一、干细胞研究引导新革命（论文文献综述）
郭宜君[1]（2020）在《用于构建可控DNA分子网络和优化基因编辑系统的功能核酸的研究》文中认为核酸作为已知生命形式中必不可少的生物聚合物或生物大分子,承载着储存和编码生命体遗传信息的重要职责。随着DNA纳米技术领域的发展,自然系统中的核酸复杂结构与功能已被广泛研究,核酸自身的特点与优势也被精准剖析,使其不仅能作为纳米材料成功地构建出复杂的纳米结构、器械与反应网络,更是推动了核酸作为可设计性的基因表达网络与强大特异性识别系统在合成生物学、分子生物学以及生物物理学等领域中的应用。而本论文中我们侧重研究了核酸结构的功能化及其在构建可编程DNA分子网络与优化基因编辑领域的应用。Toehold介导的链替换反应作为动态DNA纳米技术中的基础,已证明其在动态分子系统中非凡的可编程能力。而反应中反应底物结构的动态可控对于构建具有数字和动态行为的复杂DNA装置至关重要,因此在第二章中我们通过在传统“线性底物”的Toehold结构域与分支迁移域之间嵌入一个pH控制的分子间三链结构体,开发了一种动态可控分离式的DNA电路体系。该体系可以通过pH值的变化来调节反应速率和可拆卸电路的“开关”状态。由此我们也成功地构建了由三个pH响应DNA模块组成的双输入电路。重要的是,在第三章中我们更是利用了该分子间三链体结构的高度可分离性,构建了一种球形核酸的可重置自组装系统,该装置可以在恒定温度下实现反应重置且无额外DNA废产物产生。此外该策略更是演示了一个从球形核酸自组装系统中回收废弃球形核酸的实例。该策略的提出给复杂分子系统和可重编辑纳米粒子超晶格的动态调节提供了一种简便新颖的思路。另一方面作为储存和编码生命体遗传信息的重要载体,DNA各种不同的表现形态与修正状态对生命体体征的影响也不尽相同。针对靶向基因序列的CRISPR编辑技术因其优秀的可编程性和特异性识别能力提供了在基因序列上更多可操控的编辑空间;而其在人类哺乳细胞尤其是干细胞、原代细胞的有限的基因敲入能力以及高的脱靶效应,严重局限了该技术在更多遗传疾病诊疗技术中的应用。因此在第四章中,我们发现将含有短同源臂的双链DNA的5’末端进行化学小分子的修饰并充当供体模板时,能够有效的提高基因敲入效率。将高稳定性和低毒性的Cas9核糖核蛋白与作为供体模板的末端修饰双链DNA相结合的设计具有高敲入效率、短试验周期、高安全性以及高精度等优点。且在人类胚胎肾脏细胞中0.7/2.5 kb插入长度的DNA片段分别实现了空前的65%/40%敲入效率,并鉴定出5’末端化学修饰的双链DNA供体能够在人类肿瘤细胞和干细胞内不同基因组位点上实现5倍基因敲入效率的提高。针对核酸的化学修饰的设计,不仅给该研究领域提供了一个新颖的优化方向,更是拓宽了基因编辑技术在实际应用中的使用范围。在第五章中,我们更是通过将核酸的动态链替换反应概念应用在CRISPR体系上,高效的抑制了基因编辑中脱靶效应这一大难题。我们通过设计与sgRNA引导序列反义的短单链DNA保护链与sgRNA相结合,经过合理的结构优化实现了脱靶效率的有效抑制;且在人类内源基因位点上实现了高达90%以上的脱靶效率的抑制。该策略的设计不仅实现了生物体系与核酸纳米技术的成功结合,更是通过简单有效的方法实现了基因编辑的精准编辑。
索晓敏[2]（2020）在《胰腺癌干细胞外泌体激活树突细胞用于癌症免疫治疗的研究》文中进行了进一步梳理胰腺癌是一种恶性程度很高的消化道疾病,五年内生存率仅为6%,以“癌中之王”着称。由于手术治疗存在局限性,化疗仍是晚期胰腺癌的主流治疗手段。吉西他滨（Gemcitabine,GEM）是胰腺癌治疗的一线化疗药物,尽管它可以改善患者的临床症状,但在延长患者总生存期的作用仍然有限,主要原因是肿瘤干细胞（Cancer stem cells,CSCs）的存在而导致的耐药性。CSCs是肿瘤组织中存在的一小部分具有自我更新能力和多向分化潜能的细胞,在肿瘤发生、进展、复发的过程中都发挥着至关重要的作用。CSCs表达ABC转运蛋白,具有天然的抗化疗药物的能力,这成为胰腺癌治疗效果差,容易复发和转移的根本原因之一。因此,有效杀死CSCs有望克服胰腺癌的耐药性,从而彻底根除癌症。免疫疗法利用患者自身的免疫系统来抗击疾病,通过增强免疫系统对抗肿瘤,被证明是最有前途的治疗癌症的策略。由于胰腺癌肿瘤干细胞（Pancreatic cancer stem cells,PCSCs）表面低表达可以呈递内部抗原的主要组织相容性复合体I蛋白（Major histocompatibility complex,MHC I）,内部异己抗原无法被T细胞识别,从而实现免疫逃逸。树突细胞（Dendritic cell,DC）是体内专职抗原呈递的细胞,通过向T细胞呈递异己抗原,诱导T细胞免疫应答。因此,基于树突细胞的肿瘤疫苗的应用,成为肿瘤免疫治疗的一个重要途径。外泌体（Exosomes）是由细胞分泌的包含DNA,RNA和蛋白质的40-150 nm的小囊泡,可以作为肿瘤抗原激活树突细胞,实现更精准地诱导抗肿瘤免疫反应。本课题利用单链抗体aCD11c修饰PCSCs来源的外泌体,得到能有效地靶向树突细胞的体系aCD11c-Exosomes。该体系能高效率的促使树突细胞对外泌体进行摄取、加工,将其携带的PCSCs异己抗原提呈给T细胞,T细胞进而靶向杀伤PCSCs,产生特异性强的抗肿瘤免疫反应。本课题采用超速离心的方法成功分离了平均粒径为73 nm的外泌体;通过将aCD11c与二棕榈酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-琥珀酰亚胺酯（DSPE-PEG-NHS）连接制备了aCD11c靶向配体;利用磷脂双链与外泌体膜表面的磷脂双分子层脂质嵌插原理制备了靶向树突细胞的体系aCD11c-Exosomes;通过多种实验手段在体外水平验证了该体系能有效的靶向到树突细胞,促使树突细胞成熟并呈递抗原给T细胞;建立BALB/c小鼠皮下荷瘤模型,体内水平验证了aCD11c-Exosomes能够诱导机体产生强的抗肿瘤免疫应答反应。本课题设计的基于外泌体的个体化肿瘤疫苗有望为临床攻克胰腺癌治疗这一难题提供重要的思路。
李鸣[3]（2020）在《糖尿病肾病患者血清FABP4和FOXO1水平变化的临床研究》文中研究表明目的:通过健康足月新生儿脐带体外培养分离出人脐带间充质干细胞h UC-MSC（Human umbilical cord mesenchymal stem cells,h UC-MSC）,再将其提取诱导为间充质干细胞来源的神经干细胞,检测不同浓度二甲双胍（Metformin,METF）对间充质干细胞来源的神经干细胞的细胞增殖、活性以及细胞周期的影响。方法:无菌条件下从健康足月新生儿脐带中体外分离培养提取出h UC-MSC,将其进行传代培养,培养至第3代上流式细胞仪对h UC-MSC的表面标记物进行鉴定,再取第3代处于细胞对数生长阶段的人脐带间充质干细胞,将其诱导为神经干细胞,通过流式细胞仪鉴定间充质干细胞来源的神经干细胞。再将诱导的神经干细胞悬液接种至96孔培养板,每组设置6个复孔,待连续培养3天后,加入二甲双胍使其终浓度分别为0uM（对照组）、5 uM（METF-1）、10 uM（METF-2）、15 uM（METF-3）、20 uM（METF-4）、50 uM（METF-5）,继续共培养,分别于24、48、72小时后用酶标仪（酶联免疫检测仪）检测诱导型神经干细胞在不同二甲双胍浓度影响下的450nm处的吸光值（OD值）。进一步计算不同培养时间、不同浓度的二甲双胍培养基中诱导型神经干细胞的增殖率及活性。同时应用流式细胞仪检测二甲双胍对诱导型神经干细胞细胞周期的影响。然后采用SPSS21.0统计软件进行统计学分析。结果:（1）不同浓度METF与诱导型神经干细胞共培养24h后,METF-1、METF-2、METF-3、METF-4、METF-5组的增殖率分别是:（128.68±0.58）%、（136.33±1.53）%、（158.86±1.48）%、（137.00±2.00）%、（112.33±0.58）%,实验组与空白对照组以及各实验组间的增殖率比较,其差异具有统计学意义（P<0.001）,说明各培养组在24h促进间充质干细胞来源的神经干细胞的增殖,并且METF浓度为15umol/L时,细胞增殖率最高;随着共培养时间的延长,细胞增殖逐渐出现抑制,受药物浓度变化的影响,共培养48h后二甲双胍的药物浓度为20umol/L时,其细胞增殖率为110.33±0.58,仍可促进间充质干细胞来源的神经干细胞增殖,而其他培养组METF-1、METF-2、METF-3、METF-5的细胞增殖率分别是（89.33±0.58）%、（93.67±0.58）%、（96.00±0.00）%、（90.33±0.58）%,即共培养48h后,二甲双胍药物浓度为5、10、15、50umol/L时则抑制细胞增殖,且各培养组间增殖率比较差异具有统计学意义（P<0.001）;随着时间继续推移,共培养72h后,细胞的增殖抑制更加显着,METF-1、METF-2、METF-3、METF-5组的增殖率分别是（84.33±0.58）%、（89.67±1.16）%、（93.00±0.00）%、（87.33±1.16）%,然而在20umol/L药物浓度（细胞增殖率为105.67±1.16）下仍可促进细胞增殖,但其增殖率随培养时间的延长而呈现下降趋势,且差异具有统计学意义（P<0.001）。（2）不同浓度METF与间充质干细胞来源的神经干细胞共培养24h后,空白对照组细胞周期G0/G1期占（91.62±0.66）%,METF-1、METF-2、METF-3、METF-4、METF-5组细胞周期G0/G1期的比例分别为（90.59±0.41）%、（89.39±0.72）%、（83.81±0.43）%、（85.92±0.79）%、（86.97±0.15）%,实验组、空白对照组以及各实验组间的比较差异具有统计学意义（P<0.001）,与对照组进行比较,各实验组细胞周期中的G0/G1期占比降低,促进诱导型神经干细胞增殖,且METF浓度在15umol/L时,G0/G1期的比例（83.81±0.43）最低,增殖指数最高（16.19±0.43）;随时间延长,共培养48h后,空白对照组细胞周期G0/G1期占（91.18±0.49）%,诱导型神经干细胞在不同METF药物浓度下,G0/G1期的比例增加,METF-1、METF-2、METF-3、METF-4、METF-5组细胞周期G0/G1期的比例分别为（94.41±0.39）%、（93.27±0.37）%、（92.18±0.19）%、（88.08±0.55）%、（93.85±0.45）%,实验组、空白对照组以及各实验组间比较差异具有统计学意义（P<0.001）,表明细胞增殖逐渐被抑制,并且随着药物浓度的增加,G0/G1期的增加比例呈不明显减低,当药物浓度为20umol/L时,与对照组相比,G0/G1期（88.08±0.55）比例减低,在此药物浓度下对细胞增殖呈促进作用,当药物浓度为50umol/L时,与对照组相比,G0/G1期比例（93.85±0.45）显着增加,对细胞增殖再次呈现抑制作用。结论:24h时,不同浓度二甲双胍对间充质干细胞来源的神经干细胞具有促进增殖作用,在药物浓度为15umol/L时促进作用最强,随着作用时间延长,48、72h时不同浓度二甲双胍对间充质干细胞来源的神经干细胞呈现抑制增殖作用,而在药物浓度为20umol/L时,对诱导型神经干细胞却表现为促进增殖作用。综上所述,二甲双胍在一定浓度范围和一定时间内对间充质干细胞来源的神经干细胞具有促进增殖作用,此实验提示我们通过二甲双胍对诱导型神经干细胞的促进增殖作用,可将其进行细胞移植从而进行神经损伤等疾病的治疗,但这些要通过更多的临床实验来确定其安全范围,从而造福更多患者。
虎啸[4]（2018）在《兔原始生殖细胞（PGCs）无血清无饲养层培养的研究》文中提出选择适宜的种子细胞是细胞工程学研究的重要前提,原始生殖细胞（Primordial germ cells,PGCs）因其无限增殖和多向分化的能力而备受关注。传统的培养体系常常使用血清和饲养层为胚胎干细跑提供支持,但血清和饲养层含有大量成分复杂的异源蛋白和不利于细胞生长的抑制因子,具有潜在的细胞毒性,同时也给细胞产物的分离和细胞特化等调控机制的研究带来极大困难。本研究选用14-18 d胎龄的胎兔原始生殖细胞为研究对象,建立了一种无血清无饲养层培养兔原始生殖细胞的方法。1.本试验选取日本大耳白兔14-18 d胎龄胎兔无菌剥离生殖嵴,体外分离PGCs,使用KSR代替血清,在培养体系中添加细胞因子LIF制成无血清培养液对兔PGCs培养。采用酶组织化学检测碱性磷酸酶活性、RT-PCR检测转录因子Oct-4的表达等方法对PGCs进行鉴定,探究了细胞传代数与冻存30天后的复苏率之间的关系。结果表明:（1）AKP染色与RT-PCR检测结果均为阳性,说明使用添加了LIF的培养液可成功培养兔PGCs。（2）冻存30天后无血清培养方法的复苏率与常规培养无差别（P>0.05）;2.本试验使用无血清培养体系下的兔PGCs,进行条件培养基的过渡培养,之后在添加LIF、b FGF、TGF-β1的无血清无饲养层培养条件下培养,通过RT-PCR检测不同代数和培养天数的PGCs转录因子Oct-4的表达,体外拟胚体的形成实验,冻存30天后的复苏培养探究了无血清无饲养层培养兔PGCs的方法,结果表明:（1）兔原始生殖细胞可通过条件培养基的过渡培养成功进行无血清无饲养层的培养;（2）在无饲养层无血清培养液中添加LIF、b FGF、TGF-β1三种细胞因子可以使兔原始生殖细胞持续增殖并保持全能性;（3）冻存30天后无血清无饲养层培养的复苏率与常规培养并无差异（P>0.05）。
麻晓峰[5]（2018）在《电子耳蜗体外刺激螺旋神经元生长发育的作用研究》文中进行了进一步梳理目的1、建立并优化人工耳蜗-石墨烯-电刺激装置,为体外电刺激螺旋神经元提供理想平台。2、从物理学及生物学角度对建立的人工耳蜗-石墨烯-电刺激装置进行鉴定。3、用人工耳蜗-石墨烯-电刺激装置对体外培养的螺旋神经元行定时定量的电刺激,观察其生长发育是否更加成熟。方法1、分离SPF FVB胎鼠海马、嗅球、皮质组织,采用机械分离和胰酶消化法提取原代神经干细胞。采用无血清培养技术、机械吹打和胰酶消化法进行传代培养神经干细胞。分离SPF FVB P1小鼠蜗轴组织,采用机械分离和胰酶消化法提取原代螺旋神经元,在无血清培养基中进行培养。2、将澳大利亚人工耳蜗Nucleus CI24RE（ST）置于预先制作好的线路板上,参考电极通过电导线与细胞皿底内的石墨烯相连接,刺激电极通过电导线与细胞皿上铂金电极相连,这样通过导电的细胞培养液形成电路回路系统。培养的神经干细胞及螺旋神经元细胞即处在电场环境中。选用美国歌手Michael Jackson的曲目“Heal the World”作为声刺激材料,使用科利尔公司的人工耳蜗调试软件Custom Sound 4.0,使人工耳蜗进行声电转换,进而对培养皿上的神经干细胞及螺旋神经元进行电刺激。结果1、通过示波器观察到电流波形,从物理学角度证明我们设计的人工耳蜗-石墨烯-电刺激装置工作状况良好,检测到电势范围约在-560m V到+560m V之间。石墨烯表面电势变化范围约在-60m V到+60m V之间。2、选用Fluo-4,AM作为荧光探针检测神经干细胞内钙离子浓度变化,Fluo-4游离配体与神经干细胞内钙离子结合后产生较强的荧光,而后当荧光逐渐淬灭时,播放上述曲目,声刺激通过人工耳蜗转变为电刺激,神经干细胞接受到电刺激后细胞内产生钙离子流动,荧光显着增强,从生物学角度证明我们设计的人工耳蜗-石墨烯-电刺激装置工作状况良好。3、对在人工耳蜗-石墨烯-电刺激装置中培养的P1小鼠所分离原代螺旋神经元进行为期两天的电刺激（10小时/天）,发现与未进行电刺激的石墨烯上生长的螺旋神经元相比,生长锥的面积及丝状伪足的长度较对照组增加。进行实时荧光定量PCR检测发现myosin-X、fscn2和integrinβ1表达量实验组较对照组比较增加（*,p<0.05）,diap3表达量无明显差别。我们对在人工耳蜗-石墨烯电刺激装置中培养的P1小鼠所分离原代螺旋神经元进行为期七天的电刺激（2小时/天）,发现与未进行电刺激的石墨烯上生长的螺旋神经元相比,神经突的长度无明显差别。进行为期五天的电刺激（10小时/天）后发现实验组神经突的长度较对照组增加,具有统计学意义。进行为期七天的电刺激,实验组ES1组（10小时/天）和ES2组（刺激2小时后停1小时,共10小时/天）神经突的长度较对照组增加,具有统计学意义,其中ES2组增加更为显着。结论1、成功构建人工耳蜗-石墨烯-电刺激装置,可以进行体外细胞培养电刺激的相关实验研究。2、以石墨烯作为细胞培养基底支架材料,人工耳蜗收集声音通过声电转换对细胞行电刺激,从物理学及生物学角度验证了该装置工作的可行性。3、人工耳蜗的电刺激与石墨烯的高导电性协同作用,对体外培养的螺旋神经元的生长发育具有促进作用,使其更加成熟。
丁洁[6]（2015）在《Notch信号通路在人胚胎干细胞分化为毛细胞的无基质细胞诱导体系中的研究》文中指出听力损失是严重影响人类生活质量的世界性顽疾之一,目前尚无根治的方法。虽然听力损伤对生命不造成威胁,但耳聋发病率日益增加严重影响患者的生活质量和社会交流能力,给全球的经济发展带来了严重的影响。内耳是一个具有复杂结构且高度特化的感觉器官。内耳毛细胞是内耳中重要的听觉感受器。在人的内耳中,毛细胞容易受到年龄、耳毒性药物、家族遗传疾病、传染性疾病和噪音等因素影响而损伤。内耳毛细胞为终末分化细胞,基本上不具有再生修复能力,由毛细胞损伤引起的感音神经性耳聋往往是不可逆的,造成永久性的耳聋,目前尚无有效的方法从根本上治愈耳聋。因此,对耳聋相关的机制研究和干预治疗迫在眉睫。近几年来,干细胞工程的兴起为感音神经性耳聋的治疗提供了一种新思路。以干细胞诱导分化为基础,利用干细胞相关技术,探讨听觉系统损伤修复特别是毛细胞的损伤和再生已成为可能,有望从根本上解决听力损伤问题。胚胎干细胞是内耳毛细胞再生的重要种子细胞之一。研究证明胚胎干细胞在体外培养条件下仍具有多分化潜能,在合适的诱导条件下可以分化为毛细胞。但是在胚胎干细胞及毛细胞的相关研究中依旧存在很多问题。主要包括：1、需要建立一个简便、高效的将人胚胎干细胞体外诱导分化为内耳祖细胞的体系。2、人胚胎干细胞体外成功分化为毛细胞的诱导体系主要建立在基质细胞共培养的基础上,与基质细胞共培养会对再生毛细胞的后续检测和进一步研究造成一定的干扰。3、Notch信号通路在哺乳动物内耳毛细胞的发育过程中起着非常重要的作用,然而,Notch信号通路毛细胞体外诱导分化过程中是否具有类似的作用?还未可知。因此,本研究的前两部分内容（即第二章和第三章）主要研究如何在在无基质细胞作为饲养层的前提条件下,成功将人胚胎干细胞分化为具有典型静纤毛束和电生理反应的成熟毛细胞。第三部分（第四章）,以人胚胎干细胞向毛细胞样细胞体外定向分化的无基质细胞诱导体系为基础,进而研究Notch信号通路中的配体和受体对毛细胞体外诱导分化的影响。第一部分：本研究分别采取了拟胚体组合因子诱导法与单层贴壁诱导法将人胚胎细胞向内耳祖细胞诱导分化,均获得了能够表达内耳前体细胞标志基因和蛋白的内耳祖细胞。这两种诱导方法相比,拟胚体悬浮培养法需要分阶段操作,且诱导阶段耗时相比于单层贴壁诱导法长,因此,我们以单层贴壁诱导法为基础,建立了人胚胎干细胞定向分化为内耳祖细胞的体系,为后续进一步向内耳毛细胞诱导分化奠定了研究基础。第二部分：为了将分化得到的内耳祖细胞进一步诱导分化为具有功能的毛细胞。我们尝试采用不同的基质和诱导培养液,将分离得到的内耳上皮祖细胞（OEPs）向毛细胞样的细胞诱导分化。实验结果表明：以灭活的鸡胚椭圆囊基质细胞作为饲养层,诱导OEPs分化生成的毛细胞表面存在规则排列的静纤毛束。然而,和基质细胞共培养,分化得到的毛细胞中参杂有基质细胞,这将对后续的检测和研究工作造成一定的干扰。为了避免基质细胞的干扰,我们采用层粘连蛋白laminin作为基质替代鸡胚椭圆囊基质细胞,尝试采用不同的诱导培养液将OEPs诱导分化为有功能的毛细胞。结果表明：将OEPs接种在laminin预处理过的培养皿上,用添加了EGF和RA的鸡胚椭圆囊基质细胞的条件培养液作为诱导培养液诱导OEPs向毛细胞分化,生成的毛细胞表面存在成束的规则排列的静纤毛,并经膜片钳检测证明具有电生理功能。这提示我们,在无基质细胞共培养的条件下,人胚胎干细胞在体外可以诱导分化为具有功能的成熟毛细胞。第三部分：在体内,内耳毛细胞的发育过程受到Notch信号通路的调控,在体外诱导分化过程中,毛细胞的分化和发育是否也受到Notch信号通路类似的调控作用,却鲜有研究。了解内耳毛细胞体外分化过程中Notch信号通路的调控作用有助于控制毛细胞的分化。我们以人胚胎干细胞向毛细胞样细胞体外定向分化的无基质细胞诱导体系为基础,进而研究Notch信号通路中的配体和受体对毛细胞体外诱导分化的影响。首先,检测Notch信号通路中各配体和受体在毛细胞诱导分化不同阶段的表达情况,确定Notch信号的表达时序；再依据配体表达的时序,选取在诱导分化过程中不同配体开始表达时的细胞作为靶细胞；用pAJ-U6-shRNA-CMV-Puro/GFP载体,构建Jag-1-shRNA干扰载体的慢病毒分别感染分化6天和分化12天的祖细胞以沉默Jag-1基因。同时,用Jag-2-shRNA和Dll-1-shRNA干扰载体的慢病毒感染分化5天的毛细胞以沉默Jag-2和DlM基因,最后,通过半定量PCR、免疫荧光检测和电镜检测验证沉默Jag-1,Jag-2和Dll-1基因对毛细胞体外诱导分化的影响。实验结果表明：在hESCs向毛细胞体外诱导分化的体系中,Jag-1配体主要参与内耳祖细胞的体外分化的过程。而Jag-2配体和Dll-1配体主要参与毛细胞的体外分化的过程,并对毛细胞的分化和发育起着一定的抑制作用。当Jag-2配体和Dll-1配体单独受到干扰时,对毛细胞体外分化的影响不显着,而当两者同时受到干扰时,较为明显地促进毛细胞的体外分化,且抑制了支持细胞的分化。因此,我们认为Jag-2配体和Dll-1配体可能是协同作用的。本章研究主要是为进一步研究毛细胞的体外诱导体系中Notch信号通路的作用机制奠定了一定的理论基础。
都爱博[7]（2014）在《补肾活血法促进TGF-β2基因修饰的ADSCs向软骨细胞分化的作用和机制的实验研究》文中提出目的：研究脂肪源性成体干细胞（ADSCs）体外增殖特性、表型特征及多向分化能力,探索补肾活血中药干预对组织工程软骨构建的作用及其机制。方法：取SD大鼠双侧腹股沟部的脂肪垫,分离培养ADSCs,以流式细胞仪检测原代ADSCs和筛选标志物表达。在二维培养的方式下将大鼠ADSCs进行成脂、成骨、成软骨、成神经元诱导,观察其成脂、成骨、成软骨、成神经元能力并予以鉴定。构建携带hTGF beta2基因的5型复制缺陷型病毒,基因增强合并补肾活血中药含药血清干预体外培养的ADSCs向软骨细胞分化：分为四组：空白对照足组、单纯中药组、基因转染组和中药+基因转染组。通过形态学观察、行HE、甲苯胺蓝染色、PCR、WB及Ⅱ型胶原和蛋白多糖免疫组化染色鉴定软骨细胞表型。结果：从SD大鼠脂肪组织可以获得纯度较高的ADSCs,而且具有良好的增殖能力,能够进行传代培养并能保持其特性。流式细胞仪检测显示CD45、CD106呈阴性表达,CD29、CD44、CD90呈阳性表达。在二维培养环境中,大鼠ADSCs经过成脂、成骨、成软骨、成神经元诱导和组织学、免疫组化鉴定,均成功获得目的细胞。体外实验中基因转染组和中药+基因转染组的ADSCs在诱导14天后细胞爬片经甲苯胺兰染色和Ⅱ型胶原蛋白免疫细胞化学染色呈阳性,经aggrecan细胞免疫荧光检测见细胞的胞浆、胞膜均有绿色荧光表达,而空白对照组和单纯中药组则仅维持贴壁生长,其标本在14天后经甲苯胺兰染色、Ⅱ型胶原蛋白免疫细胞化学染色和aggrecan细胞免疫荧光检测,其结果均为阴性；同时RT-PCR和Westem-blot检测发现2周时中药+基因转染组较基因转染组标本中Col2al、 hTGFbeta-2和aggrecan的mRNA和蛋白的表达水平上调（P<0.05）,空白对照组和单纯中药组中无表达。结论：1.自SD大鼠腹股沟取材可以获得纯度较高的ADSCs,经过传代培养ADSCs的纯度可以得到进一步的提高,ADSCs表达特异的表面分子,具有极强的自我更新能力和多向分化潜能。2.ADSCs具有成脂、成骨、成软骨、成神经元分化的潜能并可高效诱导为脂肪细胞。3.补肾活血中药可促进ADSCs的增殖,合并TGFβ-2可促进ADSCs向软骨细胞分化。
李卓[8]（2013）在《核糖体基因区打靶载体介导FVⅢ打靶人胚胎干细胞及其定向分化研究》文中研究说明人胚胎干细胞（Human Embryonic Stem Cells,hESCs）因其具有高度的自我更新特性和多向分化潜能,在再生医学、组织工程、基因治疗等领域都有着巨大的研究和应用潜力。近年来,随着基因打靶技术在人胚胎干细胞中的不断尝试,使得经基因组精确修饰后的干细胞有望成为实现遗传病治疗的有效方式。然而要充分实现联合基因打靶和干细胞两种技术在临床应用的可能,我们还需面对一些潜在的困难,例如自发同源重组介导基因打靶的低效性,基因组修饰后的安全性等问题。我们研究小组前期的实验证实,由本室研发的核糖体基因区（rDNA）打靶载体（pHrn）能有效介导外源基因定点整合至多种细胞系的rDNA区并有效表达,且一系列临床细胞遗传学的证据表明该区域可能是外源基因停泊的安全位点。在此基础上,本研究利用pHrn携带人凝血因子Ⅷ（FⅦ）表达框,对hESCs进行基因打靶,以期获得在rDNA区定点整合FⅧ的hESCs细胞克隆,并通过检测打靶后hESCs的干细胞特性是否改变来初步验证rDNA区打靶的安全性。然后将定点整合FⅧ的hESCs分化为适合血友病移植治疗的特定组织细胞,测定分化细胞的特性和生理功能,为联合rDNA区基因打靶及干细胞技术应用于血友病A的基因治疗提供基础。方法：（1）将pHrnFⅦ质粒线性化后,经电转和核转两种方式转染单细胞化的hESCs,梯度加入G418筛选抗性克隆；（2）挑取筛选出的抗性克隆,利用定点整合PCR及Southen Blot鉴定rDNA区定点整合FⅧ的阳性hESCs克隆；（3）检测定点整合FⅧ克隆的干细胞生物学特性,包括核型鉴定,碱性磷酸酶染色,干细胞表面标志物检测；（4）检测定点整合FⅧ克隆的多潜能性,包括体外定向心肌分化,体外随机向三胚层细胞分化以及体内畸胎瘤形成等实验。（5）由于肝脏是FⅧ的主要合成及分泌器官,因此我们将定点整合FⅧ细胞克隆定向诱导为肝细胞,并通过形态学观测、细胞特异性基因表达、ICG代谢、PAS糖原染色等实验来验证分化后肝细胞的特性及生理功能；（6）我们还将定点整合FⅧ的细胞克隆定向诱导为目前广泛应用于体内移植治疗的间充质干细胞（MSCs）,通过形态学观测、流式细胞分析、成骨分化、成脂分化、成软骨分化等验证分化后MSCs细胞的特性及生理功能；（7）RT-PCR及ELISA检测定点整合FⅧ的hESCs以及分化后的肝细胞和MSCs细胞中外源FⅧ的转录及蛋白表达。结果：（1）通过定点整合PCR及Southern Blot,我们获得了分别经电转和核转后定点整合Ⅷ的hESCs克隆各一个,分别命名为ET5及NT59；（2）两株细胞均保持正常核型且碱性磷酸酶阳性,并表达SSEA-4,TRA-1-60等hESCs特异性标志物,表明仍具备干细胞的特性；（3）体外分化结果显示两株细胞均能分化出Nestin、SMA、AFP标志物阳性的三胚层细胞,同时体内畸胎瘤切片观测到了鳞状上皮、肌肉、消化道等三胚层组织,表明打靶后细胞仍具备多向分化能力；（4）将ET5细胞进行定向肝细胞分化后,可见圆形或多边形等典型肝细胞样细胞；通过RT-PCR、 Western Blot、免疫荧光均检测到了AFP、AlbvAAT、CYP7A1、CYP3A4等肝细胞特异性基因的表达；分化而来的肝细胞能成功摄取及排泌ICG染料且PAS染色阳性,初步证明具备成熟肝细胞的代谢及糖原贮存功能；（5）ET5进行定向MSCs分化后的细胞,在多次传代后具有与BM-MSCs趋于一致的典型成纤维样形态,且增殖能力旺盛；流式分析结果表明分化而来的MSCs细胞表面抗原CD34, CD45阴性,CD44, CD73, CD90阳性,与BM-MSCs一致；经间充质系分化检测,显示分化而来的MSCs同样具备向成骨成脂成软骨的分化能力；（6）RT-PCR检测结果发现,在ET5、 ET5分化而来的肝细胞及MSCs细胞中均能检测到外源FⅧ的转录,但是ELISA结果仅检测到了分化后肝细胞中FⅧ蛋白的表达。结论：（1）通过rDNA区打靶载体成功将FⅧ表达框定点整合至hESCs的rDNA区；（2）定点整合FⅧ的hESCs仍然保持多向分化潜能；（3）成功将定点整合FⅧ的hESCs定向诱导为具备特定生理功能的肝细胞；（4）成功将定点整合FⅧ的hESCs定向诱导为MSCs,且与BM-MSCs细胞特性趋于一致,并具备多向分化潜能；（5）定点整合FⅧ的hESCs及其分化而来的肝细胞和MSCs能转录外源FⅦ mRNA,但仅在肝细胞中检测到分泌性FⅧ蛋白。
鲍艳[9]（2012）在《重组腺病毒介导的人表皮生长因子基因体外转染人牙髓干细胞的研究》文中研究说明目的：本实验将EGF基因CDS片段亚克隆至腺病毒穿梭载体pYr-adshuttle-1，在体外重组至腺病毒载体pAd/BL-DEST，构建重组腺病毒载体，并转染HEK293细胞进行腺病毒包装，获得重组腺病毒rAd-EGF。将重组腺病毒rAd-EGF在体外感染指数生长期人牙髓干细胞，分析人牙髓干细胞被转染后EGF蛋白的表达情况，为后续实验提供材料及数据。方法：在体外用含有10%胎牛血清的DEME培养基传代培养人牙髓干细胞至第三代，镜下观察细胞贴壁及生长情况。双酶切pCR4-TOPO-EGF及腺病毒穿梭载体pYr-adshuttle-1，1%琼脂糖凝胶电泳检测后分别回收EGF片段的带和线状pYr-adshuttle-1载体带，连接转化感受态大肠杆菌DH5α，并进行扩增，提取重组质粒pYr-adshuttle-1-EGF，进行酶切鉴定。将鉴定正确的重组质粒采用体外同源重组将EGF表达框亚克隆至腺病毒表达载体pAd/PL-DEST，XbaI酶切重组腺病毒载体pAd-EGF，进行酶切鉴定。用PacI酶切pAd-EGF使重组腺病毒载体线性化后转染包装细胞HEK293，包装成重组腺病毒rAd-EGF，PCR鉴定并测定病毒滴度。感染前24h取指数生长期的人牙髓干细胞根据实验目的将其分为3组：重组腺病毒rAd-EGF感染组、对照腺病毒rAd-NC阴性对照组、空白对照组，当细胞密度达到70%时，感染组和阴性对照组加入100MOI重组腺病毒或对照腺病毒，空白组加等量DEME培养液，置于37℃、5%C02培养箱中培养4小时，更换培养基为含10%胎牛血清的DMEM，培养48h后胰酶消化收集各组细胞进行Western-blot，检测基因转染后各组EGF的蛋白表达差异。结果：人牙髓干细胞在镜下成梭形或多角形，23个不等突起，生长情况良好。 pYr-ads-1-EGF经KpnI、XhoI酶切鉴定分析表明腺病毒穿梭载体pYr-adshuttle-1-EGF构建成功。pAd-EGF进行XbaI酶切鉴定和测序鉴定，确定和目的序列一致，腺病毒载体pAd-EGF构建成功。经PCR鉴定，重组腺病毒rAd-EGF包装成功。重组腺病毒rAd-EGF感染DPSC细胞48h后，Western-blot检测各组EGF的蛋白表达，结果显示重组腺病毒rAd-EGF感染组的EGF的蛋白表达水平均显着高于其他两对照组（p<0.05）。结论：体外成功培养人牙髓干细胞至第三代，细胞生长良好，增殖情况正常。酶切鉴定表明成功构建了重组腺病毒穿梭载体pYr-adshuttle-1-EGF和重组腺病毒载体pAd-EGF后，采用HEK293细胞进行腺病毒包装，最终获得重组腺病毒rAd-EGF。采用重组腺病毒rAd-EGF成功转人牙髓干细胞后，高表达EGF蛋白。说明腺病毒是一种有效的转染载体，人牙髓干细胞是一种理想的基因载体细胞，腺病毒介导的EGF基因可有效转染人牙髓干细胞。
吴桂堂[10]（2012）在《EGF与bFGF在人牙髓干细胞增殖分化中的作用》文中研究表明目的：人牙髓干细胞（human Dental pulp Stem Cells, hDPSCs）和大多数干细胞一样,具有多向分化潜能,形成新的功能细胞,从而保持牙齿组织生长和衰退的动态平衡,研究发现在牙本质的发生、牙齿的发育及牙髓损伤修复过程中均存在牙髓细胞的增殖、分化及多种生长因子的表达上调。表皮生长因子（epidermal growth factor, EGF）、碱性成纤维生长因子（basic fibroblast growth factor, bFGF）在hDPSCs增殖分化中的作用在国内外报道较少,本实验在体外分别观察EGF、bFGF以及二者共同作用对hDPSCs的增殖和分化的影响,进一步探讨EGF、bFGF促进hDPSCs增殖与分化的可能机制,从而为hDPSCs移植促进牙齿的再生提供一定的实验基础与理论依据。方法：1对冻存的hDPSCs常规细胞复苏、培养24小时,分为实验组和对照组,在实验组中将生长因子EGF、bFGF按不同浓度（5、10、20、50、100ng/ml）分别加入hDPSCs培养板孔中,对照组不加任何生长因子,每组设5个复孔,4天后采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法于波长490nm测光密度（OD）值,比较不同浓度EGF、bFGF的对hDPSCs增殖的影响,确定刺激hDPSCs增殖的最大效应浓度；2取传代培养的hDPSCs,按1×104/ml浓度接种培养,24小时后换液,将最大效应浓度的生长因子加入实验组（EGF组、bFGF组、EGF+bFGF组）中,对照组（不加任何因子）,每组设5个复孔,分别在加入生长因子后的第0、1、3、5、7d,测其OD值,分析各组hDPSCs增殖的情况；3常规复苏培养冻存的hDPSCs,实验分组同上,分别将最大效应浓度的EGF、bFGF、EGF+bFGF加入各组hDPSCs培养基中并分别于1、3、5、7、14天,测定hDPSCs的碱性磷酸酶（alkaline phosphatase, ALP）活性,进一步分析EGF、bFGF、EGF+bFGF在hDPSCs分化中的作用。4.统计分析实验结果采用SPSS17.0统计软件进行处理,实验数据均以均数土标准差（x±s）表示,P<0.05表示有统计学意义。结果：1.EGF、bFGF最大有效浓度分别为：50ng/ml、20ng/ml;2.（1）在0-7天内实验组和对照组的OD值随时间延长而增大；（2）EGF组、bFGF组在加入生长因子后OD测定值在的第0、1天与对照组相比变化不明显,差异无统计学意义（P>0.05）,第3、5、7天OD值显着增加,高于对照组,有统计学意义（P<0.05）；（3） EGF+bFGF组在加入生长因子后的第0、1天OD值与EGF、bFGF组及对照组相比变化不明显,差异无统计学意义（P>0.05）,加入生长因子后的第3、5、7天OD值均高于EGF、 bFGF组和对照组,有统计学意义（P<0.05）。3.（1）在1～14天实验组和对照组的ALP活性均随时间延长而增大；（2）EGF组和EGF+bFGF组在1、3天与对照组相比ALP活性无明显差异（P>0.05）,在第5、7、14天ALP活性高于对照组,有统计学差异（P<0.05）；（3）在1-14天bFGF组ALP活性与对照组无明显差异（P>0.05）；（4）EGF+bFGF组在加入生长因子后的第1、3天ALP活性与EGF、bFGF组相比无明显差异（P>0.05）,加入生长因子后的第5、7、14天ALP活性均高于EGF、bFGF组,但与EGF组无统计学意义（P>0.05）。结论：1生长因子EGF和bFGF最大效应浓度分别为：50ng/ml、20ng/ml;2生长因子EGF能有效促进hDPSCs增殖与分化,生长因子bFGF能促进hDPSCs增殖,对hDPSCs分化作用不明显；3EGF、bFGF在促hDPSCs的增殖可能具有相互协同或叠加的作用,而在分化方面无协同作用。
二、干细胞研究引导新革命（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、干细胞研究引导新革命（论文提纲范文）
（1）用于构建可控DNA分子网络和优化基因编辑系统的功能核酸的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 遗传基因DNA的简介 |
| 1.2 DNA纳米技术 |
| 1.2.1 DNA链替换反应 |
| 1.2.2 DNA功能化的金纳米粒子 |
| 1.3 核酸动态纳米技术与合成生物学的结合 |
| 1.3.1 CRISPR/Cas9基因编辑技术 |
| 1.3.2 核酸的动态纳米技术与CRISPR机制的结合 |
| 第二章 pH控制的可分离式DNA反应网络 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 实验材料 |
| 2.2.2 实验所用缓冲液 |
| 2.2.3 DNA复合物的制备 |
| 2.2.4 Native-PAGE表征手段 |
| 2.2.5 荧光动力学的表征 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 pH控制的可分离式DNA反应电路的设计原理 |
| 2.3.2 基于分子间CG-C+三链结构的pH可控体系 |
| 2.3.3 基于分子间TA-T三链结构的pH可控体系 |
| 2.3.4 pH控制下的双输入反应体系 |
| 2.4 本章小结 |
| 第三章 pH控制下球形核酸的可重置自组装反应 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 实验试剂及材料 |
| 3.2.2 DNA杂交双链的制备 |
| 3.2.3 SNA的制备 |
| 3.2.4 DNA功能化球形核酸(SNA-S2)的制备 |
| 3.2.5 SNA自组装的实时监测 |
| 3.2.6 可重置SNA组装实验的操作 |
| 3.2.7 SNA底物回收实验的操作 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 pH控制下的可重置自组装体系的设计原理 |
| 3.3.2 该体系的优化及其反应灵敏性 |
| 3.3.3 该体系的SNP检测 |
| 3.3.4 该体系的反应可重置性 |
| 3.3.5 反应底物SNA-S2的可回收实验 |
| 3.4 本章小结 |
| 第四章 采用5'端化学修饰双链DNA供体的高效CRISPR敲入策略 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 质粒的构建 |
| 4.2.2 双链DNA供体的制备 |
| 4.2.3 Cas9 RNP以及Cpf1 RNP |
| 4.2.4 寡核苷酸的修饰 |
| 4.2.5 细胞的培养与转染 |
| 4.2.6 流式的分析、细胞分选以及KI克隆的分离实验 |
| 4.2.7 基因组序列的PCR以及DNA的测序 |
| 4.2.8 TIDE的分析 |
| 4.2.9 液滴数字PCR实验(Droplet Digital PCR,ddPCR) |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 Cas9-RNP与双链DNA供体结合的快速基因编辑的优化 |
| 4.3.2 双链DNA供体末端化学基团的修饰 |
| 4.3.3 该体系策略下通用性的验证 |
| 4.3.4 该策略对基因编辑准确性的影响 |
| 4.4 本章小结 |
| 第五章 有效提高基因编辑精准度的短单链DNA保护sgRNA策略 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验方法 |
| 5.2.1 质粒与寡核苷酸 |
| 5.2.2 Cas9蛋白以及sgRNA的制备 |
| 5.2.3 CRISPR体外切割实验 |
| 5.2.4 EGFP蛋白稳转细胞系的制备 |
| 5.2.5 细胞的培养与转染 |
| 5.2.6 TIDE的分析 |
| 5.3 结果与讨论 |
| 5.3.1 短单链DNA保护sgRNA策略的设计 |
| 5.3.2 短单链DNA保护sgRNA策略的评估与优化 |
| 5.3.3 短单链DNA保护sgRNA策略对单碱基错配的耐受性测试 |
| 5.3.4 该策略在人类内源基因组脱靶效应的影响 |
| 5.4 本章小结 |
| 第六章 总结与展望 |
| 6.1 总结 |
| 6.2 展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果 |
（2）胰腺癌干细胞外泌体激活树突细胞用于癌症免疫治疗的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 缩略语说明（按首字母顺序） |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 肿瘤干细胞 |
| 1.2 免疫治疗 |
| 1.3 研究内容 |
| 1.3.1 立题依据 |
| 1.3.2 材料设计与课题意义 |
| 第二章 胰腺癌肿瘤干细胞来源的外泌体分离与修饰 |
| 2.1 试剂与仪器 |
| 2.1.1 实验试剂 |
| 2.1.2 实验仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 PCSCs的培养 |
| 2.2.2 PCSCs表面标志蛋白的鉴定 |
| 2.2.3 PCSCs耐药性的鉴定 |
| 2.2.4 PCSCs异种移植体内成瘤能力的鉴定 |
| 2.2.5 PCSCs表面MHC I蛋白含量的鉴定 |
| 2.2.6 PCSCs来源的外泌体分离提取 |
| 2.2.7 PCSCs来源的外泌体形貌表征 |
| 2.2.8 PCSCs来源的外泌体粒径、Zeta电位的表征 |
| 2.2.9 PCSCs来源的外泌体表面标记蛋白的鉴定 |
| 2.2.10 PCSCs来源的外泌体抗体修饰与表征 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 诱导成球能力的鉴定 |
| 2.3.2 PCSCs标志蛋白的评价 |
| 2.3.3 PCSCs耐药性的评价 |
| 2.3.4 PCSCs异种移植体内生长能力的评价 |
| 2.3.5 PCSCs表面MHC I蛋白含量的评价 |
| 2.3.6 外泌体形貌的表征结果 |
| 2.3.7 外泌体粒径、Zeta电位的表征结果 |
| 2.3.8 外泌体表面标志蛋白的表征结果 |
| 2.3.9 外泌体修饰aCD11c抗体的表征结果 |
| 2.4 本章小结 |
| 第三章 aCD11c-Exosomes体内外抗肿瘤活性的研究 |
| 3.1 试剂与仪器 |
| 3.1.1 实验试剂 |
| 3.1.2 实验仪器 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 树突细胞对外泌体摄取的测定 |
| 3.2.2 aCD11c-Exosomes靶向树突细胞的测定 |
| 3.2.3 aCD11c-Exosomes诱导树突细胞成熟的测定 |
| 3.2.4 aCD11c-Exosomes诱导T细胞成熟的测定 |
| 3.2.5 T细胞诱导PCSCs凋亡的测定 |
| 3.2.6 aCD11c-Exosomes联合GEM生物安全性的测定 |
| 3.2.7 aCD11c-Exosomes体内抗肿瘤活性的测定 |
| 3.2.8 aCD11c-Exosomes体内诱导肿瘤组织凋亡的测定 |
| 3.2.9 aCD11c-Exosomes体内影响肿瘤组织中干性标记物表达的测定 |
| 3.2.10 aCD11c-Exosomes体内影响肿瘤组织T细胞浸润的测定 |
| 3.2.11 统计学方法 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 树突细胞对外泌体摄取的评价 |
| 3.3.2 aCD11c-Exosomes靶向树突细胞的评价 |
| 3.3.3 aCD11c-Exosomes诱导树突细胞的成熟的评价 |
| 3.3.4 aCD11c-Exosomes诱导T细胞成熟的评价 |
| 3.3.5 T细胞诱导肿瘤干细胞凋亡的评价 |
| 3.3.6 aCD11c-Exosomes联合GEM生物安全性的评价 |
| 3.3.7 aCD11c-Exosomes体内抗肿瘤活性的评价 |
| 3.3.8 aCD11c-Exosomes体内诱导肿瘤组织凋亡的评价 |
| 3.3.9 aCD11c-Exosomes体内影响肿瘤组织中干性标记物表达的评价 |
| 3.3.10 aCD11c-Exosomes体内影响肿瘤组织T细胞浸润的评价 |
| 3.4 本章小结 |
| 结论与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
（3）糖尿病肾病患者血清FABP4和FOXO1水平变化的临床研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 统计学分析 |
| 4. 结果 |
| 5. 讨论 |
| 6. 总结 |
| 7. 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 间充质干细胞来源的诱导型神经干细胞的应用前景 |
| 参考文献 |
| 缩略语表 |
| 攻读学位期间发表文章情况 |
| 个人简历 |
| 致谢 |
（4）兔原始生殖细胞（PGCs）无血清无饲养层培养的研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 摘要 |
| 文献综述 |
| 1 PGCs与EG细胞,ES细胞的异同 |
| 2 原始生殖细胞的研究进展 |
| 3 原始生殖细胞的起源和发生 |
| 4 PGCs发生和发育的有关基因 |
| 4.1 Frigilis和stella |
| 4.2 Nanog |
| 4.3 其它相关基因 |
| 5 原始生殖细胞的生物学特性 |
| 5.1 原始生殖细胞的形态和生长特性 |
| 5.2 原始生殖细胞的多能性特征 |
| 6 PGCs细胞的分离培养及其影响因素 |
| 6.1 PGCs的分离纯化 |
| 6.2 胎龄 |
| 6.3 基本培养液及抗凋亡剂 |
| 7 原始生殖细胞应用的意义与前景 |
| 8 无血清无饲养层培养体系 |
| 8.1 无血清无饲养层培养基的特点 |
| 8.2 无血清无饲养层培养基的应用 |
| 8.3 无血清无饲养层培养的研究进展 |
| 试验一 兔PGCs的无血清培养 |
| 引言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.1.1 试验动物 |
| 1.1.2 主要试剂 |
| 1.1.3 主要仪器设备 |
| 1.2 主要溶液的配制与储存 |
| 1.2.1 PBS缓冲液的配制 |
| 1.2.2 消化液的配制 |
| 1.2.3 胚胎成纤维细胞培养液的配制 |
| 1.2.4 PGCs常规培养液的配制 |
| 1.2.5 PGCs无血清培养液的配制 |
| 1.2.6 1mol/L盐酸的配制 |
| 1.2.7 1mol/L氢氧化钠的配制 |
| 1.2.8 100μg/mL丝裂霉素C存储液的配置 |
| 1.2.9 双抗的分装冻存 |
| 1.2.10 KSR的分装冻存 |
| 1.2.11 冻存液 |
| 1.3 试验方法 |
| 1.3.1 REF的分离培养 |
| 1.3.2 饲养层的制备 |
| 1.3.3 兔PGCs的分离培养 |
| 1.3.4 兔PGCs的鉴定 |
| 1.3.4.1 形态学鉴定 |
| 1.3.4.2 碱性磷酸酶(AKP)染色 |
| 1.3.4.3 RT-PCR检测转录因子OCT-4的表达 |
| 1.3.5 无血清培养液对兔PGCs的影响 |
| 1.3.6 兔PGCs的传代培养 |
| 1.3.7 兔PGCs的冻存 |
| 1.3.8 兔PGCs的复苏与扩增 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 兔PGCs生长行为的观察 |
| 2.2 碱性磷酸酶(AKP)染色检测结果 |
| 2.3 RT-PCR检测 |
| 2.4 不同培养液对兔PGCs的影响 |
| 2.4.1 形态学特征 |
| 2.4.2 PGCs的细胞生长曲线 |
| 2.4.3 不同代数细胞冻存后的复苏效果 |
| 3 讨论 |
| 3.1 PGCs的分离培养 |
| 3.2 培养液的选择 |
| 3.3 PGCs的冻存与复苏 |
| 4 小结 |
| 试验二 PGCs无血清无饲养层培养方法的建立 |
| 引言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.1.1 试验动物 |
| 1.1.2 主要试剂 |
| 1.1.3 主要仪器设备 |
| 1.2 主要溶液的配制与储存 |
| 1.2.1 兔PGCs无血清培养液的配制 |
| 1.2.2 兔PGCs无血清无饲养层培养液的配制 |
| 1.2.3 PGCs常规培养液的配制 |
| 1.2.4 无血清无饲养层条件培养液的制备 |
| 1.3 试验方法 |
| 1.3.1 兔PGCs无饲养层条件培养基培养 |
| 1.3.2 兔PGCs无血清无饲养层培养 |
| 1.3.3 PGCs集落计数及集落大小评估 |
| 1.3.4 兔PGCs的鉴定 |
| 1.3.5 兔PGCs的分化性检验 |
| 1.3.6 兔PGCs的冻存 |
| 1.3.7 兔PGCs的复苏与扩增 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 无血清无饲养层培养兔PGCs形态学观察 |
| 2.2 PGCs集落记数及集落大小百分数分析 |
| 2.3 不同培养体系不同代数OCT-4基因的表达 |
| 2.4 体外拟胚体的形成 |
| 2.5 不同代数细胞冻存后的复苏效果 |
| 3 讨论 |
| 3.1 PGCs未分化性 |
| 3.2 添加细胞因子对PGCs的作用 |
| 4 小结 |
| 创新点 |
| 参考文献 |
| ABSTRACT |
（5）电子耳蜗体外刺激螺旋神经元生长发育的作用研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词 |
| 第一部分 绪论 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第二部分 人工耳蜗-石墨烯-电刺激装置的建立及鉴定 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 人工耳蜗-石墨烯-电刺激装置对螺旋神经元生长发育的作用研究 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 总结 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 博士期间课题基金项目 |
| 攻读学位期间发表论文情况 |
| 致谢 |
（6）Notch信号通路在人胚胎干细胞分化为毛细胞的无基质细胞诱导体系中的研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 内耳毛细胞的损伤与再生 |
| 1.3 基因调控毛细胞再生的研究进展 |
| 1.4 干细胞治疗神经性耳聋的研究进展 |
| 1.4.1 胚胎干细胞分化为毛细胞的研究进展 |
| 1.4.2 多能型干细胞(iPSCs)应用于毛细胞再生的前景 |
| 1.4.3 间充质干细胞分化为毛细胞的研究进展 |
| 1.4.4 内耳干细胞分化为毛细胞的研究进展 |
| 1.4.5 神经干细胞分化为毛细胞的研究进展 |
| 1.5 毛细胞体外功能再生的研究 |
| 1.5.1 再生毛细胞的前体细胞来源的研究 |
| 1.5.2 支持细胞与再生毛细胞联系的研究 |
| 1.5.3 再生毛细胞结构和功能的研究 |
| 1.6 毛细胞再生相关分子机理的研究 |
| 1.6.1 转录因子 |
| 1.6.2 生长因子 |
| 1.6.3 Notch信号通路 |
| 1.6.3.1 典型的Notch信号通路 |
| 1.6.3.2 侧向抑制作用：毛细胞vs支持细胞 |
| 参考文献 |
| 第二章 人胚胎干细胞体外诱导分化为内耳祖细胞 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 实验材料与仪器 |
| 2.2.1 实验细胞系及实验动物 |
| 2.2.2 主要实验试剂 |
| 2.2.3 常用仪器 |
| 2.2.4 常用试剂配置 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 MEF细胞的原代分离及冻存 |
| 2.3.2 MEF细胞的复苏及饲养层细胞的制备 |
| 2.3.3 胚胎干细胞的培养及传代 |
| 2.3.4 内耳祖细胞的诱导分化 |
| 2.3.4.1 拟胚体组合因子诱导法 |
| 2.3.4.2 单层贴壁诱导法 |
| 2.3.5 内耳祖细胞的鉴定 |
| 2.3.5.1 内耳祖细胞标志基因检测 |
| 2.3.5.2 内耳祖细胞特异性蛋白检测 |
| 2.3.6 统计学处理 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.4.1 MEF细胞的培养与饲养层细胞的制备 |
| 2.4.2 hESCs的培养与传代 |
| 2.4.3 拟胚体组合因子诱导法的实验结果 |
| 2.4.3.1 拟胚体的形成 |
| 2.4.3.2 拟胚体诱导9天后检测外胚层基因的表达 |
| 2.4.3.3 拟胚体贴壁培养 |
| 2.4.4 单层贴壁诱导法的实验结果 |
| 2.4.4.1 hESCs单层贴壁诱导分化的形态变化 |
| 2.4.4.2 内耳祖细胞标志基因检测 |
| 2.4.4.3 内耳祖细胞特异蛋白免疫荧光检测 |
| 2.5 讨论 |
| 2.6 本章小结 |
| 参考文献 |
| 第三章 内耳上皮祖细胞体外诱导分化为毛细胞 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 实验材料与仪器 |
| 3.2.1 实验细胞系及实验动物 |
| 3.2.2 主要实验试剂 |
| 3.2.3 常用仪器 |
| 3.2.4 常用试剂配置 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 内耳祖细胞的诱导与培养 |
| 3.3.2 鸡胚椭圆囊基质细胞的分离、培养与处理 |
| 3.3.3 内耳祖细胞向毛细胞的诱导分化 |
| 3.3.3.1 细胞爬片的预处理 |
| 3.3.3.2 内耳祖细胞向毛细胞诱导分化的步骤 |
| 3.3.4 内耳毛细胞阶段标志基因的检测 |
| 3.3.5 内耳毛细胞标志蛋白的检测 |
| 3.3.6 扫描电子显微镜的检测 |
| 3.3.7 毛细胞电生理的检测 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.4.1 内耳祖细胞体外诱导分化的形态变化 |
| 3.4.2 毛细胞的基因检测 |
| 3.4.3 毛细胞和支持细胞标志蛋白的检测 |
| 3.4.4 毛细胞静纤毛(stereocilia)和动纤毛(kinocilia)的蛋白检测 |
| 3.4.5 毛细胞的电镜检测 |
| 3.4.6 毛细胞的电生理功能检测 |
| 3.5 讨论 |
| 3.6 本章小结 |
| 参考文献 |
| 第四章 RNA干扰Notch信号调控毛细胞的体外分化 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 实验材料 |
| 4.2.1 实验细胞及质粒 |
| 4.2.2 主要实验试剂 |
| 4.2.3 常用仪器 |
| 4.2.4 常用试剂配置 |
| 4.3 试验方法 |
| 4.3.1 不同分化阶段内耳祖细胞和毛细胞样细胞的准备 |
| 4.3.2 RT-PCR法检测hESCs向毛细胞诱导分化过程中的Notch信号表达时序 |
| 4.3.3 siRNA的设计合成 |
| 4.3.4 提取质粒 |
| 4.3.5 干扰质粒瞬时转染靶细胞检测干扰效率 |
| 4.3.5.1 干扰质粒瞬时转染靶细胞 |
| 4.3.5.2 Real-Time PCR检测干扰效率 |
| 4.3.6 shRNA干扰质粒的慢病毒包装 |
| 4.3.6.1 慢病毒包装的具体操作步骤 |
| 4.3.6.2 病毒上清的收集与浓缩 |
| 4.3.6.3 病毒滴度的测定 |
| 4.3.7 慢病毒感染靶细胞 |
| 4.3.8 稳定感染细胞的鉴定 |
| 4.3.8.1 SDS-PAGE电泳 |
| 4.3.8.2 转膜 |
| 4.3.8.3 Western-blot |
| 4.3.9 感染后细胞的流式分选及GFP阳性细胞的后续培养 |
| 4.3.10 下调Notch信号配体的表达对毛细胞体外诱导分化的影响 |
| 4.3.10.1 下调Jag-1基因的表达对毛细胞体外诱导分化的影响 |
| 4.3.10.2 下调Jag-2基因的表达对毛细胞体外诱导分化的影响 |
| 4.3.10.3 下调Dll-1基因的表达对毛细胞体外诱导分化的影响 |
| 4.3.10.4 同时下调Jag-2和Dll-1基因的表达对毛细胞体外诱导分化的影响 |
| 4.3.11 统计学处理 |
| 4.4 实验结果 |
| 4.4.1 毛细胞体外诱导分化过程中Notch信号的表达时序 |
| 4.4.2 shRNA干扰质粒对目的基因mRNA的影响 |
| 4.4.3 慢病毒滴度的检测结果 |
| 4.4.4 慢病毒感染靶细胞 |
| 4.4.5 稳定感染细胞的鉴定 |
| 4.4.6 稳定感染Jag-1-shRNA2的祖细胞的流式分选 |
| 4.4.7 内耳祖细胞标志基因检测 |
| 4.4.8 内耳祖细胞特异蛋白的免疫荧光检测 |
| 4.4.9 毛细胞及支持细胞标志基因检测 |
| 4.4.10 毛细胞标志蛋白的检测 |
| 4.4.11 毛细胞的电镜检测 |
| 4.5 讨论 |
| 4.6 本章小结 |
| 参考文献 |
| 第五章 结论与展望 |
| 附录 |
（7）补肾活血法促进TGF-β2基因修饰的ADSCs向软骨细胞分化的作用和机制的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 文献综述 |
| 1 中药含药血清干预间充质干细胞增殖 |
| 2 中药含药血清干预间充质干细胞分化 |
| 3 存在的问题、前景和展望 |
| 前言 |
| 第一部分 SD大鼠脂肪来源干细胞的分离、培养、鉴定中文摘要 |
| 中文摘要 |
| 材料与方法 |
| 1 实验动物 |
| 2 主要仪器 |
| 3 主要试剂 |
| 4 主要试剂配制 |
| 5 SD大鼠ADSCs的分离、培养、传代、冻存、复苏 |
| 6 流式细胞仪鉴定细胞表型 |
| 实验结果 |
| 1 取材 |
| 2 ADSCs体外生长特征 |
| 3 ADSCs的冻存和复苏 |
| 4 第1、3、5、10代ADSCs生长曲线 |
| 5 ADSCs的表面标志鉴定结果 |
| 讨论 |
| 1 大鼠ADSCs的分离培养及生物学特性 |
| 2 ADSCs的增殖活性测定 |
| 3 ADSCs表面标记 |
| 结论一 |
| 附图（一） |
| 第二部分 ADSCs向同胚层及跨胚层细胞方向分化及鉴定中文摘要 |
| 中文摘要 |
| 材料与方法 |
| 1 实验动物 |
| 2 主要仪器 |
| 3 主要试剂 |
| 4 主要试剂配制 |
| 5 SD大鼠ADSCs的分离与传代培养 |
| 6 成脂肪诱导及鉴定 |
| 7 成骨诱导及鉴定 |
| 8 向软骨细胞诱导与鉴定 |
| 9 向神经元样细胞诱导与鉴定 |
| 实验结果 |
| 1 ADSCs的细胞形态 |
| 2 ADSCs成脂诱导分化和鉴定 |
| 3 ADSCs成骨诱导分化及鉴定 |
| 4 向软骨细胞诱导与鉴定 |
| 5 向神经元样细胞诱导与鉴定 |
| 讨论 |
| 结论二 |
| 附图（二） |
| 第三部分 补肾活血中药对脂肪干细胞生物学特性、基因转染及其向软骨细胞分化功能的影响中文摘要 |
| 中文摘要 |
| 材料与方法 |
| 1 实验动物 |
| 2 主要仪器 |
| 3 主要试剂 |
| 4 主要试剂配制 |
| 5 制备补肾活血中药水煎剂及其浓缩液 |
| 6 灌胃及提取血清 |
| 7 MTT法检测不同浓度补肾活血含药血清与去离子水含药血清对第三代ADSCs增殖的影响 |
| 8 真核表达载体pcDNA3.1(+)-hTGF beta2质粒的扩增和提取 |
| 9 脂质体转染法转染ADSCs |
| 10 构建携带hTGF beta2基因的5型复制缺陷型病毒 |
| 11 携带hTGF beta2基因的复制缺陷型腺病毒转染ADSCs以确定转染复数 |
| 12 不同剂量浓度含药血清干预携带hTGF beta2基因的复制缺陷型腺病毒转染ADSCs并向软骨细胞方向诱导分化 |
| 13 携带hTGF beta2基因的复制缺陷型腺病毒转染ADSCs并向软骨细胞方向诱导分化 |
| 实验结果 |
| 1 备补肾活血中药水煎剂及其浓缩液 |
| 2 灌胃及制备含药血清 |
| 3 MTT法检测不同浓度补肾活血含药血清与去离子水含药血清对第三代ADSCs增殖的影响 |
| 4 脂质体转染法转染ADSCs |
| 5 构建rAd5-hTGF-beta2复制缺陷型病毒并转染ADSCs |
| 6 不同剂量浓度含药血清干预携带hTGF beta2基因的复制缺陷型腺病毒转染ADSCs并向软骨细胞方向诱导分化 |
| 7 携带hTGF beta2基因的复制缺陷型腺病毒转染ADSCs并向软骨细胞方向诱导分化 |
| 讨论 |
| 结论三 |
| 附图（三） |
| 第四部分 创新点 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（8）核糖体基因区打靶载体介导FVⅢ打靶人胚胎干细胞及其定向分化研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 目录 |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 第一章 人核糖体基因区打靶载体携带FⅧ打靶hESCs |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 菌株、细胞系及实验动物 |
| 1.1.2 质粒载体 |
| 1.1.3 限制性核酸内切酶与聚合酶 |
| 1.1.4 试剂盒 |
| 1.1.5 仪器设备 |
| 1.1.6 实验试剂、耗材 |
| 1.1.7 引物 |
| 1.1.8 主要试剂配制 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 技术路线 |
| 1.2.2 质粒的制备 |
| 1.2.3 胚胎干细胞的培养 |
| 1.2.4 转染胚胎干细胞 |
| 1.2.5 基因打靶及定点整合鉴定 |
| 1.2.6 定点整合克隆hESCs特性检测 |
| 1.2.7 在定点整合hESCs中检测FⅧ的表达 |
| 1.3 结果 |
| 1.3.1 hESCs细胞培养 |
| 1.3.2 酶切鉴定及线性化pHmFⅧ质粒 |
| 1.3.3 转染并筛选抗性hESCs细胞克隆 |
| 1.3.4 鉴定定点整合hESCs |
| 1.3.5 定点整合FⅧ的hESCs核型保持正常 |
| 1.3.6 定点整合FⅧ的hESCs表达多潜能性标志物 |
| 1.3.7 定点整合FⅧ的hESCs定向心肌分化 |
| 1.3.8 定点整合FⅧ的hESCs体外具有三胚层分化能力 |
| 1.3.9 定点整合FⅧ的hESCs体内形成畸胎瘤 |
| 1.3.10 RT-PCR检测到定点整合FⅧ的hESCs外源FⅧ转录 |
| 1.3.11 ELISA检测定点整合FⅧ的hESCs中FⅧ蛋白表达量 |
| 1.4 讨论 |
| 1.5 结论 |
| 第二章 定点整合FⅧ的hESCs定向肝细胞分化 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 实验仪器 |
| 2.1.2 实验试剂、耗材 |
| 2.1.3 引物序列 |
| 2.1.4 主要试剂配制 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 技术路线 |
| 2.2.2 ET5定向肝细胞分化(ET5-Hep) |
| 2.2.3 RT-PCR鉴定ET5-Hep的特异性标志基因 |
| 2.2.4 Western blot鉴定ET5-Hep特异性标志基因 |
| 2.2.5 免疫荧光检测ET5-Hep肝细胞特异性标志基因 |
| 2.2.6 吲哚花青绿(Indocyanine Green,ICG)摄取与排泌实验 |
| 2.2.7 糖原染色实验 |
| 2.2.8 RT-PCR检测ET5-Hep中FⅧ的转录 |
| 2.2.9 ELISA检测ET5-Hep中FⅧ蛋白分泌 |
| 2.2.10 ET5-Hep核型检测 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 ET5向肝细胞分化过程中的细胞形态学变化 |
| 2.3.2 ET5-Hep中转录肝细胞标志基因 |
| 2.3.3 ET5-Hep中表达肝细胞标志蛋白 |
| 2.3.4 ET5-Hep中可定位肝细胞标志蛋白 |
| 2.3.5 ET5-Hep具有ICG摄取及排泌能力 |
| 2.3.6 ET5-Hep具备贮存糖原的能力 |
| 2.3.7 ET5-Hep转录外源FⅥⅢ |
| 2.3.8 ET5-Hep分泌外源FⅥⅢ蛋白 |
| 2.3.9 ET5-Hep核型检测结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 结论 |
| 第三章 定点整合FⅧ的hESCs定向间充质干细胞分化 |
| 3.1 材料 |
| 3.1.1 实验仪器 |
| 3.1.2 实验试剂、耗材 |
| 3.1.3 主要试剂配制 |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 技术路线 |
| 3.2.2 ET5定向间充质干细胞分化(ET5-MSCs) |
| 3.2.3 流式细胞仪分析ET5-MSCs细胞表面标志物 |
| 3.2.4 ET5-MSCs体外向成骨,成脂和软骨细胞的分化 |
| 3.2.5 RT-PCR检测ET5-MSCs中FⅧ的转录 |
| 3.2.6 ELISA检测ET5-MSCs中FⅧ蛋白分泌 |
| 3.2.7 ET5-MSCs核型检测 |
| 3.2.8 检测ET5-MSCs细胞是否致瘤 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 ET5向MSCs分化过程中的细胞形态学变化 |
| 3.3.2 ET5-MSCs冻存复苏后能保持连续传代 |
| 3.3.3 流式分析检测到ET5-MSCs表面标志物表达与BM-MSCs一致 |
| 3.3.4 ET5-MSCs的多潜能性：向成骨,成脂和软骨细胞的分化 |
| 3.3.5 ET5-MSCs转录外源FⅧ |
| 3.3.6 ET5-MSCs不能分泌外源FⅥⅢ蛋白 |
| 3.3.7 ET5-MSCs细胞核型保持正常 |
| 3.3.8 ET5-MSCs体内不具有致瘤性 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 致谢 |
（9）重组腺病毒介导的人表皮生长因子基因体外转染人牙髓干细胞的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 英汉缩略词对照表 |
| 致谢 |
| 矿化诱导剂与牙髓干细胞体外增殖及骨向分化能力(综述) |
| 参考文献 |
（10）EGF与bFGF在人牙髓干细胞增殖分化中的作用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 英文缩略词对照表 |
| 致谢 |
| 牙髓干细胞及相关生长因子(综述) |
| 参考文献 |
四、干细胞研究引导新革命（论文参考文献）
- [1]用于构建可控DNA分子网络和优化基因编辑系统的功能核酸的研究[D]. 郭宜君. 中国科学技术大学, 2020(01)
- [2]胰腺癌干细胞外泌体激活树突细胞用于癌症免疫治疗的研究[D]. 索晓敏. 河北大学, 2020(08)
- [3]糖尿病肾病患者血清FABP4和FOXO1水平变化的临床研究[D]. 李鸣. 内蒙古医科大学, 2020(03)
- [4]兔原始生殖细胞（PGCs）无血清无饲养层培养的研究[D]. 虎啸. 河南农业大学, 2018(02)
- [5]电子耳蜗体外刺激螺旋神经元生长发育的作用研究[D]. 麻晓峰. 南京医科大学, 2018(01)
- [6]Notch信号通路在人胚胎干细胞分化为毛细胞的无基质细胞诱导体系中的研究[D]. 丁洁. 浙江大学, 2015(02)
- [7]补肾活血法促进TGF-β2基因修饰的ADSCs向软骨细胞分化的作用和机制的实验研究[D]. 都爱博. 中国中医科学院, 2014(07)
- [8]核糖体基因区打靶载体介导FVⅢ打靶人胚胎干细胞及其定向分化研究[D]. 李卓. 中南大学, 2013(02)
- [9]重组腺病毒介导的人表皮生长因子基因体外转染人牙髓干细胞的研究[D]. 鲍艳. 泸州医学院, 2012(02)
- [10]EGF与bFGF在人牙髓干细胞增殖分化中的作用[D]. 吴桂堂. 泸州医学院, 2012(06)