藜芦醇可以通过上调SIRT1/PGC-1α的水平促进细胞自噬,下调p53/p21通路改善过氧化氢诱导的脐静脉内皮细胞衰老。
王岩[10]（2020）在《SR-A1/VEGF-B反应轴在肥胖相关性高血压中的作用及其机制研究》文中进行了进一步梳理目的:心血管疾病是世界范围内引起死亡的主要原因,其发病率和死亡率仍在逐年上升。肥胖作为心血管疾病的重要危险因素,会导致心血管系统的一系列功能异常。研究指出,75%的原发性高血压患者与肥胖相关,脂肪组织被认为是调控心血管功能的重要器官,也是治疗肥胖相关性心血管疾病的关键靶点。然而目前对脂肪组织在肥胖相关性高血压中的发病学机制仍不完全清楚。管周脂肪组织（PVAT）是包绕在人体内除脑血管以外几乎所有血管周围的一种脂肪组织。肥胖时,PVAT的体积明显增大,功能发生异常。巨噬细胞是脂肪组织中含量最丰富的免疫细胞,其浸润数量与肥胖的程度呈正相关。巨噬细胞表型的改变是影响PVAT功能异常的重要原因,但具体的分子机制仍需探索。A1类清道夫受体（SR-A1）是一类主要表达在巨噬细胞膜表面的模式识别受体,参与调控巨噬细胞的多种生物学功能。我们课题组的前期研究结果表明,SR-A1能够抑制附睾脂肪组织中巨噬细胞炎症反应,拮抗肥胖诱导的胰岛素抵抗。SR-A1缺失还会明显加重肥胖相关性高血压,促进PVAT中血管内皮生长因子B（VEGF-B）表达增加。在上述研究基础上本课题拟进一步探讨SR-A1和VEGF-B在肥胖相关性高血压中的作用及其机制,并进一步探讨其对于肥胖诱导的血管功能紊乱和血压增高的治疗学意义。方法:给小鼠喂养高脂饮食诱导肥胖相关性血管功能障碍和血压增高,用免疫荧光染色和流式细胞术检测SR-A1在PVAT和主动脉中的表达定位,并通过免疫荧光实验测定造模小鼠主动脉中ICAM-1的表达。通过定量PCR、western blot和免疫荧光染色等方法检测PVAT中VEGF-B、炎症因子以及主动脉中脂肪酸转运蛋白（FATPs）和内皮脂质积聚情况等。为了研究SR-A1/VEGF-B在肥胖诱导的血管功能障碍及血压升高中的作用,我们构建了过表达VEGF-B的慢病毒。同时给予野生型小鼠和SR-A1-/-小鼠高脂饮食喂养,2周后开始持续性给予小鼠尾静脉注射过表达VEGF-B的慢病毒,并用遥测式血压监测技术监测小鼠血压,6周后收取模型检测主动脉内皮依赖性舒张功能。最后,为了探讨SR-A1/VEGF-B的在体治疗学意义,我们从高脂造模8周开始,给予野生型和SR-A1-/-小鼠腹腔注射SR-A1激动剂fucoidan,8周后监测血压,连续监测10周后收取样本,检测主动脉内皮依赖性舒张功能。结果:免疫荧光和流式结果显示,无论在普通饮食还是高脂饮食的情况下,PVAT和主动脉中的SR-A1均主要表达于巨噬细胞。高脂饮食喂养后,小鼠血压显着升高,血管舒张功能明显受损,并且PVAT中单位巨噬细胞上的SR-A1表达量明显下降。为了探究SR-A1在肥胖诱导的血管功能紊乱及血压升高中的作用,我们应用了饮食诱导的肥胖模型和自发性肥胖（ob/ob）模型,结果显示SR-A1缺失不仅加重肥胖引起的血管功能紊乱和高血压,还能增加主动脉中FATPs的表达,促进主动脉内皮脂质积聚和PVAT中巨噬细胞源性的VEGF-B的表达。体外实验证实,VEGF-B可以增加内皮细胞中FATPs的表达,促进内皮细胞脂质积聚,加重棕榈酸（PA）引起的内皮功能受损。为了进一步验证VEGF-B在肥胖诱导的血管功能障碍及血压升高的作用,我们通过慢病毒注射在体上调小鼠体内VEGF-B的表达,发现在体过表达VEGF-B可以加重肥胖引起的血压增高和血管功能紊乱,并且过表达VEGF-B可以明显消除野生型肥胖小鼠和SR-A1-/-肥胖小鼠的血压及内皮依赖性舒张功能的差异。最后,我们给予小鼠腹腔注射fucoidan在体上调SR-A1的表达,血压监测和内皮依赖性舒张功能检测的结果表明fucoidan可以阻止肥胖引起的血压增高和血管功能紊乱,且这一作用依赖于SR-A1的表达。此外,fucoidan还能抑制肥胖引起的PVAT中VEGF-B的过度表达,降低主动脉中FATPs的表达,减轻主动脉内皮脂质积聚以及PVAT中的炎症反应。结论:肥胖时PVAT中SR-A1可能通过抑制巨噬细胞VEGF-B的表达,减少VEGF-B的旁分泌作用,从而阻止脂质在血管内皮细胞中的积聚,保护内皮功能,减缓血压增高。应用fucoidan在体激活SR-A1,可以抑制VEGF-B的表达,从而对肥胖相关性高血压起到治疗作用。因此,巨噬细胞SR-A1/VEGF-B反应轴可能是防治肥胖性高血压的潜在靶标。
二、血管内皮功能与心血管疾病（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、血管内皮功能与心血管疾病（论文提纲范文）
（1）基于差异表达的LncRNA TUG1研究小陷胸加味汤治疗冠心病（痰热互结证）的作用机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 理论研究 |
| 第一章 冠心病中医病名溯源 |
| 第二章 冠心病中医发病机理 |
| 1.因虚致病 |
| 2.因实致病 |
| 3.虚实夹杂 |
| 第三章 冠心病中医治疗 |
| 1.中医辨证论治 |
| 2.中成药 |
| 3.静脉注射中药 |
| 4.中医外治法 |
| 第四章 小陷胸汤治疗冠心病的历史渊源及以小陷胸汤为基础方治疗冠心病的现代研究 |
| 1.《伤寒论》对小陷胸汤的认识 |
| 2.以小陷胸汤为基础方治疗冠心病的现代研究 |
| 第五章 现代医学对冠心病的认识 |
| 1.现代医学对冠心病的发病机制认识 |
| 2.冠心病疾病的诊断与分类 |
| 3.现代医学对冠心病的治疗 |
| 4.冠心病的预防 |
| 第六章 血管内皮功能障碍与冠心病发病的研究 |
| 1.血管内皮功能障碍参与冠状动脉粥样硬化的形成 |
| 2.血管内皮功能障碍加速冠状动脉粥样硬化的进程 |
| 3.保护血管内皮细胞,改善内皮细胞功能是防治冠心病的重要途径 |
| 第七章 血管内皮功能障碍与p38MAPK信号通路的初探 |
| 1.p38MAPK信号通路的介绍 |
| 2.p38MAPK信号通路与血管内皮功能障碍初探 |
| 第八章 LncRNA TUG1 与冠心病发病的研究 |
| 1.LncRNA TUG1 与血管内皮细胞 |
| 2.LncRNA TUG1 与血管平滑肌细胞 |
| 3.LncRNA TUG1 与免疫炎症 |
| 参考文献 |
| 第二部分 临床研究 |
| 临床研究一 小陷胸加味汤治疗冠心病(痰热互结证)的临床观察及血管内皮功能的影响 |
| 1.资料与方法 |
| 2.试验结果 |
| 3.讨论 |
| 4.结论 |
| 参考文献 |
| 临床研究二 冠心病(痰热互结证)患者外周血 LncRNA TUG1与血管内皮损伤相关性研究 |
| 1.资料与方法 |
| 2.试验结果 |
| 3.讨论 |
| 4.结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 实验研究 |
| 1.主要仪器 |
| 2.实验动物、细胞、主要试剂、试剂盒及引物设计 |
| 实验一 含药血清制备、细胞模型建立及小陷胸加味汤含药血清浓度和干预时间选择 |
| 1.含药血清的制备 |
| 2.细胞模型制备 |
| 3.小陷胸加味汤含药血清浓度和干预时间选择 |
| 4.实验分组及干预方法 |
| 实验二 RT-PCR法检测小陷胸加味汤含药血清对TNF-α诱导损伤HUVEC中 LncRNA TUG1 的影响 |
| 1.实验方法 |
| 2.统计分析 |
| 3.实验结果 |
| 4.讨论 |
| 5.结论 |
| 参考文献 |
| 实验三 Western Blot检测小陷胸加味汤含药血清对TNF-α诱导损伤HUVEC中 p38MAPK信号通路相关蛋白的影响 |
| 1.实验方法 |
| 2.统计分析 |
| 3.实验结果 |
| 4.讨论 |
| 5.结论 |
| 参考文献 |
| 实验四 差异表达的LncRNA TUG1与p38MAPK信号通路相关蛋白表达相关性分析 |
| 1.统计方法 |
| 2.结果 |
| 3.讨论 |
| 4.结论 |
| 参考文献 |
| 第四部分 综合讨论 |
| 1.本研究以小陷胸汤为基础方加味治疗冠心病(痰热互结证)的立方依据 |
| 2.对本研究细胞模型及观察指标的讨论 |
| 3.本研究结果初探 |
| 4.本研究创新性分析 |
| 5.对本研究的总体思考与展望 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 附录 |
| 附录一 |
| 综述一 中医药改善血管内皮功能治疗冠心病的研究进展 |
| 1.中药或中药提取物 |
| 2.中药复方 |
| 3.中成药 |
| 4.结语和展望 |
| 参考文献 |
| 综述二 长链非编码RNA与冠心病的研究进展 |
| 1.LncRNA的概述 |
| 2.LncRNA的生物功能 |
| 3.LncRNA在冠心病发病中的作用 |
| 4.结语和展望 |
| 参考文献 |
| 附录二 附图 |
| 附录三 博士期间发表论文情况 |
| 致谢 |
（2）五龙通络解郁方治疗冠心病稳定型心绞痛合并抑郁症的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 文献综述 |
| 综述一 冠心病合并抑郁症的西医研究进展 |
| 1 冠心病合并抑郁症的流行病学研究 |
| 2 冠心病合并抑郁症潜在发病机制 |
| 3 冠心病合并抑郁症的治疗 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 综述二 冠心病合并抑郁症的中医研究进展 |
| 1 中医对冠心病合并抑郁症的认识 |
| 2 冠心病合并抑郁症的辨证分型 |
| 3 冠心病合并抑郁症的中医治疗 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第一部分 胸痹合并情志病症的古代文献整理研究 |
| 1 研究目的 |
| 2 研究方法 |
| 2.1 研究范围 |
| 2.2 检索工具及方法 |
| 2.3 检索策略 |
| 3 检索结果 |
| 4 行文体例 |
| 5 文本类型 |
| 6 原文整理 |
| 6.1 方药治疗类 |
| 6.2 针灸治疗类 |
| 7 数据统计 |
| 7.1 药物种类分析 |
| 7.2 药物属性分析 |
| 7.3 药物气味分析 |
| 8 总结分析 |
| 8.1 病因病机 |
| 8.2 治疗方法 |
| 9 结论 |
| 10 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 五龙通络解郁方治疗冠心病稳定型心绞痛合并抑郁症的小样本探索性临床研究 |
| 临床资料与研究方法 |
| 1 研究目的 |
| 2 临床资料 |
| 3 研究方法 |
| 结果 |
| 1 纳入病例基线比较 |
| 2 疗效分析 |
| 3 安全性观察 |
| 4 结果 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 基于网络药理学五龙通络解郁方的作用靶点预测研究 |
| 1 研究目的 |
| 2 研究方法 |
| 2.1 相关平台、工具 |
| 2.2 五龙通络解郁方中化合物及其潜在靶点预测 |
| 2.3 冠心病稳定型心绞痛合并抑郁症的靶点预测 |
| 2.4 五龙通络解郁方治疗冠心病稳定型心绞痛合并抑郁症的靶点预测 |
| 2.5 蛋白质相互作用(PPI)网络构建及核心靶点筛选 |
| 2.6 基因富集分析 |
| 3 研究结果 |
| 3.1 五龙通络解郁方的成分及作用靶点 |
| 3.2 冠心病稳定型心绞痛合并抑郁症疾病靶点 |
| 3.3 五龙通络解郁方-有效活性成分-有效靶点关系图 |
| 3.4 PPI网络构建及核心靶点筛选 |
| 3.5 五龙通络解郁方主要单味药物的成分及作用靶点 |
| 3.6 五龙通络解郁方潜在作用靶点的GO分析 |
| 3.7 五龙通络解郁方潜在作用靶点的KEGG分析 |
| 4 讨论 |
| 4.1 五龙通络解郁方的主要作用靶点 |
| 4.2 五龙通络解郁方的主要作用通路 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 第四部分 实验研究 |
| 实验一 五龙通络解郁方对斑马鱼生存率的影响 |
| 1 实验材料与方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 结论 |
| 实验二 五龙通络解郁方对血管损伤模型斑马鱼行为学的影响 |
| 1 实验材料与方法 |
| 2 结果观察 |
| 3 统计分析 |
| 4 结果 |
| 5 结论 |
| 实验三 五龙通络解郁方对斑马鱼血管新生的影响 |
| 1 实验材料与方法 |
| 2 结果观察 |
| 3 统计分析 |
| 4 结果 |
| 5 结论 |
| 实验四 五龙通络解郁方对斑马鱼炎症模型的影响 |
| 1 实验材料与方法 |
| 2 结果观察 |
| 3 统计分析 |
| 4 结果 |
| 5 结论 |
| 小结 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 在学期间研究成果 |
| 个人简历 |
（3）外周血中HCMV-MIR-UL112-3p水平与颈动脉IMT增加的相关性及HCMV引起脐静脉内皮细胞内皮-间质转化的分子机制（论文提纲范文）
| 英文缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 第一部分 外周血中HCMV-MIR-UL112-3p水平与颈动脉IMT增加的相关性 |
| 1 前言 |
| 2 资料与方法 |
| 2.1 主要仪器和设备 |
| 2.2 主要试剂和耗材 |
| 2.3 病例选择与排除标准 |
| 2.4 试验方法 |
| 2.4.1 一般资料收集 |
| 2.4.2 临床资料收集 |
| 2.4.3 颈动脉IMT测量方法 |
| 2.4.4 血清HCMV抗体及炎症因子水平检测 |
| 2.4.5 血浆中HCMV mi R-UL112-3p表达水平检测 |
| 2.4.6 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 人口统计学和临床概况 |
| 3.2 临床和实验室参数分析 |
| 3.3 外周血mi R-UL112-3p阳性与高IMT相关 |
| 3.4 HCMV与临床因素或生物学因素的相关性 |
| 4.讨论 |
| 4.1 HCMV感染、炎症因子与AS的相关性 |
| 4.2 HCMV感染、临床参数与AS的相关性 |
| 4.3 HCMV mi RNA与 AS的相关性 |
| 4.4 本研究的不足之处 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 HCMV通过MMP-2 促进内皮-间质转化后脐静脉内皮细胞中的TGF-β1活化 |
| 1 前言 |
| 1.1 HCMV感染对血管中主要细胞的影响 |
| 1.2 内皮间质转化与动脉粥样硬化 |
| 1.3 HCMV感染影响TGF-β1 的表达和活性 |
| 1.4 本研究的假说 |
| 2 资料与方法 |
| 2.1 主要仪器和设备 |
| 2.2 主要试剂和耗材 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 细胞和病毒 |
| 2.3.2 细胞复苏 |
| 2.3.3 细胞传代 |
| 2.3.4 HCMV的培养和滴度测定 |
| 2.3.5 间接免疫荧光 |
| 2.3.6 MMP-2 sh RNA转染 |
| 2.3.7 RNA提取、逆转录和荧光定量PCR检测 |
| 2.3.8 免疫印迹(Western blot) |
| 2.3.9 免疫共沉淀 |
| 2.3.10 TGF-β1含量检测 |
| 2.4 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 HCMV可以在HUVEC细胞中增殖但不受ra TGF-β1 的影响 |
| 3.2 HCMV能够感染被TGF-β1 诱导发生End MT的 HUVEC |
| 3.3 HCMV可以诱导发生End MT的 HUVEC细胞中TGF-β1 活化 |
| 3.4 新生成激活状态TGF-β1 的量与TGF-β1及HCMV的感染量呈正相关 |
| 3.5 MMP-2 参与了HCMV感染引起发生End MT的血管内皮细胞上调活化TGF-β1 |
| 4 讨论 |
| 4.1 HCMV感染与血管内皮损伤 |
| 4.2 HCMV通过MMP-2 激活TGF-β1 促进血管内皮细胞End MT |
| 4.3 本研究的创新之处 |
| 4.4 本研究的不足之处 |
| 5.结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 综述 HCMV 感染与冠心病的研究现状和进展 |
| 参考文献 |
（4）二肽基肽酶-4在慢性应激性血栓形成中的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1. 实验药品与试剂 |
| 2.2. 实验设备与仪器 |
| 2.3. 试剂配置方案 |
| 2.4. 实验动物 |
| 2.5. 小鼠慢性制动束缚应激模型的建立 |
| 2.6. 小鼠颈总动脉血栓模型的制备 |
| 2.7. 实验动物分组 |
| 2.8. 样本收集 |
| 2.9. 血浆中DPP-4活性的测定 |
| 2.10. 基因表达分析 |
| 2.11. 颈总动脉组织学改变 |
| 2.12. 免疫蛋白印迹法测定颈总动脉蛋白表达 |
| 2.13. 内皮细胞培养及实验 |
| 2.14. 统计学分析 |
| 第三章 结果 |
| 3.1. 慢性制动束缚应激对颈动脉内皮损伤和血栓形成影响 |
| 3.1.1. 慢性制动束缚应激对小鼠体重的影响 |
| 3.1.2. 慢性制动束缚应激对小鼠FeCl_3诱导颈动脉血栓形成的影响 |
| 3.1.3. 血浆DPP-4活性、ADAMTS13、PAI-1、vWF的水平的变化 |
| 3.1.4. 颈动脉血栓形成病变部位HE染色 |
| 3.1.5. 颈动脉血栓形成病变部位CD31染色 |
| 3.1.6. 慢性制动束缚应激对小鼠血细胞计数的影响 |
| 3.2. 慢性应激对氧化应激、炎症、蛋白水解及PAI-1和eNOS的影响 |
| 3.2.1. 慢性应激对FeCl_3诱导血栓形成部位颈动脉组织炎症、氧化应激的影响 |
| 3.2.2. 慢性应激对蛋白水解基因和PAI-1、eNOS表达的影响 |
| 3.2.3. 慢性应激对颈动脉目标蛋白表达的影响 |
| 3.2.4. 慢性应激对脂肪组织PAI-1和氧化应激及炎症的影响 |
| 3.3. DPP-4抑制剂对慢性制动束缚应激小鼠血栓形成的影响 |
| 3.3.1. DPP-4抑制剂对慢性应激小鼠体重的影响 |
| 3.3.2. DPP-4抑制剂对慢性应激小鼠颈动脉血栓形成影响 |
| 3.3.3. DPP-4抑制剂对慢性应激小鼠颈动脉血栓形成面积的影响 |
| 3.3.4. DPP-4抑制剂对慢性应激小鼠颈动脉内皮的影响 |
| 3.3.5. DPP-4抑制剂对慢性制动束缚应激小鼠血浆DPP-4活性和PAI-1、vWF及ADAMTS13表达水平的影响 |
| 3.3.6. DPP-4抑制剂干预慢性应激小鼠血细胞计数的变化 |
| 3.4. DPP-4抑制剂对慢性应激小鼠组织中PAI-1、eNOS、氧化应激、炎症及蛋白水解相关基因和蛋白表达的影响 |
| 3.4.1. DPP-4抑制剂对颈动脉氧化应激和炎症,蛋白水解的影响 |
| 3.4.2. DPP-4抑制剂对颈动脉蛋白水解和PAI-1及eNOS mRN表达的影响 |
| 3.4.3. DPP-4抑制剂对慢性应激小鼠颈动脉eNOS、gp91~(phox)、Catalase、SOD-1、SOD-2蛋白表达的影响 |
| 3.4.4. DPP-4抑制剂对脂肪组织PAI-1和炎症及氧化应激相关基因表达的影响 |
| 3.5. H_2O_2诱导氧化应激对HUVECs的影响 |
| 3.6. DPP-4抑制剂对H_2O_2诱导氧化应激HUVECs的影响 |
| 第四章 讨论 |
| 第五章 结论 |
| 参考文献 |
| 附表1 |
| 致谢 |
| 综述 应激与心血管疾病研究进展 |
| 参考文献 |
| 附录 攻读学位期间发表论文目录 |
（5）血脂参数与血管性勃起功能障碍的临床研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩写及符号说明 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附图表 |
| 参考文献 |
| 综述 血脂参数与血管性勃起功能障碍的关系 |
| References |
| 攻读硕士学位期间发表论文情况 |
| 致谢 |
| 发表论文全文 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
（6）糖尿病患者手指复温时间与下肢动脉粥样硬化的相关性研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 第1章 前言 |
| 第2章 研究对象与方法 |
| 2.1 研究对象 |
| 2.2 主要仪器和设备 |
| 2.3 研究方法 |
| 2.4 统计分析 |
| 第3章 研究结果 |
| 3.1 组间一般临床资料的比较 |
| 3.2 FCT结果比较 |
| 3.3 RT与下肢动脉斑块的logistics回归分析 |
| 3.4 RT与临床指标的Spearman及多元线性回归分析 |
| 第4章 讨论 |
| 第5章 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 综述 指尖血管反应性:心血管疾病的指纹 |
| 参考文献 |
（7）有氧运动对衰老大鼠血管内皮功能和mircoRNAs调控的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 1 前言 |
| 2 文献综述 |
| 2.1 衰老 |
| 2.1.1 衰老的定义 |
| 2.1.2 衰老的临床表现 |
| 2.2 血管衰老 |
| 2.2.1 血管衰老的定义 |
| 2.2.2 血管衰老所导致的血管改变 |
| 2.3 表观遗传学和血管衰老 |
| 2.4 有氧运动对血管衰老的影响 |
| 3 实验材料与方法 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 实验动物及分组 |
| 3.1.2 实验流程图 |
| 3.1.3 主要实验仪器 |
| 3.1.4 试剂和药品 |
| 3.1.5 血管张力实验试剂 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 运动干预方法 |
| 3.2.2 实验取材及样本处理 |
| 3.2.3 Small RNA测序 |
| 3.2.4 大鼠血管张力测定实验 |
| 3.2.5 大鼠血管血清TNF-α、eNOS、VEGF、VCAM-1、ICAM-1、SOD和总一氧化氮检测 |
| 3.2.6 统计方法 |
| 4 实验结果 |
| 4.1 二代测序质控结果 |
| 4.2 差异表达miRNA筛选 |
| 4.3 差异表达miRNA的功能富集分析 |
| 4.4 ACh对各组的胸主动脉内皮功能反应的影响 |
| 4.5 各组血清TNF-α、eNOS、VEGF、VCAM-1、ICAM-1、SOD和总一氧化氮含量的比较 |
| 5 讨论 |
| 6 结论 |
| 7 致谢 |
| 8 参考文献 |
| 9 附录A 中英文缩略词表 |
| 10 个人简历 在读期间发表的学术论文与研究成果 |
（8）猪诱导多能性干细胞定向分化为血管内皮细胞的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| 英文摘要 |
| 1 前言 |
| 1.1 血管内皮细胞与心血管疾病 |
| 1.1.1 血管内皮细胞的发生 |
| 1.1.2 血管内皮细胞的病变与心血管疾病 |
| 1.1.3 心血管疾病的治疗现状 |
| 1.2 多能性干细胞 |
| 1.2.1 多能性干细胞的分类和特征 |
| 1.2.2 多能性干细胞应用的前景和挑战 |
| 1.3 多能性干细胞向血管内皮细胞的定向分化 |
| 1.3.1 多能性干细胞向血管内皮细胞定向分化的研究进展 |
| 1.3.2 多能性干细胞向血管内皮细胞定向分化的鉴定 |
| 1.4 研究目的和意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验动物及材料 |
| 2.1.2 主要仪器及设备 |
| 2.1.3 主要试剂及试剂盒 |
| 2.1.4 常用试剂及配制方法 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 细胞培养 |
| 2.2.2 病毒包装 |
| 2.2.3 猪诱导多能性干细胞的建系 |
| 2.2.4 细胞多能性鉴定 |
| 2.2.5 Realtime-PCR检测 |
| 2.2.6 猪多能性干细胞向血管内皮细胞的诱导分化 |
| 2.2.7 流式细胞分选 |
| 2.2.8 血管内皮细胞的功能鉴定 |
| 2.2.9 数据统计与分析 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 猪多能性干细胞的获得及鉴定 |
| 3.1.1 猪诱导多能性干细胞的获得及鉴定 |
| 3.1.2 猪多能性干细胞的培养及鉴定 |
| 3.2 不同来源的猪多能性干细胞向中胚层分化潜能的比较 |
| 3.2.1 不同来源的猪多能性干细胞向中胚层诱导过程中的形态比较 |
| 3.2.2 不同来源的猪多能性干细胞向中胚层诱导过程中谱系标记基因的表达比较 |
| 3.3 piPSCs向中胚层分化的诱导体系的筛选 |
| 3.4 piPSCs向血管内皮细胞诱导分化体系的建立 |
| 3.4.1 不同处理对piPSCs向中胚层分化过程中谱系标记基因表达的影响 |
| 3.4.2 不同处理对piPSCs向血管内皮细胞分化效率的影响 |
| 3.4.3 piPSCs来源的血管内皮细胞(pi PSC-ECs)的鉴定 |
| 3.5 piPSCs和 h ESCs向血管内皮细胞分化进程的比较 |
| 3.5.1 piPSCs和 h ESCs向中胚层分化过程中谱系标记基因的表达比较 |
| 3.5.2 piPSCs和 h ESCs向血管内皮细胞分化效率的比较 |
| 3.5.3 pi PS-ECs和 h ES-ECs的形态、基因表达和体外功能的比较 |
| 4 讨论 |
| 4.1 不同来源的猪多能性干细胞向中胚层的分化潜能 |
| 4.2 猪多能性干细胞向中胚层分化的调控 |
| 4.3 猪诱导多能性干细胞来源的血管内皮细胞的鉴定 |
| 4.4 多能性干细胞向血管内皮细胞诱导分化体系的物种特异性 |
| 5 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 |
（9）白藜芦醇延缓氧化应激诱导的心肌及内皮细胞衰老的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一部分 白黎芦醇对D-半乳糖诱导小鼠心肌氧化应激的影响及机制研究 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第二部分 白藜芦醇对脐静脉内皮细胞氧化应损伤的保护作用及机制研究 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第三部分 白藜芦醇通过SIRT1 /PGC-1α促进自噬延缓内皮细胞衰老 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 英文缩写词表 |
| 攻读学位期间成果 |
| 致谢 |
（10）SR-A1/VEGF-B反应轴在肥胖相关性高血压中的作用及其机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩写对照 |
| 前言 |
| 实验材料及方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 文献综述 脂肪组织微环境的改变在肥胖相关心血管疾病中的作用及研究进展 |
| 参考文献 |
| 参加课题及发表文章情况 |
| 致谢 |
四、血管内皮功能与心血管疾病（论文参考文献）
- [1]基于差异表达的LncRNA TUG1研究小陷胸加味汤治疗冠心病（痰热互结证）的作用机制[D]. 周芳. 湖北中医药大学, 2021(01)
- [2]五龙通络解郁方治疗冠心病稳定型心绞痛合并抑郁症的研究[D]. 王宇. 北京中医药大学, 2021(01)
- [3]外周血中HCMV-MIR-UL112-3p水平与颈动脉IMT增加的相关性及HCMV引起脐静脉内皮细胞内皮-间质转化的分子机制[D]. 陈刚. 安徽医科大学, 2020(04)
- [4]二肽基肽酶-4在慢性应激性血栓形成中的作用及机制研究[D]. 金香兰. 延边大学, 2020(05)
- [5]血脂参数与血管性勃起功能障碍的临床研究[D]. 李明. 山东大学, 2020(02)
- [6]糖尿病患者手指复温时间与下肢动脉粥样硬化的相关性研究[D]. 吴祖祥. 南昌大学, 2020(07)
- [7]有氧运动对衰老大鼠血管内皮功能和mircoRNAs调控的影响[D]. 何月华. 广州体育学院, 2020(07)
- [8]猪诱导多能性干细胞定向分化为血管内皮细胞的研究[D]. 伟人悦. 东北农业大学, 2020(04)
- [9]白藜芦醇延缓氧化应激诱导的心肌及内皮细胞衰老的机制研究[D]. 杜丽根. 南方医科大学, 2020(01)
- [10]SR-A1/VEGF-B反应轴在肥胖相关性高血压中的作用及其机制研究[D]. 王岩. 南京医科大学, 2020(06)