一、多胺生物合成抑制剂DFMO在泌尿系肿瘤研究中的应用及展望(论文文献综述)
王晶[1](2017)在《芹菜素对SW620细胞葡萄糖吸收及多胺代谢的影响》文中研究说明目的:芹菜素(apigenin,API)属于黄酮类。具有抑制致癌物质的致癌活性,芹菜素主要存在于瑞香科、马鞭草科、卷柏科植物中,如芫花,卷柏中含量较大。与其他黄酮类物质(槲皮素、山奈黄酮)相比具有低毒、无诱变性等特点。结肠癌(cancer of colon)是西欧、北美等发达国家最常见的恶性肿瘤,也是我国九大常见恶性肿瘤之一。在我国,因结肠癌死亡者,男性居恶性肿瘤死亡的第5位,女性居第6位。至今5年生存率仍徘徊于50%,有效的综合治疗或适当的辅助放疗、化疗是临床日益重视的方面,但至今仍有争议,未能见到令人振奋的结果。近年来众多学者努力寻求中西医结合治疗方法来提高患者的五年生存率。多胺有促进肿瘤细胞生长的作用,对于膜的正常维持也起着重要的作用,它们带有正电荷的氨基使它们和带有负电的磷酸基的DNA和RNA结合,促进植物细胞以及动物细胞中DNA的转录和RNA的翻译;它们能和膜上的蛋白质或磷脂结合,使膜保持其稳定性。本课题以结肠癌细胞SW620为模型,研究芹菜素抑制SW620细胞多胺代谢以及摄取葡萄糖能力的作用,为结肠癌的预防和治疗提供新的思路。方法:1细胞培养按常规方法培养SW620细胞株培养于DMEM高糖培养基+ 10%FBS + 1%青链霉素双抗,于5%(φ)C02,37 C细胞培养箱内传代培养。2对SW620细胞增殖的影响以SW620细胞为研究对象,实验用10~80μmol·L-1不同浓度芹菜素作用于细胞,2.5 mmol·L-1的二氟甲基鸟氨酸(DFMO)作为阳性对照药,培养24,48,72 hr后,CCK-8法检测细胞增殖抑制情况;同时,倒置显微镜下观察细胞形态学变化。3对SW620细胞SGLT1、GLUT1表达及葡萄糖摄取的影响Real-Time PCR和Western blot检测不同浓度的芹菜素给药后SW620细胞SGLT1及GLUT1的mRNA及蛋白表达水平,葡萄糖测定试剂盒检测SW620细胞对葡萄糖摄取作用的影响。4对SW620细胞多胺含量的影响柱前衍生—高效液相色谱法(HPLC)检测不同浓度的芹菜素对细胞内多胺含量的影响。5对SW620细胞ODC/SSAT表达的影响Real-Time PCR和Western blot检测不同浓度的芹菜素给药后SW620细胞ODC及SSAT的mRNA及蛋白表达水平。6对SW620细胞活性氧含量及凋亡的影响流式细胞仪(Flow Cytometer,FCM)检测细胞内活性氧相对水平及细胞凋亡率,Hoechst33258检测细胞凋亡形态学变化。结果:1对SW620细胞增殖的抑制作用不同浓度的芹菜素处理SW620细胞后,细胞生长受到不同程度的抑制,其抑制作用呈时间和浓度依赖性,且优于DFMO(2.5mmol·L-1)组,与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。细胞培养48 h后在倒置显微镜下观察,正常对照组SW620细胞呈短梭形,细胞透明,折光性较好,胞浆丰富透亮,细胞间连接紧密,细胞密度较大,极少见悬浮的死细胞及细胞碎片。芹菜素作用48 hr后观察,大体可见细胞密度明显减少,细胞内颗粒感增强,胞体变长,细胞间隙逐渐增宽,细胞界限模糊,胞浆减少,细胞脱落呈悬浮状,可见细胞碎片,存活细胞减少。2对SW620细胞SGLT1、GLUT1表达及葡萄糖摄取的影响与对照组比较,芹菜素作用于SW620细胞24,48,72h后,SW620细胞的葡萄糖消耗量明显减少(P<0.05),当同一芹菜素浓度作用时间逐渐延长或同一作用时间芹菜素浓度逐渐升高时,其抑制SW620细胞摄取葡萄糖的作用逐渐增强,呈浓度和时间依赖性。而2.5mM的DFMO给药组对SW620细胞葡萄糖消耗有一定的影响,未见优于芹菜素。与对照组比较,GLUT1和SGLT1蛋白及mRNA随着芹菜素浓度的升高表达减少。3对SW620细胞多胺含量的影响与对照组相比,芹菜素作用于SW620细胞48hr后,细胞内的精胺含量明显减少(P<0.01,P<0.05),腐胺含量明显增加(P<0.01,P<0.05),总多胺含量呈现浓度依赖性的减少。而2.5mM的DFMO给药组作用于SW620细胞后,腐胺、精胺、精脒含量均有所减少(P<0.01)。当二者联合使用时,总多胺含量呈现出明显的减少(P<0.01)。4对SW620细胞ODC/SSAT表达的影响与对照组相比,SSAT的蛋白及mRNA随着芹菜素浓度的升高表达上调,而ODC的蛋白及mRNA水平与对照组并无显着性差异。表明芹菜素可能通过促进SSAT的表达来实现促进多胺代谢的功能,这与HPLC检测多胺含量变化的结果也是一致的。5对SW620细胞ROS含量及凋亡的影响FCM结果表明,与对照组相比,SW620细胞内的ROS含量及细胞凋亡率随芹菜素浓度的升高而增加。芹菜素作用后,晚期凋亡和坏死的细胞均明显多于对照组,且凋亡细胞数目随芹菜素的浓度增高而增加,呈现浓度依赖性。Hoechst 33258染色后可见,对照组细胞核大,核内的荧光染色浅,且亮度均一,呈淡蓝色。不同浓度的芹菜素处理后可见细胞出现凋亡,细胞数目随芹菜素浓度增大而逐渐减少,出现细胞凋亡形态学改变,包括凋亡细胞核固缩,细胞核碎裂成块状、着色深而呈亮蓝色,生成凋亡小体。结论:1对SW620细胞增殖的抑制作用芹菜素能抑制对人结肠癌细胞株SW620细胞的增殖具有抑制作用,且具有浓度和时间依赖性。芹菜素作用24、48、72hr检测发现,随着芹菜素浓度增加,对细胞的抑制作用显着增强,10μM的芹菜素作用48hr时,SW620细胞的增殖受到明显抑制,表明10μM可能是芹菜素在体外发挥药效的最低浓度。这有助于为芹菜素抗结肠癌的进一步研究及其临床用药提供药效时间的依据。2对SW620细胞SGLT1通路及葡萄糖摄取的影响葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)及钠依赖性葡萄糖转运载体(SGLT1)是目前已知体内分布最为广泛的两个葡萄糖转运体,其主要参与葡萄糖跨膜转运的正常生理过程,肿瘤细胞摄取葡萄糖增加主要通过增加GLUT1及SGLT1的跨膜转运,来实现自身对能量的高摄取。本实验通过检测SW620细胞葡萄糖消耗量,表明芹菜素作用后的SW620细胞葡萄糖消耗量均明显减少,且随着芹菜素浓度增加,其抑制SW620细胞摄取葡萄糖的作用越明显,具有剂量依赖性。与此相应,芹菜素同时也下调SW620细胞的GLUT1及SGLT1蛋白表达水平,故我们推测,芹菜素对SW620细胞的葡萄糖摄取的影响,可能是与抑制细胞增殖,调节GLUT1及SGLT1蛋白表达有关,这也可能是芹菜素抗肿瘤的作用机制之一。3对SW620细胞多胺含量的影响多胺是一类广泛分布于组织细胞内的天然小分子脂肪族物质,包括腐胺(putrescine,Put)、精脒(spermidine,Spd)和精胺(spermine,Spm),其中以精胺的活性及作用最强。多胺对哺乳动物细胞的生长,增殖及分化起到了重要的调控作用,而肿瘤组织中多胺含量远高于正常组织。本实验通过检测SW620细胞内的多胺含量,芹菜素作用后的SW620细胞精胺及精脒减少,腐胺稍有增多,总多胺含量减少,表明其促进了多胺的代谢分解,且随着芹菜素浓度增加,其促进SW620多胺代谢的作用越明显,具有剂量依赖性。4对SW620细胞ODC/SSAT表达的影响鸟氨酸脱羧酶(Ornithine decarboxylase,ODC)是多胺合成的限速酶,对多胺的胞内合成起到至关重要的调控作用,而精胺/精脒-N1-乙酰基转移酶(spermidine/spermineN1-acetyltransferase,SSAT)为多胺分解代谢的限速酶。本实验通过检测SW620细胞内的ODC及SSAT的蛋白及mRNA的表达,表明芹菜素作用后的SW620细胞SSAT蛋白及mRNA表达上调,ODC与对照组并无明显差异,这与多胺含量改变也表现一致。5对SW620细胞ROS含量及凋亡的影响多胺代谢分解过程中会产生次生代谢产物ROS,ROS的胞内积聚会诱导细胞凋亡荧光染色形态学变化来评定芹菜素对SW620细胞凋亡的影响。结果表明,芹菜素作用于SW620细胞48hr后,胞内ROS含量较对照组显着增加,同时出现细胞凋亡。这表明芹菜素通过诱导SW620细胞的多胺代谢分解从而诱导了细胞凋亡。
王晶,王桂香,陈婷,臧林泉,黎同明[2](2016)在《芹菜素对人结肠癌细胞SW620增殖与葡萄糖摄取的影响》文中研究说明目的探讨芹菜素对人结肠癌细胞SW620细胞增殖与葡萄糖摄取的影响。方法以SW620细胞为研究对象,用1080μmol·L-1不同浓度芹菜素作用于细胞,2.5 mmol·L-1的二氟甲基鸟氨酸(DFMO)作为阳性对照药,细胞以5×103个·mL-1的密度接种于96孔培养板,每组设6个复孔,分别培养24,48,72 h后,CCK-8法检测细胞增殖抑制情况;同时,取96孔板培养24,48,72 h的细胞上清液,用葡萄糖测定试剂盒检测SW620细胞葡萄糖摄取情况;细胞以2×106个·mL-1的密度接种于60 mm的中皿中,培养48 h后,Western blot及荧光定量PCR检测葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)及钠-葡萄糖共转运载体(SGLT1)及其mRNA表达水平的变化。结果与对照组比较,芹菜素各浓度组均能抑制SW620细胞的增殖,且抑制作用呈时间和浓度依赖性,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);芹菜素各浓度组作用后SW620细胞对葡萄糖的摄取明显减少(P<0.05,P<0.01);与对照组比较,GLUT1和SGLT1蛋白及m RNA随着芹菜素浓度的升高表达减少(P<0.05,P<0.01)。结论芹菜素具有抑制人结肠癌细胞SW620细胞增殖与葡萄糖摄取的作用,这为结肠癌的治疗提供了新的思路和方法。
王敏[3](2016)在《LSD1介导前列腺癌侵袭、转移的机制研究》文中研究指明赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶(Lysine specific demethylase 1,LSD1)属于单胺氧化酶家族,它的活性依赖于黄素腺嘌呤二核苷酸(Flavin adenine dinucleotide,FAD),能够特异性使单甲基化和二甲基化H3K4和H3K9位点上的甲基基团去除,从而调节靶基因的转录活性。染色质是真核细胞遗传物质的载体。核小体是构成它的基本结构单位,是由DNA和组蛋白共同构成的。每个组蛋白通常含有一个由核小体DNA包绕形成的球形芯和一个N-末端尾部,N-末端尾的核心/DNA结构域受到多种翻译后修饰的调节,例如乙酰化、磷酸化、甲基化和泛素化等。在2004年以前,人们一直认为组蛋白的乙酰化、磷酸化和泛素化等都是可逆的,但是组蛋白甲基化是不可逆的,而第一个组蛋白去甲基化酶LSD1的出现改变了人们的这一观点。LSD1在哺乳动物的发育过程中发挥着至关重要的作用,它参与许多生物学过程,如细胞分化、基因活化和基因抑制等。研究发现,LSD1在多种肿瘤中表达增高,也包括前列腺癌。在前列腺癌中,LSD1通过影响细胞转录、DNA甲基化和P53的功能,来促进肿瘤形成。LSD1的高表达不仅预示着前列腺癌的术后可能复发率增高,还预示着疗效差。第一部分LSD1和E-cadherin在前列腺癌中的表达关系目的:为了探讨LSD1和E-cadherin在前列腺癌中的表达、两者之间表达关系以及它们跟前列腺癌预后的联系。方法:用免疫组织化学方法检测LSD1和E-cadherin在良性前列腺增生组织和前列腺癌组织中的表达,然后用相关性分析分析LSD1和E-cadherin两者之间的表达关系。同时,我们用或不用LSD1抑制剂优降宁处理雄激素依赖性前列腺癌细胞株LNCap,然后用免疫印迹的方面检测优降宁处理前后LNCap细胞内LSD1和E-cadherin的表达水平。结果:跟良性前列腺增生组织比较,LSD1在前列腺癌组织中表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);同时,LSD1在前列腺癌中的表达跟Gleason评分、远处转移和预后不良呈明显正相关(P<0.05)。然而,跟良性前列腺增生组织比较,E-cadherin在前列腺癌组织中表达明显减少,差异有统计学意义(P<0.05);同时,E-cadherin在前列腺癌中的表达跟Gleason评分、远处转移和预后不良呈明显负相关(P<0.05)。我们进一步用相关性分析分析LSD1和E-cadherin两者之间在良性前列腺增生组织和前列腺癌组织中的表达关系发现,两者呈明显的负相关(rs=-0.486, P=0.001)。LSD1高表达和E-cadherin氐表达预示前列腺癌患者两年内更容易进展为去势抵抗性前列腺癌以及较低的五年生存率(P<0.05)。另外,我们的细胞实验发现,用优降宁抑制LNCap细胞内LSD1活性,可以上调E-cadherin蛋白的表达水平。结论:LSD1在前列腺癌中高表达,并跟Gleason评分、远处转移和预后不良呈正相关;而E-cadherin在前列腺癌中低表达,并跟Gleason评分、远处转移和预后不良呈负相关。LSD1和E-cadherin的表达在前列腺癌组织中呈负相关。LSD1高表达联合E-cadherin低表达可能能作为判断前列腺癌进展和转移的一个标志。抑制LSD1活性可能为治疗前列腺癌提供新的治疗方向。第二部分LSD1抑制剂优降宁抑制前列腺癌EMT发生并延缓前列腺癌的进展目的:探讨LSD1在前列腺癌上皮间质转化过程以及向去势抵抗性前列腺进展中发挥的作用。方法:首先,我们用优降宁处理激素依赖性前列腺癌细胞株LNCap进行体外实验,用免疫印迹的方法检测H3K4me1、H3K4me2、H3K9me1、H3K9me2、 AR、PSA、E-cadherin、N-cadherin和Vimentin等蛋白的表达水平;用免疫荧光的方法检测优降宁处理前后LNCap细胞E-cadherin的表达改变;用transwel细胞侵袭和迁移实验检测优降宁处理前后LNCap细胞的侵袭能力改变。另外,我们用NOD/SCID小鼠皮下种植LNCap细胞建立皮下肿瘤模型,再切除小鼠的双侧睾丸建立去势抵抗性前列腺癌模型;用免疫印迹的方法检测LSD1、H3K4me1、 H3K4me2、H3K9me1、H3K9me2、AR、PSA、E-cadherin、N-cadherin和Vimentin等蛋白的表达水平;观察优降宁处理对肿瘤生长的影响和对去势后小鼠血清PSA变化的影响。结果: 在体外,优降宁降低LNCap细胞的侵袭和迁移能力;优降宁处理LNCap细胞后抑制LSD1功能,减少H3K4me1、H3K4me2、H3K9me1、 H3K9me2的表达;优降宁处理LNCap细胞后不改变AR的表达,但是减少PSA的表达;优降宁处理LNCap细胞后,增加E-cadherin蛋白的表达,同时减少N-cadherin蛋白和Vimentin蛋白的表达,从而抑制上皮基质转化过程。在动物模型体内实验,LSD1蛋白的表达随着前列腺癌向激素抵抗性前列腺癌进展而增加;优降宁处理小鼠后抑制LSD1功能,减少H3K4me1、H3K4me2、H3K9me1、 H3K9me2的表达;优降宁处理小鼠后不改变AR的表达,但是减少PSA的表达;优降宁处理小鼠后,增加E-cadherin蛋白的表达,同时减少N-cadherin蛋白和Vimentin蛋白的表达,从而抑制上皮基质转化过程。结论:抑制LSD1功能能够抑制前列腺癌的侵袭、转移能力,抑制上皮基质转化过程,LSD1抑制剂也许可以作为抗雄激素治疗治疗局部进展性前列腺癌和转移性前列腺癌的的辅助治疗。
夏韩[4](2016)在《血清氨基酸作为肾透明细胞癌诊断标记物的研究》文中研究表明目的:研究肾透明细胞癌患者术前血清与健康人血清中氨基酸的差异及临床意义。方法:采用高效液相色谱法测定140例肾透明细胞癌患者及140例健康人的17种血清氨基酸的变化水平,通过组间均值比较和Logistic逐步回归分析筛选出有效指标,并通过ROC曲线判断其中的诊断价值。测量肾癌组肿瘤标本的体积,分析肾癌组血清氨基酸代谢含量与肿瘤体积的相关性。同时通过组间均值比较分析汉族与维吾尔族肾癌患者间的差异氨基酸,并运用ROC曲线评价差异氨基酸的诊断价值。结果:(1)与健康人相比,肾癌患者血清存在明显的氨基酸代谢异常。其中天冬氨酸、甘氨酸、组氨酸、精氨酸、苏氨酸、丙氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸和赖氨酸含量较健康人呈明显下降趋势,并且其差异具有统计学意义(P<0.05)。(2)其中2项血清肿瘤标记物脯氨酸与酪氨酸入选Logistic回归方程,对应的曲线下面积分别为0.686、0.877。(3)汉、维两族肾透明细胞癌患者除谷氨酸外,其余氨基酸含量均降低,且差异具有统计学意义(P<0.05)。两族肾透明细胞癌患者之间存在差异的氨基酸为天冬氨酸、甘氨酸及酪氨酸。三种差异氨基酸对应的汉族ROC曲线下面积为0.536、0.812及0.814,对应的维族ROC曲线下面积为0.676、0.804及0.876。(4)肾透明细胞癌患者血清氨基酸中谷氨酸、脯氨酸、酪氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、亮氨酸、异亮氨酸及苯丙氨酸与肿瘤体积呈负相关(P<0.05)。结论:(1)单项血清氨基酸指标中以酪氨酸的AUCROC最大,诊断价值最高。联合检验脯氨酸与酪氨酸可相应的提高对肾透明细胞癌诊断的灵敏度与特异度。(2)汉族肾透明细胞癌患者与维族肾透明细胞癌患者之间有差异的的血清氨基酸为天冬氨酸、甘氨酸及酪氨酸。其中两民族均以络氨酸的AUCROC最大,诊断价值最高。(3)肾癌在其生长过程中与某些特定氨基酸关系密切,这为肾癌的氨基酸失衡处理提供实验和理论依据。肾癌血清氨基酸较之正常人具体变化的发现,对进一步研究其发生机理以及临床特异性标记物的研究有重要意义。
陈婷,王桂香,潘雪刁,王晶,黎同明[5](2015)在《精脒对Caco-2细胞生长及摄取葡萄糖能力的影响》文中提出目的研究精脒(SPD)及多胺合成特异性抑制剂二氟甲基鸟氨酸(DFMO)对Caco-2细胞生长及摄取葡萄糖能力的影响。方法取对数生长期结肠癌Caco-2细胞,分为对照组、DFMO组和SPD+DFMO组进行培养,MTT法检测细胞的生长,葡萄糖测定试剂盒和荧光标记2-脱氧葡萄糖(2-NBDG)检测Caco-2细胞葡萄糖摄取和消耗的情况,Western blot检测DFMO和SPD+DFMO对Caco-2细胞葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)表达的影响。结果 DFMO作用24、48、72 h对细胞生长有明显抑制作用,SPD+DFMO组对Caco-2细胞生长有促进作用,同时SPD能够改善DFMO抑制Caco-2细胞摄取葡萄糖的作用,荧光显微镜下观察到SPD+DFMO组荧光强度增强,Western blot结果显示,DFMO可抑制GLUT1蛋白的表达,SPD+DFMO组Caco-2细胞GLUT1蛋白随着SPD浓度升高表达增加。结论 SPD在一定浓度范围内可以逆转DFMO引起的Caco-2细胞增殖的抑制,促进葡萄糖摄取。
徐春晓[6](2010)在《肿瘤抑素基因表达与肾癌关系以及鸟氨酸脱羧酶基因表达对肿瘤抑素表达调控作用的研究》文中认为肿瘤是一类常见病、多发病,其中恶性肿瘤是目前危害人类健康最严重的一类疾病。在我国,随着人口老龄化,肿瘤的发病率和死亡率呈上升趋势。近年来,虽然肿瘤治疗已取得一些突破性进展,但由于肿瘤发病因素的多样性和肿瘤细胞的复杂性,肿瘤治疗仍是全球面临的一项难题。1971年Folkman提出“肿瘤的生长和转移依赖于新生血管的形成”,随后肿瘤抗血管生成疗法成为研究热点。肿瘤抑素(tumstatin)是继血管抑素(angiostatin)和内皮抑素(endostatin)之后新发现的基底膜来源的肿瘤血管生成抑制因子;来源于Ⅳ型胶原α3链的C末端,由244个氨基酸组成,分子量为28kD。肿瘤抑素不但能够抑制血管内皮细胞增殖,诱导内皮细胞凋亡,进而抑制血管生成,从而抑制肿瘤生长;而且能够直接抑制肿瘤细胞增生,促进肿瘤细胞凋亡。在几种内源性血管生成抑制剂(angiostatin,endostatin,canstatin,restin,tumstatin)中,肿瘤抑素具有最强的抗血管生成效应,呈现良好的应用前景。肾癌是最常见的一种肾实质肿瘤,其发病率在泌尿系肿瘤中占第二位,病因尚不清楚。目前肾癌的根治首选手术治疗,术后五年存活率为40%:而放疗和化疗只能作为辅助治疗方法,不能使肿瘤彻底控制。这些传统的治疗方法在治疗肿瘤的同时也损害机体正常的组织细胞,而肿瘤抗血管生成疗法只抑制病理性的肿瘤血管生成,不影响机体正常的血管生成,有望成为治疗肿瘤的有力武器之一。肿瘤抑素主要分布于肾小球基底膜,肺泡血管基底膜等,其与肾癌的关系尚未见报道。本文从组织和细胞水平研究了肿瘤抑素基因表达与肾癌的关系,并构建了肿瘤抑素真核表达载体以探讨其用于基因治疗的可行性。鸟氨酸脱羧酶(ornithine decarboxylase, ODC)能催化鸟氨酸脱羧生成腐胺,是多胺合成途径中的第一个限速酶。现已发现在多种人类癌细胞和组织中ODC含量及活性明显升高,其与细胞转化、肿瘤侵袭和血管生成有关。为验证ODC过表达是否通过影响肿瘤抑素的表达来调控血管生成,本文首先检测了ODC和肿瘤抑素在肾组织和细胞中表达的相关性,然后筛选出含ODC过表达载体的HEK293细胞株,从mRNA、蛋白质、细胞增殖、启动子水平检测了ODC对肿瘤抑素表达的调控作用。研究结果表明ODC过表达能够抑制肿瘤抑素的表达,提示肿瘤组织中ODC过表达抑制肿瘤抑素的表达,是其促进血管生成的机制之本研究过程中需要肿瘤抑素抗体,但课题开始时肿瘤抑素抗体尚未商品化,故本文首先构建了肿瘤抑素原核表达载体,在大肠杆菌中进行了高效表达,表达的包涵体蛋白经变性、纯化、复性后免疫小鼠,制备鼠抗人肿瘤抑素多克隆抗体,经ELISA和western blot验证其能够与肿瘤抑素特异性结合。这为本文的完成提供了实验材料,为后续研究奠定了基础。第一部分人肿瘤抑素原核表达载体的构建、表达、纯化及其多克隆抗体的制备[目的]构建人肿瘤抑素基因原核表达载体,诱导表达后纯化获得重组人肿瘤抑素融合蛋白,制备鼠抗人肿瘤抑素抗体,为后续研究奠定基础。[方法]1.RT-PCR扩增肿瘤抑素的编码序列,TA克隆后NcoI、XhoI双酶切回收目的片段,插入到原核表达载体pTriEx-4中,构建重组表达质粒pTriEx-tumstatin。2.将pTriEx-tumstatin表达质粒转化大肠杆菌E.coli JM109(DE3), IPTG诱导肿瘤抑素融合蛋白表达,SDS-PAGE电泳鉴定表达产物。3.根据亲和层析原理,采用Ni SepharoseTM 6 Fast Flow纯化出重组人肿瘤抑素蛋白,透析复性,PEG8000浓缩,SDS-PAGE及western blot鉴定纯化产物。4.纯化的肿瘤抑素融合蛋白与免疫佐剂混合,作为免疫原,免疫小鼠,取血清制备鼠抗人肿瘤抑素多抗;ELISA及western blot测定抗血清的效价及特异性。[结果]1.RT-PCR扩增出肿瘤抑素编码序列(735bp)。2.重组表达质粒pTriEx-tumstatin构建成功,酶切鉴定及DNA序列分析证明该质粒含有肿瘤抑素全部编码序列,开放阅读框架正确。3. pTriEx-tumstatin转化入JM109(DE3)诱导表达,表达产物经纯化、复性、浓缩,SDS-PAGE及western blot鉴定,分子量约为30kD,与预期结果相符。4.制备出鼠抗人肿瘤抑素多克隆抗体,并测定了其效价及特异性。[结论]成功构建了含有人肿瘤抑素基因编码序列的原核表达载体pTriEx-tumstatin,并在E.coli JM109(DE3)中高效表达,经Ni SepharoseTM 6 Fast Flow纯化得到肿瘤抑素融合蛋白;以其为免疫原制备鼠抗人肿瘤抑素多抗,为后续的研究工作奠定了基础。第二部分肿瘤抑素基因表达与肾癌关系的研究[目的]检测肿瘤抑素在肾癌组织和细胞中的表达水平;构建人肿瘤抑素基因真核表达载体,观察其对血管内皮细胞及肾癌细胞增殖的作用。[方法]1.半定量RT-PCR和western blot分别检测肾癌标本中肿瘤抑素mRNA和蛋白的表达情况。2.半定量RT-PCR和western blot检测肾癌细胞(ACHN)和正常肾细胞(HEK293)中肿瘤抑素mRNA和蛋白的表达差异。3.构建含肿瘤抑素基因的真核表达质粒(pcDNA-tumstatin),酶切鉴定并测序分析。4.以脂质体LipofectamineTM 2000介导重组质粒pcDNA-tumstatin转染血管内皮细胞ECV304和人肾癌细胞ACHN,RT-PCR及western blot鉴定其在这两种细胞中的表达情况。5.用CCK-8细胞活性检测法检测pcDNA-tumstatin转染后对ECV304和ACHN细胞增殖的影响。6.流式细胞术检测pcDNA-tumstatin转染ECV304细胞后对细胞周期分布的影响,western blot检测肿瘤抑素基因表达对细胞周期调节蛋白cyclin D1表达的影响。[结果]1.肾组织标本中肿瘤抑素mRNA和蛋白的表达丰度以均数±标准差表示,结果显示:肾癌组织中肿瘤抑素mRNA和蛋白的表达量明显低于正常肾组织中的表达量(P<0.05)。2.RT-PCR和western blot结果显示:肾癌细胞ACHN中肿瘤抑素mRNA和蛋白的表达量明显低于胚肾HEK293细胞中的表达量(P<0.05)。3.经限制性内切酶酶切鉴定,pcDNA-tumstatin中肿瘤抑素基因片段大小符合;DNA测序显示序列及插入方向正确。4.RT-PCR及western blot结果显示pcDNA-tumstatin能够在血管内皮细胞ECV304和肾癌细胞ACHN中表达。5. pcDNA-tumstatin转染后可明显抑制血管内皮细胞ECV304的增殖,而对肾癌细胞ACHN的增殖无影响。6.流式细胞术结果显示pcDNA-tumstatin转染的ECV304细胞周期阻滞在G1期;western blot结果显示肿瘤抑素基因表达抑制G1期主要的细胞周期蛋白cyclin D1的表达。[结论]肾癌组织和细胞中肿瘤抑素mRNA和蛋白表达下调,表明肿瘤抑素的表达变化可能与肾癌的进展有关。真核表达载体pcDNA3.1(+)介导的肿瘤抑素过表达可特异性抑制血管内皮细胞增殖,诱导其细胞周期阻滞于G1期,并且该阻滞作用与细胞周期蛋白cyclin D1表达下调有关,初步证实肿瘤抑素可作为肾癌治疗的治疗剂,并通过基因治疗手段来持续给药。第三部分鸟氨酸脱羧酶基因表达对肿瘤抑素表达调控作用的研究[目的]构建鸟氨酸脱羧酶过表达载体pcDNA-ODC;建立ODC过表达的HEK293细胞株;研究ODC基因表达对肿瘤抑素表达的调控作用。[方法]1.半定量RT-PCR检测肾癌组织中ODC和肿瘤抑素的表达情况。2.半定量RT-PCR和western blot检测癌细胞(肾癌细胞ACHN和肺癌细胞A549)中ODC和肿瘤抑素的表达情况。3.构建含ODC基因的过表达质粒pcDNA-ODC,酶切鉴定并测序分析。4.重新转化与ODC基因翻译起始位点互补的ODC反义真核表达质粒pcDNA-ODCr,酶切鉴定并测序分析。5.以脂质体LipofectamineTM 2000介导pcDNA3.1质粒和pcDNA-ODC重组质粒分别转染人胚肾细胞HEK293,利用G418进行筛选,3-4周后,挑取单克隆、消化接种后继续培养建立稳转细胞株,并以western blot鉴定。6.实验分为5组,分别为:PBS组、pcDNA3.1空载体稳转组、pcDNA-ODC稳转组、pcDNA-ODC与pcDNA-ODCr共转染组和腐胺处理组。分别提取各组HEK293细胞总蛋白,western blot检测ODC和肿瘤抑素蛋白的表达情况。7.分别提取上述五组细胞总RNA,半定量RT-PCR检测ODC和肿瘤抑素mRNA的表达情况。8.构建肿瘤抑素启动子的荧光素酶报告基因质粒(pGL-tumstatin2.2kb和pGL-tumstatin0.5kb),利用脂质体将pGL-tumstatin2.2kb质粒与内参照质粒pRL-TK共转染上述五组细胞,荧光素酶报告基因分析检测启动子活性。9.获取上述五组细胞的条件培养基,作用于血管内皮细胞ECV304,CCK-8检测其对血管内皮细胞增殖的影响。[结果]1.半定量RT-PCR结果显示:38例肾癌标本中,有32例ODC mRNA是过表达的;在这32例ODC过表达的标本中有24例肿瘤抑素mRNA的表达量低于正常组织中的表达量。统计学分析ODC过表达与肿瘤抑素表达下调有关。2.半定量RT-PCR和western blot结果显示:肾癌细胞ACHN、肺癌细胞A549中ODC mRNA和蛋白的表达量明显高于相应的正常细胞(人胚肾细胞HEK293和人胚肺细胞HELF),而肿瘤抑素mRNA和蛋白的表达量明显低于相应的正常细胞。统计学分析二者存在相关性。3.经限制性内切酶和DNA测序鉴定,pcDNA-ODC质粒中,ODC基因片段大小符合,插入方向和序列正确。4.经酶切鉴定和测序分析,所转化的pcDNA-ODCr质粒,目的片段基因序列及插入方向正确,说明所转化的pcDNA-ODCr质粒是携带与ODC翻译起始位点互补的基因序列的ODC反义真核表达质粒。5.RT-PCR和western blot结果显示:筛选到的含pcDNA-ODC质粒的细胞能够高水平表达ODC。6.RT-PCR和western blot结果显示:相对于空白对照组和空载体组,pcDNA-ODC稳转组中ODC mRNA和蛋白的表达量明显升高,在转染pcDNA-ODCr的pcDNA-ODC稳转细胞组中ODC mRNA和蛋白的表达量接近空白对照组,腐胺处理组中ODC表达无明显变化;而肿瘤抑素mRNA和蛋白的表达量在pcDNA-ODC稳转组和腐胺处理组中明显下降,转染pcDNA-ODCr的pcDNA-ODC稳转细胞组中肿瘤抑素mRNA和蛋白的表达量恢复至正常水平。RT-PCR结果显示:各处理组中血管内皮生长因子VEGF mRNA的表达量保持不变。7.构建了肿瘤抑素基本启动子(2149bp)和已报道的共用启动子(530bp)的荧光素酶报告质粒(pGL-tumstatin2.2kb和pGL-tumstatin0.5kb),荧光素酶报告基因分析结果显示两者都具有启动子活性,其中pGL-tumstatin2.2kb活性明显,故选择该报告质粒进行下一步实验。结果显示ODC过表达和外源性腐胺的给予可抑制肿瘤抑素启动子活性,抑制率分别为45.8%、45.2%。8.培养的血管内皮细胞ECV304中加入从各处理组获得的条件培养基继续培养18h后用CCK-8检测,结果显示:与PBS处理组相比,来自pcDNA-ODC稳转组和腐胺处理组的条件培养基能够诱导1.41±0.07、146±0.07倍的血管内皮细胞增殖;而来自空载体稳转组和pcDNA-ODCr转染的pcDNA-ODC稳转细胞组的条件培养基对血管内皮细胞增殖无明显影响。[结论]成功构建了ODC过表达的真核表达质粒pcDNA-ODC,并筛选出能够高表达ODC的人胚肾HEK293细胞株;ODC基因过表达和外源性腐胺的增加能够抑制肿瘤抑素基因的表达,从而使血管内皮细胞增殖加快,提示ODC过表达可能通过抑制肿瘤抑素表达而促进血管生成。全文摘要总结本课题成功构建了肿瘤抑素的原核表达载体pTriEx-tumstatin,并在大肠杆菌E.coli JM109(DE3)中高效表达了带有His.tag的融合蛋白,其纯化后作为免疫原,制备出鼠抗人肿瘤抑素多抗;利用该抗体研究发现肾癌组织和细胞中肿瘤抑素的表达量明显低于其在正常肾组织和细胞中的表达量,提示肿瘤抑素基因表达下调与肾癌的进展有关。利用表达肿瘤抑素的真核表达载体pcDNA-tumstatin,体外证明其能够特异性抑制血管内皮细胞增殖,从而抑制肿瘤生长。进一步分子机理研究证明,肿瘤抑素过表达可能是通过抑制细胞周期蛋白cyclin D1基因表达而使血管内皮细胞增殖停滞于G1期,为肾癌基因治疗研究提供了理论依据。鸟氨酸脱羧酶(ODC)是多胺合成途径中的第一个限速酶。ODC过表达能够促进血管生成。肾癌组织和细胞中ODC的表达升高,而肿瘤抑素的表达下降,者有相关性。利用含ODC过表达载体的稳转细胞,进一步研究证明ODC基因过表达和腐胺水平增加能够抑制肿瘤抑素表达,从而使血管内皮细胞增殖加快,提示ODC过表达可能通过抑制肿瘤抑素表达而调控血管生成。
袁林[7](2009)在《抑癌基因TSLC1对人前列腺癌T3B细胞增殖、侵袭和转移能力影响的实验研究》文中认为目的:(1)建立稳定表达肺癌抑癌基因—1(TSLC1)的人前列腺癌T3B细胞系并对其进行鉴定;(2)探讨TSLC1基因对人前列腺癌T3B细胞增殖和侵袭的生物学特性影响;(3)研究TSLC1对人前列腺癌T3B细胞成瘤和转移能力的影响。方法:(1)脂质体转染的方法将pCI-TSLC1质粒稳定转染至T3B细胞系,经克隆化培养以及G418筛选,建立了稳定表达TSLC1蛋白的细胞系。分别从核酸和蛋白水平对转染进行鉴定,并对其细胞纯度、遗传稳定性等生物学特性进行鉴定。(2)以稳定表达外源基因TSLC1的人前列腺癌T3B细胞为实验组,以转染空质粒pCI-neo的T3B细胞为对照组,野生型T3B细胞为空白组。MTT法检测细胞增殖,FACSort流式细胞仪检测细胞周期,AnnexinV/PI双染法检测细胞凋亡情况,Tanswell法检测细胞体外侵袭能力,细胞划痕实验检测细胞迁移能力。(3)将培养的实验组、对照组、空白组三组肿瘤细胞分别以4.0×106/200μL浓度注入裸鼠皮下,观察各组成瘤情况。按上述分组以4.0×106/200μL浓度进行尾静脉注射观察建立转移模型。将三组细胞分别以2.0×106/10μL进行骨原位注射建立骨转移瘤模型,观察各组骨转移率。结果:(1)成功获得高表达TSLC1的稳定细胞系,核酸和蛋白水平鉴定都说明TSLC1基因成功整合到细胞基因组中。生物学性状研究结果表明该转基因细胞系纯度好,遗传性状稳定。(2)与对照组和空白组相比,实验组细胞株细胞生长速度减慢,增殖受到明显抑制;实验组细胞周期发生了明显的G0/G1期阻滞;实验组细胞早期凋亡率、晚期凋亡率和总凋亡率均明显升高(P<0.01);体外侵袭和迁移能力受到较大抑制(P<0.05)。(3)实验组皮下瘤出现明显晚于对照组和空白组,而且瘤体也明显小于对照组和空白组(P<0.01);尾静脉注射注射后实验组体内肺转移形成时间晚,转移灶数目少;实验组的骨转移率为20%,明显低于对照组(100%)和空白组(100%),P<0.05。结论:(1)成功建立了稳定表达TSLC1的T3B细胞系,该细胞系遗传性质稳定,为进一步研究TSLC1在前列腺癌中发挥的作用奠定了基础。(2) TSLC1基因能明显抑制T3B细胞的增殖和侵袭,并诱导细胞发生凋亡。(3) TSLC1基因明显抑制T3B细胞的成瘤和转移能力。
兰晓煦,武进峰[8](2006)在《多胺生物合成抑制剂二氟甲基鸟氨酸对人膀胱癌细胞的抑制及促凋亡作用研究》文中指出目的探讨多胺生物合成抑制剂二氟甲基鸟氨酸(DFMO)对人膀胱癌EJ细胞的抑制作用。方法应用细胞培养、活细胞摄影技术、伊红染色细胞计数和原位DNA片段末端标记,观察DFMO抑制人膀胱癌EJ细胞的增生及诱导其凋亡。结果活细胞摄像结果显示:与空白对照组相比4,6,8mmol/LDFMO给药第5天,细胞生长明显抑制,随DFMO剂量增大,上述变化逐渐明显。伊红染色结果显示:4,6,8mmol/L的DFMO均可抑制EJ细胞生长,并随剂量的增加,抑制作用逐渐增强。原位DNA片段末端标记结果显示:4,6,8mmol/LDFMO均可诱导EJ细胞凋亡;6mmol/L为较适宜剂量;3种检测方法均显示同时加入外源性腐胺(Pu)后,EJ细胞的凋亡与对照组无明显差别。结论DFMO可以抑制膀胱癌EJ细胞的增生并诱导其凋亡。
周一峰[9](2005)在《植物源食品多胺分析及影响因素的研究》文中研究表明多胺包括腐胺(Putrescine,Put)、亚精胺(spermidine,Spd)、精胺(Spermine,Spm)等,广泛存在于动植物细胞中,行使一系列生理功能。植物源食品多胺是人体多胺库重要组成部分,与人类健康有密切的关系,因而分析植物(包括种子、果实)多胺含量,研究外界因素对植物多胺含量影响就可为人类食品安全和健康提供有价值的资料。本文测定了部分植物多胺含量,分析了储藏和FACE(Free Air Carbon-dioxide Enrichment)条件对2个水稻品种籽粒多胺含量影响,研究了盐渍和不同矿质营养水平对不同品种小白菜多胺的影响,同时初步研究了多胺对小鼠肿瘤的影响。主要结果如下: 1.改进并建立了两种可以同时检测植物组织腐胺、二胺基丙烷、尸胺、亚精胺、精胺5种多胺组分的色谱方法。两法相比,TLC(薄层层析)方法简单方便,HPLC(高效液相色谱)快速准确。 2.在多胺对两种荷瘤(荷S180和荷Heps瘤)小鼠影响的研究中,发现每天摄入100nmolSpd明显增加了小鼠肿瘤重量。 3.对水果和某些植物药材中的多胺含量进行了测定,结果显示,所测水果多胺含量中,游离态多胺比例很大(>70%)。圣女果、芸香科水果(蜜桔、柚子、橙等)、香蕉含有相当高的Put及多胺总量,而蔷薇科水果(桃、苹果、梨、李)等多胺含量较低;不同水果间多胺总量及组分存在很大差异。与水果相比,中药的多胺含量通常较低;游离态、结合态、束缚态三种形态间比例以及多胺组分含量因不同种类存在普遍差异;同时发现炮制方法对游离态多胺及多胺总量有一定的影响。 4.以IR24(International Rice24,籼稻)和ASO(Asominori,粳稻)水稻籽粒为材料,分析了储藏时间和FACE条件对多胺含量的影响。结果表明,IR24的多胺总量高于ASO;干燥储藏和FACE条件均对两个水稻品种的游离态多胺总量影响不显着,但是干燥储藏和FACE条件分别使IR24和ASO中的结合态和束缚态多胺含量显着下降,从而使它们多胺总量降低。 5.盐处理结果表明小白菜品种苏州青、上海青、矮脚黄对盐较敏感,而矮抗青和四月慢比较耐盐。选用耐盐品种四月慢和不耐盐品种苏州青作为试验材料进一步用水培方法分析了盐胁迫对其多胺含量影响,结果表明50mmol/LNaCl处理苏州青中各形态多胺和多胺总量影响均显着下降,而对四月慢影响不大。因而盐胁迫小白菜对多胺
丁军[10](2005)在《合成精胺盐酸盐新方法的研究》文中研究表明多胺是维持细胞正常生理功能不可缺少的一类多阳离子脂肪族胺,是广泛分布于原核生物和真核生物中的生物活性物质。精胺是多胺的一种,在生命体的新陈代谢中有着重要作用,在DNA的生物合成、RNA的转录过程以及蛋白质的合成及在细胞的增殖与分化中,精胺都是必不可少的物质。其合成研究也有不少报道,但是新颖方法较少。我们在充分研究文献的基础上,设计了以廉价的糖精为原料合成精胺盐酸盐的新路线。用1,4-二氯丁烷将糖精烃基化,制备得1,6-二(邻酰基苯磺酰基)-1,6-二氮杂己烷(I)研究了影响烃基化反应的各种因素如催化剂、投料比、温度、脱水效果、投料方式等对反应的影响。结果表明优化的反应条件是在催化剂用量约糖精的1/10(质量比)或1,2-二氯丁烷的1/5(摩尔比)时,在充分脱水的条件下,以糖精/二氯丁烷=2.5的投料比投料,于110°C下反应6小时,产品收率可达96.5%。然后将所得烃基化产物1,6-二(邻酰基苯磺酰基)-1,6-二氮杂己烷(I)在10%的氢氧化钠水溶液中水解得到N,N’-二(邻羧基苯磺酰基)-1,4-丁二胺(II),这一步反应收率约为91.8%。(II)再与丙烯腈进行Michael加成反应,生成4,9-二(邻-羧基苯磺酰基)-4,9-双氮杂十二二腈(III),通过研究影响Michael加成反应的各种因素如反应温度、投料比、反应时间、氢氧化钠浓度等,确定了理想的反应条件是在5%的氢氧化钠溶液中,丙烯腈/ II(摩尔比)=6,于15℃左右反应10小时,产品收率可达到83.2%。在双催化剂(Raney Ni—Pd/C)存在下,(III)催化加氢生成5,10-二(邻-羧基苯磺酰基)-1,5,10,14-四氮杂十四烷(IV)。通过对影响催化加氢的各种因素如催化剂、反应温度、溶剂及溶剂的pH等进行分析,确定较佳条件为:Pd/C用量为III的1/10(质量比),Raney Ni用量为III的1/2,在50℃条件下反应约48小时。(IV)直接在20%盐酸溶液中水解生成精胺盐酸盐(V),水解单步收率可达到36.7%。精胺盐酸盐(V)最终收率约为27%。本合成工艺由于反应原料价格便宜,反应条件温和,单步反应收率较高,同时生产过程中的催化剂和溶剂都可以重复使用,精胺盐酸盐的总收率相对较高,合成成本相对较低,是一种有发展前途的合成精胺的新方法。
二、多胺生物合成抑制剂DFMO在泌尿系肿瘤研究中的应用及展望(论文开题报告)
(1)论文研究背景及目的
此处内容要求:
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景,再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题,并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例:
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
(2)本文研究方法
调查法:该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法:用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法:通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法:通过调查文献来获得资料,从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法:依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法:对研究对象进行“质”的方面的研究,这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法:通过具体的数字,使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法:运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法:这是社会科学用来分析社会现象的一种方法,从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法:通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、多胺生物合成抑制剂DFMO在泌尿系肿瘤研究中的应用及展望(论文提纲范文)
(1)芹菜素对SW620细胞葡萄糖吸收及多胺代谢的影响(论文提纲范文)
摘要 |
Abstract |
引言 |
第一章 文献研究 |
1 芹菜素抗肿瘤作用研究进展 |
2 SGLT1与GLUT1在肿瘤细胞葡萄糖摄取中的作用 |
3 多胺代谢与肿瘤的关系 |
第二章 芹菜素对SW620细胞增殖的抑制作用 |
1 材料 |
2 方法 |
3 结果 |
4 讨论 |
第三章 芹菜素对SW620细胞SGLT1通路及葡萄糖摄取的影响 |
1 材料 |
2 方法 |
3 结果 |
4 讨论 |
第四章 芹菜素对SW620细胞多胺含量的影响 |
1 材料 |
2 方法 |
3 结果 |
4 讨论 |
第五章 芹菜素对SW620细胞ODC/SSAT表达的影响 |
1 材料 |
2 方法 |
3 结果 |
4 讨论 |
第六章 芹菜素对SW620细胞ROS含量及凋亡的影响 |
1 材料 |
2 方法 |
3 结果 |
4 讨论 |
结语 |
参考文献 |
附录 |
在校期间发表的论文情况 |
致谢 |
统计学审核证明 |
(2)芹菜素对人结肠癌细胞SW620增殖与葡萄糖摄取的影响(论文提纲范文)
1 材料与方法 |
1.1 细胞株 |
1.2 试剂 |
1.3仪器 |
1.4 细胞培养 |
1.5 检测细胞增殖抑制率 |
1.6 对SW620细胞摄取葡萄糖的影响 |
1.7 检测葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)及钠-葡萄糖共转运载体(SGLT1)蛋白表达 |
1.8 检测葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)及钠-葡萄糖共转运载体(SGLT1)m RNA的相对表达 |
1.9 统计学处理方法 |
2 结果 |
2.1 对SW620细胞增殖的抑制作用 |
2.2 对SW620细胞葡萄糖消耗的影响 |
2.3 对SW620细胞葡萄糖消耗相关蛋白表达水平的影响 |
2.4 对SW620细胞葡萄糖消耗相关m RNA表达水平的影响 |
3 讨论 |
(3)LSD1介导前列腺癌侵袭、转移的机制研究(论文提纲范文)
博士论文的创新点 |
中文摘要 |
英文摘要 |
英文缩写一览表 |
引言 |
第一部分 LSD1和E-cadherin在前列腺癌中的表达关系 |
前言 |
1.实验材料 |
2.实验方法 |
3.结果 |
4.讨论 |
5.结论 |
附图 |
第二部分 LSD1抑制剂优降宁抑制前列腺癌EMT发生并延缓前列腺癌的进展 |
前言 |
1.实验材料 |
2.实验方法 |
3.结果 |
4.讨论 |
5.结论 |
附图 |
全文总结 |
参考文献 |
综述一 |
综述二 |
参考文献 |
博士期间发表论文情况 |
后记 |
(4)血清氨基酸作为肾透明细胞癌诊断标记物的研究(论文提纲范文)
中英文缩略词对照表 |
摘要 |
ABSTRACT |
前言 |
材料与方法 |
1.研究对象 |
2.主要试剂及设备 |
3.方法 |
结果 |
讨论 |
小结 |
致谢 |
参考文献 |
综述 肾癌生物学标记物的研究现况 |
参考文献 |
攻读硕士学位期间发表的学位论文 |
导师评阅表 |
(5)精脒对Caco-2细胞生长及摄取葡萄糖能力的影响(论文提纲范文)
1材料 |
1.1药物与试剂 |
1.2仪器 |
2方法 |
2.1细胞株及细胞培养 |
2.2MTT法检测细胞增殖抑制率 |
2. 3 SPD对DFMO抑制Caco-2细胞摄取葡萄糖的影响 |
2.4Westernblotting法检测GLUT1蛋白表达 |
2. 5荧光标记2-NBDG检测Caco-2细胞葡萄糖的吸收 |
2.6统计学处理 |
3结果 |
3. 1 SPD对DFMO抑制Caco-2细胞增殖的影响 |
3. 2 SPD对DFMO抑制Caco-2细胞葡萄糖消耗的影响 |
3. 3 SPD对DFMO抑制Caco-2细胞葡萄糖消耗相关蛋白表达的影响 |
3. 4 SPD对DFMO抑制Caco-2细胞摄取2-NBDG后细胞荧光强度变化 |
4讨论 |
(6)肿瘤抑素基因表达与肾癌关系以及鸟氨酸脱羧酶基因表达对肿瘤抑素表达调控作用的研究(论文提纲范文)
中文摘要 |
英文摘要 |
符号说明 |
前言 |
第一部分 人肿瘤抑素原核表达载体的构建、表达、纯化及其多克隆抗体的制备 |
材料与方法 |
结果 |
讨论 |
第二部分 肿瘤抑素基因表达与肾癌关系的研究 |
材料与方法 |
结果 |
讨论 |
第三部分 鸟氨酸脱羧酶基因表达对肿瘤抑素表达调控作用的研究 |
材料与方法 |
结果 |
讨论 |
参考文献 |
博士在读期间发表的论文 |
致谢 |
学位论文评阅及答辩情况表 |
外文论文 |
(7)抑癌基因TSLC1对人前列腺癌T3B细胞增殖、侵袭和转移能力影响的实验研究(论文提纲范文)
中文摘要 |
Abstract |
前言 |
第一部分 稳定表达肺癌抑癌基因—1(TSLC1)人的前列腺癌T_3B细胞系的建立和鉴定 |
摘要 |
AbstraCt |
材料与方法 |
实验结果 |
讨论 |
参考文献 |
第二部分 TSLC1基因对人前列腺癌T_3B细胞增殖和侵袭的生物学特性影响 |
摘要 |
Abstraet |
材料与方法 |
实验结果 |
讨论 |
参考文献 |
第三部分 TSLC1基因对人前列腺癌T_3B细胞成瘤和转移的生物学特性影响 |
摘要 |
Abstract |
材料与方法 |
实验结果 |
讨论 |
参考文献 |
全文总结 |
综述 |
附录 |
致谢 |
(8)多胺生物合成抑制剂二氟甲基鸟氨酸对人膀胱癌细胞的抑制及促凋亡作用研究(论文提纲范文)
1 材料与方法 |
1.1 实验材料 |
1.2 DFMO对EJ细胞生长影响的观察方法 |
1.2.1 实验细胞的制备 |
1.2.2 活细胞摄像 |
1.2.3 细胞计数、绘制细胞生长曲线 |
1.2.4 伊红染色检测 |
1.2.5 绘制细胞生长曲线 |
1.3 DFMO对EJ细胞凋亡影响的检测方法 |
1.3.1 实验分组 |
1.3.2 Tunnel检测步骤 |
1.4 统计学方法 |
2 结果 |
2.1 DFMO对EJ细胞生长的影响 |
2.1.1 活细胞摄像结果 |
2.1.2 伊红染色检测结果 |
2.1.3 细胞生长曲线结果 |
2.2 DFMO对EJ细胞凋亡的影响 |
3讨论 |
(9)植物源食品多胺分析及影响因素的研究(论文提纲范文)
目录 |
主要缩略语 |
摘要 |
ABSTRACT |
前言 |
第一章 文献综述 |
第二章 植物组织多胺含量测定技术(HPLC和TLC) |
第三章 多胺对小鼠肿瘤生长的影响 |
第四章 植物源食品多胺含量测定 |
第五章 环境因素对植物体内多胺含量的影响 |
第一节 干燥储藏和FACE对水稻籽粒多胺形态、组分和含量的影响 |
第二节 小白菜耐盐性与多胺形态、组分和含量的关系 |
第三节 矿质营养对小白菜多胺水平的调控 |
全文结论 |
创新点及存在问题 |
参考文献 |
致谢 |
(10)合成精胺盐酸盐新方法的研究(论文提纲范文)
摘要 |
Abstract |
目录 |
第一章 绪论 |
1.1 多胺概述 |
1.2 多胺的代谢与生物学功能 |
1.2.1 多胺的循环 |
1.2.2 多胺的生物学功能 |
1.2.2.1 多胺与DNA |
1.2.2.2 多胺与蛋白质的生物合成 |
1.3 多胺的应用 |
1.3.1 多胺在肿瘤研究方面的应用 |
1.3.2 多胺在动物方面的应用 |
1.3.3 多胺在植物方面的应用 |
1.3.4 多胺的细胞保护作用 |
1.4 精胺概述 |
1.4.1 精胺的发现 |
1.4.2 精胺的性质 |
1.4.3 精胺的应用 |
1.4.3.1 精胺在医疗方面的应用 |
1.4.3.2 精胺的衍生物及其应用 |
1.5 精胺的制备文献综述 |
1.6 本文研究的目的和内容 |
第二章 精胺盐酸盐的合成新方法研究 |
2.1 引言 |
2.1.1 精胺合成新的探索 |
2.1.2 1,4-丁二胺合成的新探索 |
2.2 精胺盐酸盐的合成 |
2.2.1 精胺盐酸盐的合成路线 |
2.2.2 药品和仪器 |
3.2.3 1,6-二(邻酰基苯磺酰基)-1,6-二氮杂己烷(I)的合成 |
2.2.3.1 合成原理 |
2.2.3.2 实验操作 |
2.2.3.2 结果与讨论 |
2.2.3.2.1 产品表征 |
2.2.3.2.2 催化剂对糖精烃基化反应的影响 |
2.2.3.2.3 不同投料比对糖精烃基化反应的影响 |
2.2.3.2.4 温度对糖精烃基化反应的影响 |
2.2.3.2.5 脱水效果对糖精烃基化反应的影响 |
2.2.3.2.6 影响糖精烃基化反应的其他因素 |
2.2.4 N,N’-二(邻羧基苯磺酰基)1,4-丁二胺(II)的合成 |
2.2.4.1 反应原理 |
2.2.4.2 实验操作 |
2.2.4.3 结果与讨论 |
2.2.4.3.1 产品表征 |
2.2.4.3.2 碱浓度对(I)碱水解收率的影响 |
2.2.5 4,9-二(邻-羧基苯磺酰基)-4,9-双氮杂十二二腈(III)的合成 |
2.2.5.1 合成原理 |
2.2.5.2 实验操作 |
2.2.5.3 结果与讨论 |
2.2.5.3.1 产品表征 |
2.2.5.3.2 反应温度对Michael 加成反应的影响 |
2.2.5.3.3 投料比对Michael 加成反应的影响 |
2.2.5.3.4 反应时间对Michael 加成反应的影响 |
2.2.5.3.5 NaOH 浓度对Michael 加成反应的影响 |
2.2.5.3.6 其他因素对Michael 加成反应的影响 |
2.2.6 5,10-二(邻-羧基苯磺酰基)-1,5,10,14-四氮杂十四烷(IV)及精胺盐酸盐(V)的合成 |
2.2.6.1 反应原理 |
2.2.6.2 实验操作 |
2.2.6.2.1 常压加氢还原 |
2.2.6.2.2 加压加氢还原 |
2.2.6.3 结果与讨论 |
2.2.6.3.1 产品表征 |
2.2.6.3.2 还原方法的探讨 |
2.2.6.3.3 加氢催化剂对III 加氢还原的影响 |
2.2.6.3.4 溶剂对III 加氢还原的影响 |
2.2.6.3.5 反应温度对III 加氢还原的影响 |
2.2.6.3.6 溶剂pH 对III 加氢还原的影响 |
2.2.6.3.7 其他因素对III 加氢还原的影响 |
2.3 小结 |
第三章 总结 |
附图 |
致谢 |
作者简介 |
四、多胺生物合成抑制剂DFMO在泌尿系肿瘤研究中的应用及展望(论文参考文献)
- [1]芹菜素对SW620细胞葡萄糖吸收及多胺代谢的影响[D]. 王晶. 广州中医药大学, 2017(02)
- [2]芹菜素对人结肠癌细胞SW620增殖与葡萄糖摄取的影响[J]. 王晶,王桂香,陈婷,臧林泉,黎同明. 中药新药与临床药理, 2016(06)
- [3]LSD1介导前列腺癌侵袭、转移的机制研究[D]. 王敏. 武汉大学, 2016(06)
- [4]血清氨基酸作为肾透明细胞癌诊断标记物的研究[D]. 夏韩. 新疆医科大学, 2016(06)
- [5]精脒对Caco-2细胞生长及摄取葡萄糖能力的影响[J]. 陈婷,王桂香,潘雪刁,王晶,黎同明. 广东药学院学报, 2015(04)
- [6]肿瘤抑素基因表达与肾癌关系以及鸟氨酸脱羧酶基因表达对肿瘤抑素表达调控作用的研究[D]. 徐春晓. 山东大学, 2010(09)
- [7]抑癌基因TSLC1对人前列腺癌T3B细胞增殖、侵袭和转移能力影响的实验研究[D]. 袁林. 华中科技大学, 2009(11)
- [8]多胺生物合成抑制剂二氟甲基鸟氨酸对人膀胱癌细胞的抑制及促凋亡作用研究[J]. 兰晓煦,武进峰. 肿瘤研究与临床, 2006(12)
- [9]植物源食品多胺分析及影响因素的研究[D]. 周一峰. 南京农业大学, 2005(12)
- [10]合成精胺盐酸盐新方法的研究[D]. 丁军. 东南大学, 2005(01)